周文斌 洪家麗 李 路 李 燕 黃梓芮 郭偉靈 倪 莉 饒平凡 劉 斌 呂旭聰，3，*

（1 福建農(nóng)林大學(xué)食品科學(xué)學(xué)院 福州350002

2 福建農(nóng)林大學(xué) 國(guó)家菌草工程技術(shù)研究中心 福州350002

3 福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 福州350002

4 福州大學(xué)食品科學(xué)技術(shù)研究所 福州350108）

近年來(lái)，不良的生活習(xí)慣使得肥胖和脂質(zhì)代謝紊亂在人群中的發(fā)生比例越來(lái)越高[1]。脂質(zhì)代謝紊亂與高血壓、Ⅱ型糖尿病、缺血性心腦血管疾病等慢性病的發(fā)病緊密相關(guān)[2]，不僅影響生活質(zhì)量，而且會(huì)危及生命。雖然目前臨床上有許多降脂藥物被廣泛應(yīng)用，但長(zhǎng)期服用此類藥物會(huì)產(chǎn)生依賴性及明顯的副作用。挖掘安全、有效的天然食源性活性物質(zhì)來(lái)改善脂質(zhì)代謝紊亂已成為食品營(yíng)養(yǎng)學(xué)領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)[3-4]。

灰樹(shù)花又名栗子蘑，貝葉多孔菌，蓮花菌，日本稱之為舞茸[5]。其香味濃郁，質(zhì)地脆嫩，口感極佳，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高，人體氨基酸含量高，維生素及礦物質(zhì)含量豐富，在民間有悠久的食用歷史，是一種食、藥兼用的珍稀食用菌[6-7]。灰樹(shù)花中含有大量的活性物質(zhì)，具有抗癌，抑制高血壓，抑制肥胖癥，預(yù)防動(dòng)脈硬化，促進(jìn)肝功能增強(qiáng)，改善脂質(zhì)代謝等多種生理活性[8-9]。然而，灰樹(shù)花中具體是哪些組分具有改善脂質(zhì)代謝作用至今尚未明確。改善脂質(zhì)代謝活性組分的體外篩選方法主要有體外模擬膽汁膠束法、脂肪酶抑制劑篩選法、細(xì)胞內(nèi)膽固醇流出法和基于肝臟X受體激活劑的細(xì)胞篩選模型等[10-11]。細(xì)胞內(nèi)膽固醇流出法和肝臟X受體激活劑這兩種方法均需要進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)和造模，不僅費(fèi)時(shí)費(fèi)力，而且生物重現(xiàn)性有待提高。體外模擬膽汁膠束法和脂肪酶抑制劑篩選法具有靈敏可靠、簡(jiǎn)單易行、實(shí)用性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)[12]。

本文旨在尋找灰樹(shù)花中具有改善脂質(zhì)代謝紊亂的活性組分。采用順序溶劑提取不同極性的灰樹(shù)花提取物，然后通過(guò)模擬膽汁膠束和脂肪酶抑制兩種體外篩選方法，快速篩選灰樹(shù)花中具有改善脂質(zhì)代謝的活性提取物，最后利用單因素以及響應(yīng)面法進(jìn)一步優(yōu)化提取工藝[13]，并通過(guò)UPLCQTOF-MS/MS方法對(duì)灰樹(shù)花活性提取物進(jìn)行組分鑒定[14]。本研究結(jié)果對(duì)于灰樹(shù)花及其活性產(chǎn)物的應(yīng)用推廣具有重要的意義。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

灰樹(shù)花，購(gòu)于井岡山井祥菌草生態(tài)科技股份有限公司；膽酸鹽，上海源葉生物科技有限公司；總膽汁酸和脂肪酶測(cè)試盒，南京建成生物工程研究所（貨號(hào)分別為E003、A054）；己烷、氯仿、乙酸乙酯、甲醇、無(wú)水乙醇、無(wú)水碳酸鈉等，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，純度為國(guó)藥分析純級(jí)。

1.2 儀器與設(shè)備

紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)（UV-1800），上海美譜達(dá)儀器有限公司；電子天平（AL204），梅特勒-托利多儀器有限公司；離心機(jī)（SL-3612），科大創(chuàng)新股份有限公司中佳分公司；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（R201），上海申生科技有限公司；超聲波清洗器（KQ-500VDE），昆山市超聲儀器有限公司。

