劉 昊，黃 瑩，江海峰，苗 雨，阮繼剛

食管癌是最常見的惡性腫瘤之一。據(jù)世界衛(wèi)生組織國(guó)際癌癥研究署發(fā)布的最新癌癥統(tǒng)計(jì)報(bào)告數(shù)據(jù)顯示，食管癌的發(fā)病率和死亡率逐年增加，居發(fā)病率的第8位、死亡率的第6位，而我國(guó)的食管癌約占全世界的50%，其發(fā)病率居第3位，死亡率居第4位，且存在地域差異性[1-3]。表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)通過膜表面?zhèn)鞲衅髡{(diào)控細(xì)胞的增殖、侵襲以及血管生成，過度激活可致細(xì)胞異常增長(zhǎng)，發(fā)生癌變[4- 5]。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)對(duì)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移起著重要作用[6]。Ki67 即細(xì)胞核相關(guān)抗原，與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、分期、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)及預(yù)后等多方面均存在性相關(guān)[7-9]。本研究采用免疫組化方法檢測(cè)食管癌及癌旁正常組織中EGFR、VEGF 和Ki67的表達(dá)情況，分析其與食管癌病理類型、浸潤(rùn)深度之間的關(guān)系，并探討三者聯(lián)合檢驗(yàn)的臨床應(yīng)用價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料：收集寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院2015年1月-2018年12月經(jīng)病理診斷確診的食管癌手術(shù)病理標(biāo)本104例，病理類型為鱗狀細(xì)胞癌。分化程度:高分化33例，中分化31例，低分化40例;浸潤(rùn)深度：侵及達(dá)固有肌層者(T1-T2)54例，侵及外膜層至鄰近結(jié)構(gòu)者(T3-T4)50例;淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移:發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者39例，未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者65例；遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移：發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者15例，未發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者89例。所有患者均為首次就診，未進(jìn)行過放療、化療及其他特殊治療。收集資料均含有完整的臨床資料，包括病人的分化程度、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移情況。排除心、肝、腦、腎等其他疾病。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法:免疫組織化學(xué)取術(shù)后食管癌組織及癌旁正常食管組織石蠟切片。采用Dako Link Omnis 染色系統(tǒng)，以常規(guī)SP免疫組化染色法完成其免疫組化檢測(cè)。

1.3 結(jié)果判讀:染色結(jié)果按照雙盲法閱片判斷。在不了解患者的臨床資料的情況下，由兩位病理醫(yī)師對(duì)免疫組化染色結(jié)果進(jìn)行評(píng)估，根據(jù)腫瘤細(xì)胞染色程度以及陽性細(xì)胞所占百分比進(jìn)行綜合評(píng)分。

1.3.1 陽性判讀方法：EGFR染色表達(dá)主要定位于細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，棕黃色顆粒為陽性細(xì)胞；VEGF染色表達(dá)主要定位細(xì)胞膜及細(xì)胞漿，以胞質(zhì)呈棕黃色為陽性細(xì)胞；Ki67染色表達(dá)定位于細(xì)胞核，呈棕黃色顆粒為陽性細(xì)胞。

1.3.2 鏡下病理評(píng)分：顏色深淺0～3分，淡藍(lán)色為0分，淺黃色為1 分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。陽性細(xì)胞數(shù)量< 25%為1分，25%～50%為2分，>50%為3分。兩者乘積≤2分為陰性，2～4分(+)，5～8分為(++)，>9分為(+++)。陽性細(xì)胞百分比分為4級(jí)：強(qiáng)陽性(+++，>50%)，陽性(++，25%～50%)，弱陽性(+，10%～25%)，陰性(-，<10%)。

2 結(jié)果

2.1 EGFR、VEGF、Ki67在食管癌組織及癌旁組織中的表達(dá):食管癌患者癌組織標(biāo)本中EGFR、VEGF、Ki67表達(dá)陽性率均高于癌旁正常食管黏膜組織標(biāo)本，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

表1 EGFR、VEGF、Ki67在食管癌患者中表達(dá)水平

2.2 食管癌患者EGFR、VEGF、Ki67表達(dá)水平與病理參數(shù)的關(guān)系:食管癌患者EGFR表達(dá)水平與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移無關(guān)(P>0.05)，而與分化程度、浸潤(rùn)深度有關(guān)(P<0.05) ；VEGF 表達(dá)水平與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移無關(guān)(P>0.05)，而與分化程度、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05) ；Ki67表達(dá)水平與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、分化程度、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)(P>0.05)，見表2-表4。

表2 食管癌患者EGFR表達(dá)水平與病理參數(shù)的關(guān)系[n(%)]

表3 食管癌患者VEGF表達(dá)水平與病理參數(shù)的關(guān)系[n(%)]

表4 食管癌患者Ki67表達(dá)水平與病理參數(shù)的關(guān)系[n(%)]