1.3 方法

1.3.1 灰樹(shù)花中改善脂質(zhì)代謝活性組分的提取方法 稱取50 g灰樹(shù)花粉末，分別用己烷、氯仿、乙酸乙酯、甲醇和去離子水對(duì)灰樹(shù)花粉末依次進(jìn)行溶劑提取。加入500mL己烷，在室溫下懸浮振搖（200 r/min）2 h，混合液離心沉淀后，取上清液真空抽濾，殘?jiān)栏珊蠹尤胂乱粋€(gè)溶劑重復(fù)上訴步驟，收集濾液獲得己烷提取物（HE）、氯仿提取物（CE）、乙酸乙酯提取物（EAE）、甲醇提取物（ME）和水提取物（WE）。上述有機(jī)提取物經(jīng)真空旋轉(zhuǎn)濃縮，所得濃縮液于37℃烘干至恒重，WE凍干并稱重。HE、CE、EAE用二甲基亞砜（DMSO）溶解，ME、WE用去離子水溶解待測(cè)。

稱取50 g灰樹(shù)花粉末，利用不同濃度的乙醇溶液提取灰樹(shù)花，分別與500 mL乙醇溶液（體積分?jǐn)?shù)分別為100%，80%，60%，40%，20%，0%）在40℃，400W超聲提取30min，依次獲得100%EE、80%EE、60%EE、40%EE、20%EE、0%EE濾液，真空濃縮至膏狀，凍干并稱重。用二甲基亞砜（DMSO）溶解待測(cè)。

1.3.2 模擬膽汁膠束法體外篩選 TBA酶標(biāo)儀微板測(cè)定法：將相應(yīng)的膽酸鹽溶于生理鹽水中制成濃度為2μmol/mL的膽酸鹽溶液。吸取0.5mL 80 mg/mL的各組分提取物，加入1 mL鹽酸溶液（0.01mol/L）于37℃恒溫振蕩消化1 h，再加入0.1mL氫氧化鈉溶液（0.1mol/L），混勻，加入5mL膽酸鹽溶液（含10mg/mL的胰酶），密封，置于37℃振蕩培養(yǎng)1 h，10 000 r/min離心10min，取上清液待測(cè)。

使用總膽汁酸（TBA）測(cè)試盒（貨號(hào)：E003，酶比色法，南京建成）。按試劑盒說(shuō)明書(shū)操作，配制試劑1應(yīng)用液（試劑B液倒入試劑A液中，VA液∶VB液=9∶1，混勻），將30μL樣品加入240μL試劑一應(yīng)用液，混勻，37℃培養(yǎng)3～5min，在波長(zhǎng)505 nm處讀取吸光度（A1）。加入60μL試劑2，混勻，37℃培養(yǎng)5min，在波長(zhǎng)505 nm處讀取吸光度（A2）。

△A=A2-A1

游離TBA含量C（μmol/L）=△A測(cè)定/△A標(biāo)準(zhǔn)×標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μmol/L）

結(jié)合率=[10（μmol）-C（μmol/L）×6.6（mL）]/10（μmol）

1.3.3 脂肪酶抑制體外篩選 利用0.1 mol/L KH2PO4-K2HPO4緩沖液（pH7.4）配制0.5 mg/mL胰脂肪酶。采用南京建成的脂肪酶試劑盒，貨號(hào)為A054。取底物溶液在37℃預(yù)熱5min，加入4mg/mL樣品，立即混勻，10min后加入胰脂肪酶溶液，快速混勻，在波長(zhǎng)420 nm處讀取吸光度值A(chǔ)1。將此比色液于37℃水浴10min，在波長(zhǎng)420 nm處讀取吸光度值A(chǔ)2。求出2次測(cè)定的吸光度的差值（△A1=A1-A2）。

脂肪酶活力（U/L）=△A/As×標(biāo)準(zhǔn)品濃度（454 μmol/L）×反應(yīng)液體積（205μL）/取樣量（5μL）/反應(yīng)時(shí)間（10min）

抑制率（%）=（1-△A2/△A1）×100

△A1=A1-A2，△A2=A3-A4

式中：A1、A2、A3、A4與As分別為空白組（只有底物）、無(wú)抑制劑組（酶和底物）、對(duì)照組（抑制劑和底物）、加抑制劑組（酶、底物和抑制劑）和標(biāo)準(zhǔn)品在波長(zhǎng)420 nm處的吸光度。

1.3.4 灰樹(shù)花乙酸乙酯EAE提取物的提取工藝單因素試驗(yàn) 取灰樹(shù)花粉末按1∶10的料液比加入己烷，室溫懸浮振搖（200 r/min）2 h，混合液經(jīng)真空過(guò)濾，殘?jiān)栏珊蠹尤肼确拢貜?fù)上述步驟，晾干殘?jiān)鼈溆谩?/p>

1.3.4.1 料液比對(duì)提取物得率的影響 準(zhǔn)確稱取上述殘?jiān)骷尤肓弦罕?∶5、1∶10、1∶20、1∶25、1∶50（g/mL）的乙酸乙酯，在400W功率下超聲提取5min，于20℃200 r/min搖床懸浮2 h，將混合物真空抽濾，收集濾液。有機(jī)濾液真空濃縮，于37℃烘干至恒重。

1.3.4.2 超聲時(shí)間對(duì)提取物得率的影響 準(zhǔn)確稱取50 g上述殘?jiān)?，加?00mL乙酸乙酯，在400 W功率下超聲提取0，10，20，40，60min，于20℃200 r/min搖床懸浮2 h，將混合物真空抽濾，收集濾液。有機(jī)濾液真空濃縮，于37℃烘干至恒重。

1.3.4.3 提取溫度對(duì)提取物得率的影響 準(zhǔn)確稱取50 g上述殘?jiān)?，加?00mL乙酸乙酯，在400 W功率下超聲提取5min，分別于20，30，40，50℃200 r/min搖床懸浮2 h，將混合物真空抽濾，收集濾液。有機(jī)濾液真空濃縮，于37℃烘干至恒重。

1.3.5 灰樹(shù)花乙酸乙酯提取物（EAE）的提取工藝響應(yīng)面優(yōu)化設(shè)計(jì) 根據(jù)1.3.4節(jié)單因素試驗(yàn)結(jié)果，分別選取料液比（A）、超聲時(shí)間（B）、提取溫度（C）3個(gè)因素為自變量，以提取率作為響應(yīng)值，利用Design-Expert8.0軟件中的Box-Behnken Design進(jìn)行灰樹(shù)花EAE提取工藝的響應(yīng)面優(yōu)化分析設(shè)計(jì)。設(shè)計(jì)的因素水平見(jiàn)表1。

1.3.6 灰樹(shù)花乙酸乙酯提取物（EAE）中組分的LC-MS/MS分析鑒定 色譜條件：BEH C18色譜柱（2.1mm×100mm，1.7μm）；流動(dòng)相為0.05%甲酸水溶液（A）和乙腈（B）。采用梯度洗脫程序：0～0.5min 98%A～90%A，0.5～3min 90%A～75%A，3～18min 75%A～65%A，18～27min 65%A～98%A，最后用98%A持續(xù)3min；柱溫45℃，流速0.6mL/min。

表1 響應(yīng)面設(shè)計(jì)因素水平表Table1 Factors and levels of the response surface design

質(zhì)譜條件：離子源：ESI；檢測(cè)方式：負(fù)離子電噴霧模式；掃描范圍50～1 200 u，掃描時(shí)間：0.10 s；毛細(xì)管電壓3.0 kV，錐孔電壓25 V；去溶劑氣N2，去溶劑氣溫度450℃；源溫度120℃；去溶劑氣流速500 L/h；低碰撞能量掃描的碰撞能量為2 V，高碰撞能量掃描的碰撞能量為30～70 V。質(zhì)譜儀和UPLC系統(tǒng)由MassLynx 4.1軟件（美國(guó)Waters公司）控制。

2 結(jié)果與分析

2.1 灰樹(shù)花不同溶劑提取物得率

灰樹(shù)花經(jīng)上述方法提取，分別得到11種組分，各提取組分的得率見(jiàn)表2。其中，水提物的得率最大，為25.18%；灰樹(shù)花EAE的得率最低，僅0.30%。2種提取方法普遍出現(xiàn)溶劑極性越高，得率越高的現(xiàn)象。

表2 不同溶劑提取的灰樹(shù)花活性組分得率Table2 The yields of active components from Grifola frondosa