2.3 食管癌組織中EGFR、VEGF、Ki67蛋白表達(dá)之間的關(guān)系:食管癌患者癌組織EGFR表達(dá)陽性率與VEGF表達(dá)陽性率呈正相關(guān)(P<0.05)，EGFR表達(dá)陽性率與Ki67表達(dá)陽性率呈正相關(guān)(P<0.05)，VEGF表達(dá)陽性率與Ki67表達(dá)陽性率無相關(guān)性(P>0.05)，見表5。

表5 食管癌組織中EGFR、VEGF、Ki67蛋白表達(dá)之間的關(guān)系

3 討論

EGFR作為原癌基因Cerb-1的表達(dá)產(chǎn)物之一而普遍存在于人體內(nèi)，在多種內(nèi)外致癌因子共同作用下，EGFR與相應(yīng)配體結(jié)合，激活下游信號(hào)傳導(dǎo)通路，使得細(xì)胞異常增生，從而導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。Jiang D等[10]研究發(fā)現(xiàn)EGFR在食管癌患者中普遍高表達(dá)，陽性率為40%～80%，與腫瘤的增殖、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移均密切相關(guān)，提示 EGFR 可能參與食管癌的發(fā)生發(fā)展過程。本研究中，104例患者的食管癌組織中EGFR的陽性表達(dá)率為86.54%，高于癌旁組織的62.50%，兩者有顯著差異，與有關(guān)[11]研究結(jié)果相似。本研究發(fā)現(xiàn)食管癌組織中EGFR的表達(dá)與分化程度及浸潤(rùn)深度有關(guān)，隨食管癌惡性程度增加，T分期越高，EGFR蛋白表達(dá)的陽性率也隨之增加，提示EGFR有促進(jìn)食管癌的生長(zhǎng)作用。但本研究中EGFR與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無明確統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，考慮所選擇樣本中食管癌合并淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者與無淋巴轉(zhuǎn)移的患者病例數(shù)相當(dāng)，因此所獲取結(jié)果可能與樣本的選擇偏倚有關(guān)，具體原因需進(jìn)一步研究。

VEGF作為血小板源性生長(zhǎng)因子家族成員，可調(diào)節(jié)內(nèi)皮細(xì)胞的分裂和增殖，并作為重要的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)刺激因子參與腫瘤血管的形成過程。在惡性腫瘤細(xì)胞中VEGF呈高度表達(dá)，并且其與腫瘤的侵襲性轉(zhuǎn)移和預(yù)后密切相關(guān)[12-13]。本研究結(jié)果顯示，VEGF在104例患者的食管癌組織中的陽性表達(dá)率為88.46%，顯著高于癌旁組織，與孫文澤等[14]報(bào)道的研究結(jié)果一致。此外，研究還發(fā)現(xiàn)VEGF的高表達(dá)與腫瘤的分化程度、浸潤(rùn)深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系密切，考慮一方面VEGF可以促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的遷移與增殖，并誘導(dǎo)腫瘤血管的新生，為腫瘤細(xì)胞的增殖提供所需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)；另一方面腫瘤細(xì)胞為了進(jìn)一步增殖，需分泌更高水平的VEGF，因此，在低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等惡性程度較高的食管癌患者中VEGF的表達(dá)水平均較高[15]。

Ki67是反映細(xì)胞增殖活性的指標(biāo)，其表達(dá)高低提示細(xì)胞增殖狀態(tài)，指標(biāo)越高，腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)活躍[16]。本研究結(jié)果顯示，104例患者的食管癌組織中Ki67的表達(dá)率為86.54%，癌旁組織中的表達(dá)率為75%，兩者有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，表明Ki67的高表達(dá)與食管癌相關(guān)。但本研究中Ki67表達(dá)水平與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、分化程度、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)，與國(guó)內(nèi)外研究有一定差異，一方面考慮其特異性不高，另一方面與樣本量及地域性差異有關(guān)，后續(xù)還需擴(kuò)大樣本量進(jìn)一步研究。

本組結(jié)果顯示，食管癌組織中EGFR的表達(dá)陽性率與VEGF的表達(dá)陽性率呈正相關(guān)，EGFR表達(dá)陽性率與Ki67表達(dá)陽性率呈正相關(guān)，考慮三種蛋白在食管癌的發(fā)生發(fā)展過程中具有協(xié)同促進(jìn)作用，聯(lián)合檢測(cè)EGFR、VEGF、Ki67蛋白的表達(dá)，可以作為篩選食管癌高危個(gè)體的生物學(xué)指標(biāo)?？紤]到EGEF與VEGF二者的過表達(dá)均與食管癌的浸潤(rùn)深度和分化程度呈正相關(guān)，這可能與食管癌的發(fā)展與演變密切相關(guān)，因此二者的聯(lián)合檢測(cè)對(duì)進(jìn)展期食管癌的預(yù)后判斷有重要意義。其中EGFR與Ki67均與腫瘤細(xì)胞增殖有關(guān)，且多項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)EGFR為細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)的上游因子，由此推測(cè)的EGFR過表達(dá)可能先于Ki67，并對(duì)Ki67的表達(dá)有正向調(diào)節(jié)作用。