2.2 灰樹(shù)花不同溶劑提取物對(duì)膽酸鹽結(jié)合的能力

活性組分對(duì)脫氧膽酸鈉和膽酸鈉結(jié)合越多，越能降低機(jī)體的脫氧膽酸鈉和膽酸鈉含量，促進(jìn)膽固醇向膽汁酸的轉(zhuǎn)化，從而降低肝臟中的膽固醇累積，促進(jìn)血液中膽固醇向肝臟中轉(zhuǎn)移，達(dá)到降血脂的效果?；覙?shù)花不同溶劑提取物（質(zhì)量濃度80mg/mL）對(duì)脫氧膽酸鈉的結(jié)合能力見(jiàn)圖1。不同提取物（質(zhì)量濃度80mg/mL）對(duì)脫氧膽酸鈉的結(jié)合能力分別為EAE＞CE＞HE＞ME＞100%EE＞80%EE＞60%EE＞0%EE＞40%EE＞20%EE＞W(wǎng)E。其中，灰樹(shù)花EAE的結(jié)合量最高，達(dá)24.59μmol/100mg。

灰樹(shù)花不同溶劑提取物（濃度80mg/mL）對(duì)膽酸鈉的結(jié)合能力見(jiàn)圖2。不同提取物（質(zhì)量濃度80mg/mL）對(duì)膽酸鈉的結(jié)合能力分別EAE＞CE＞100%EE＞HE＞ME＞80%EE＞60%EE＞20%EE＞W(wǎng)E＞40%EE＞0%EE。其中，灰樹(shù)花EAE的結(jié)合量最高，達(dá)22.19μmol/100mg。

2.3 灰樹(shù)花不同溶劑提取物對(duì)胰脂肪酶的抑制活性

由圖3可知，作為目前市場(chǎng)上最成功的胰脂肪酶抑制劑-奧利司他在相同試驗(yàn)條件下對(duì)胰脂肪酶抑制效果最好，其抑制率達(dá)96.84%。不同灰樹(shù)花提取物（質(zhì)量濃度4mg/mL）對(duì)胰脂肪酶的抑制效果最好，其抑制率達(dá)96.84%。不同灰樹(shù)花提取物（質(zhì)量濃度4mg/mL）對(duì)胰脂肪酶的抑制能力相差很大，為EAE＞HE＞40%EE＞100%EE＞0%EE＞ME＞80%EE＞W(wǎng)E＞20%EE＞CE＞60%EE。其中EAE抑制脂肪酶的活性最高，達(dá)73.15%。

圖1 微板法灰樹(shù)花不同溶劑提取物與脫氧膽酸鈉的結(jié)合能力Fig.1 The binding of sodium deoeycholate of different extracts from Grifola frondosa by microplate method

圖2 微板法灰樹(shù)花不同溶劑提取物與膽酸鈉的結(jié)合能力Fig.2 The binding of sodium cholate of different extracts from Grifola frondosa by microplate method

2.4 灰樹(shù)花乙酸乙酯提取物（EAE）的提取工藝的單因素試驗(yàn)

由于篩選的灰樹(shù)花活性組分乙酸乙酯EAE提取物提取率很低，所以對(duì)其進(jìn)行單因素和響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)，確定其最佳工藝條件，以提高其得率。

2.4.1 料液比的選擇 料液比是利用物質(zhì)在固相和液相之間存在的濃度差，即其在兩相間的傳質(zhì)推動(dòng)力，影響物質(zhì)的提取率。適當(dāng)增大液料比，增大兩相間的濃度差時(shí)，可促進(jìn)固相中物質(zhì)向液相中釋放和擴(kuò)散。如圖4所示，液料比在5∶1到25∶1之間，隨著溶劑的增大，提取率逐漸增大。當(dāng)溶劑液料比超過(guò)25∶1時(shí)，提取中溶劑增加得率不再增大。最終選擇液料比為25∶1（mL/g）。

2.4.2 超聲時(shí)間的選擇 如圖5所示，當(dāng)超聲時(shí)間40min時(shí)EAE提取物得率達(dá)到最大值。超聲波可促進(jìn)物料分子振動(dòng)加劇，增大組織的破碎程度，使有效成分溶出增加。當(dāng)超聲時(shí)間超過(guò)40min時(shí)，得率緩慢下降。最終選擇40min作為最佳提取時(shí)間。

圖3 灰樹(shù)花不同溶劑提取物對(duì)胰脂肪酶活性的抑制率Fig.3 Inhibitory rates of pancreatic lipase by extracts from Grifola frondosa with different solvent

圖4 料液比對(duì)灰樹(shù)花EAE提取物得率的影響Fig.4 Influence of liquid-to-solid ratio on the yield of EAE from Grifola frondosa

2.4.3 提取溫度的選擇 如圖6所示，在一定溫度范圍，得率隨著浸提溫度的升高而增加，在溫度為40℃時(shí)得率達(dá)到最高值。浸提溫度的升高有助于加快活性成分的布朗運(yùn)動(dòng)，有利于活性成分在提取溶劑中的溶出。因本試驗(yàn)所用提取溶劑為乙酸乙酯，溫度過(guò)高溶劑易揮發(fā)而損失，故得率下降。最終選擇40℃為最適宜的浸提溫度。

圖5 超聲時(shí)間對(duì)EAE提取物得率的影響Fig.5 Influence of ultrasound time on the yield of EAE from Grifola frondosa

圖6 提取溫度對(duì)EAE提取物得率的影響Fig.6 Influence of extraction temperature on the yield of EAE from Grifola frondosa

2.5 灰樹(shù)花乙酸乙酯提取物（EAE）的提取工藝的響應(yīng)面優(yōu)化分析

2.5.1 響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果 依據(jù)2.4節(jié)單因素試驗(yàn)結(jié)果，根據(jù)表1的因素水平表對(duì)灰樹(shù)花EAE提取進(jìn)行響應(yīng)面優(yōu)化設(shè)計(jì)。以提取物的提取率（%）為響應(yīng)值，采用Box-Benhnken中心組合，對(duì)料液比、超聲時(shí)間、提取溫度3個(gè)因素，做三因素三水平優(yōu)化設(shè)計(jì)試驗(yàn)。利用Design Expert8.0軟件對(duì)表3試驗(yàn)結(jié)果做回歸分析，擬合模型后得到灰樹(shù)花EAE提取得率（Y）對(duì)料液比（A）、超聲時(shí)間（B）、提取溫度（C）的多元二次回歸方程：

Y=0.43+0.024A-0.029B+0.011C-0.012AB+0.023AC+0.019BC-0.037A2-0.00565B2+0.098C2

對(duì)回歸模型進(jìn)行方差分析和系數(shù)顯著性檢驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表4?；覙?shù)花EAE得率響應(yīng)面模型的F值為18.27，P＜0.01差異極顯著；失擬項(xiàng)的F值為5.38，P=0.0689＞0.05，差異不顯著，這說(shuō)明該模型的擬合性較好，數(shù)據(jù)沒(méi)有異常點(diǎn)，可忽略由不確定因素所帶來(lái)的影響。模型的決定系數(shù)R2=0.9592，說(shuō)明提取率的變化有95.92%來(lái)源于所選3個(gè)變量。該模型中一次項(xiàng)中A、B對(duì)該模型的影響達(dá)到極顯著（P＜0.01）水平，C對(duì)該模型的影響不顯著。

從顯著性來(lái)看，對(duì)響應(yīng)值（即提取率）的影響因素的主次順序?yàn)锽＞A＞C，即超聲時(shí)間＞料液比＞提取溫度。經(jīng)響應(yīng)面模擬的回歸模型優(yōu)化，獲得最優(yōu)提取條件：液料比29.03∶1（mL/g），超聲時(shí)間30 min，浸提溫度50℃。在該條件下灰樹(shù)花乙酸乙酯提取物（EAE）的理論得率為0.568%。

表3 響應(yīng)面優(yōu)化設(shè)計(jì)結(jié)果Table3 Experiment results of Box-Benhnken design

（續(xù)表3）

表4 灰樹(shù)花乙酸乙酯提取物（EAE）提取得率回歸模型方差分析Table4 Analysis of variance for quadric regression model of experiment of EAE from Grifola frondosa

2.5.2 交互項(xiàng)作用對(duì)灰樹(shù)花乙酸乙酯提取物（EAE）得率的影響 根據(jù)回歸模型繪制響應(yīng)曲面的直觀3D圖（圖7）所示：以曲面坡度的平緩和陡峭程度作為因素對(duì)提取物得率的響應(yīng)靈敏度反映指標(biāo)。從圖7和表4可以可看出，3個(gè)因素的交互作用都不顯著，說(shuō)明沒(méi)有交互作用。

圖7 各交互因素對(duì)灰樹(shù)花乙酸乙酯提取物（EAE）得率的響應(yīng)面3D圖Fig.7 3D modle graphs for the effects of interaction on the extraction ratio of EAE from Grifola frondosa

2.6 最優(yōu)提取條件的驗(yàn)證

為了方便實(shí)際操作，將2.5節(jié)中得到的提取條件作修正，即：液料比29：1（mL/g），超聲時(shí)間30min，浸提溫度50℃。測(cè)得3組平行驗(yàn)證試驗(yàn)的實(shí)際得率平均值為0.565%，與理論值基本相符。后續(xù)試驗(yàn)中均以實(shí)際操作條件為準(zhǔn)。具體數(shù)據(jù)見(jiàn)表5。

2.7 灰樹(shù)花乙酸乙酯提取物（EAE）中組分的UPLC-QTOF-MS/MS分析鑒定結(jié)果

灰樹(shù)花乙酸乙酯提取物（EAE）中各組分在UPLC液相洗脫中被有效分離，各色譜峰對(duì)應(yīng)的質(zhì)譜結(jié)果見(jiàn)圖8。

表5 最優(yōu)提取條件驗(yàn)證結(jié)果Table5 The verification results in the optimal extraction conditions

圖8 灰樹(shù)花乙酸乙酯提取物（EAE）的UPLC-QTOF-MS總離子流色譜圖Fig.8 The UPLC-QTOF-MS chromatograms of ethyl acetate extract（EAE）of Grifola frondosa

圖9 灰樹(shù)花乙酸乙酯提取物（EAE）組分的質(zhì)譜鑒定Fig.9 The mass spectrum of ethyl acetate extract（EAE）of Grifola frondosa

根據(jù)各色譜峰所對(duì)應(yīng)的質(zhì)譜信息進(jìn)行比對(duì)分析，主要對(duì)比其分子質(zhì)量信息，通過(guò)Phenol-Explorer多酚數(shù)據(jù)庫(kù)（http：//phenol-explorer.eu/）及文獻(xiàn)信息進(jìn)行化合物的定性分析，可初步判斷灰樹(shù)花乙酸乙酯提取物（EAE）中的主要成分是：野靛黃素（Pseudobaptigenin）[http：//phenol-explorer.eu/metabolites/882]、矢車菊素-3-O-蕓香糖苷（Cyanidin 3-O-xylosyl-rutinoside）[http：//phenol-explorer.eu/compounds/62]。其中，野靛黃素屬于異黃酮類是灰樹(shù)花乙酸乙酯提取物（EAE）中最主要的成分，矢車菊素-3-O-蕓香糖苷屬于花青苷類。對(duì)于其它5個(gè)峰未在Phenol-Explorer多酚數(shù)據(jù)庫(kù)中匹配上，可能是這5個(gè)物質(zhì)不屬于多酚類化合物。

表6 灰樹(shù)花乙酸乙酯提取物（EAE）的UPLC-TOF-MS鑒定結(jié)果Table6 The identification results of ethyl acetate extract（EAE）of Grifola frondosa by UPLC-TOF-MS

3 結(jié)論

本研究共提取到11種灰樹(shù)花提取物，利用模擬膽汁膠束法、脂肪酶抑制進(jìn)行體外篩選，結(jié)果表明：灰樹(shù)花乙酸乙酯提取物（EAE）對(duì)脫氧膽酸鈉和膽酸鈉的結(jié)合能力是最高的，其中對(duì)脫氧膽酸鈉的吸附量為24.59μmol/100mg，對(duì)膽酸鈉的吸附量為22.19μmol/100mg；灰樹(shù)花乙酸乙酯提取物（EAE）對(duì)胰脂肪酶的抑制活性最高（達(dá)73.15%），僅次于陽(yáng)性藥物奧利司他。

灰樹(shù)花乙酸乙酯提取物（EAE）活性組分的提取率較低。本研究通過(guò)單因素和響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)，確定了灰樹(shù)花乙酸乙酯提取物（EAE）活性組分的最佳提取工藝條件：液料比29∶1（mL/g），超聲時(shí)間30min，浸提溫度50℃。在此條件下做3組平行試驗(yàn)驗(yàn)證，得到3組實(shí)際得率的平均值為0.565%。

對(duì)灰樹(shù)花乙酸乙酯提取物（EAE）活性組分的LC-MS/MS鑒定結(jié)果：其主要成分是野靛黃素（Pseudobaptigenin）和矢車菊素-3-O-蕓香糖苷（Cyanidin 3-O-xylosyl-rutinoside）。其中，野靛黃素屬于異黃酮類，矢車菊素-3-O-蕓香糖苷屬于花青苷類。其它5個(gè)色譜峰未在Phenol-Explorer多酚數(shù)據(jù)庫(kù)中匹配上，可能是這5個(gè)物質(zhì)不屬于多酚類化合物。后續(xù)研究還有待采用其它化合物數(shù)據(jù)庫(kù)或核磁共振（NMR）等進(jìn)行鑒定。