代文成，張 勇，余 珍，何美香，郭曉利，馬曉蓉，王麗霞，馬光娟△

(1.新疆維吾爾自治區(qū)婦幼保健院產(chǎn)前診斷中心，新疆烏魯木齊 830000；2.新疆普瑞賽新醫(yī)學檢驗所，新疆烏魯木齊 830000)

細胞遺傳學方法的金標準為體外細胞培養(yǎng)及染色體核型分析，可以準確檢測出染色體非整倍體及染色體倒位、易位、大于10 Mb的重復和缺失等結(jié)構(gòu)異常[1]。目前應用較多的常見染色體非整倍體快速產(chǎn)前診斷技術(shù)包括熒光原位雜交技術(shù)和多重定量熒光聚合酶鏈式反應技術(shù)等[1-3]。染色體微陣列分析技術(shù)可檢測染色體微缺失和微重復，但檢測結(jié)果可能出現(xiàn)臨床意義不明的拷貝數(shù)變異[4-7]。細菌人工染色體微珠(BoBs)檢測技術(shù)除了能對21號、18號、13號及性染色體數(shù)目異常進行快速診斷外，還能對常見的9種染色體微缺失綜合征進行檢測[8-9]。本研究聯(lián)合應用BoBs技術(shù)與傳統(tǒng)的染色體核型分析技術(shù)對1 868例羊水標本進行產(chǎn)前診斷，即達到快速檢測染色體非整倍體又擴展了9種染色體微缺失綜合征檢測。現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2015年11月至2018年6月在新疆維吾爾自治區(qū)婦幼保健院就診的1 868例，具有以下至少1項產(chǎn)前診斷指征的孕婦：(1)孕婦年齡≥35歲；(2)孕婦血清學產(chǎn)前篩查高風險；(3)胎兒超聲篩查異常；(4)孕婦無創(chuàng)產(chǎn)前篩查高風險；(5)有染色體異常、染色體微缺失綜合征生育史或妊娠史。孕婦年齡18～48歲，孕周18～24周，所有孕婦均簽署知情同意書后行羊水穿刺術(shù)并獲得倫理委員會得批準。

1.2方法

1.2.1BoBs檢測 儀器與試劑耗材均購自美國Perkin Elmer公司，將10 mL羊水用德國Qiagen公司的試劑盒提取基因組DNA，測量DNA水平后進行DNA標記，PCR擴增、純化，用微球進行雜交，顯色標記。用Luminex 200分析儀進行高通量檢測，用BoBsoft軟件進行分析，并在24～48 h內(nèi)得出結(jié)果。主要針對染色體13、18、21、X、Y非整倍體及9個目標區(qū)域(4p16.3、5p15.3-5p15.2、7q11.2、8q23.2-8q24.1、15q11-15q12、17p13.3、17p11.2、10p14、22q11.2)的微缺失進行檢測。

1.2.2羊水細胞培養(yǎng)及染色體核型分析 對培養(yǎng)成功的羊水細胞進行收獲、常規(guī)制片、G顯帶和染色體核型分析。染色體核型分析診斷標準參考2013年人類細胞遺傳學國際命名體系(ISCN)。

2 結(jié) 果

2.1BoBs技術(shù) 檢出130例染色體非整倍體，其中標準型21-三體綜合征91例，標準型18-三體綜合征23例，性染色體非整倍體6例，嵌合型21-三體綜合征1例，嵌合型性染色體5例，微缺失和微重復4例，漏診嵌合5例，檢出率6.95%。金標準染色體核型分析檢出非整倍體131例，漏檢4例微缺失，見表1、2。

表1 BoBs檢測異常統(tǒng)計結(jié)果

表2 BoBs方法與確診方法統(tǒng)計結(jié)果(n)

2.2羊水細胞染色體核型分析 胎兒羊水細胞培養(yǎng)成功率為100%。統(tǒng)計13、18、21、X和Y染色體非整倍體131例，其中檢出染色體數(shù)目嵌合11例，漏診微缺失4例，檢出率為7.01%。對于BoBs不能檢測而核型分析能檢測的染色體結(jié)構(gòu)改變，如倒位、易位等，將這些標本均歸入正常標本。核型無法檢出微缺失的不納入，符合納入標準的標本染色體非整倍體，評價總一致性異常(+)和正常(-)標本的頻數(shù)以表格形式報告，總符合率為99.73%，陽性符合率為96.18%，陰性符合率為100.00%。見表3。

表3 BoBs方法與核型分析之間符合率統(tǒng)計結(jié)果(n)

3 討 論

0.2%～1.9%的產(chǎn)前診斷標本存在嵌合體現(xiàn)象[10]。因為限制性胎盤嵌合體較為普遍，故相對于羊水標本，絨毛標本嵌合體發(fā)生率更高[11]。BoBs技術(shù)檢測到不同染色體嵌合的閾值為20%～40%[12]，即BoBs技術(shù)檢測人工混合的模擬標本和臨床標本嵌合體的閾值存在輕微差異。分析其原因，可能是由于臨床標本通過核型分析技術(shù)評估嵌合水平，而人工混合標本是由正常和異常的細胞系根據(jù)數(shù)學計算混合而成。因為BoBs技術(shù)可額外檢測9個常見微缺失綜合征關鍵區(qū)域的拷貝數(shù)變異，故BoBs 技術(shù)具有對13、18、21號和 X、Y 染色體非整倍體以及微缺失綜合征的快速產(chǎn)前診斷能力。

BoBs檢測與核型分析檢測在常見染色體非整倍體數(shù)目異常檢測方面的作用是一致的。染色體微缺失綜合征患者常伴有智力低下、發(fā)育遲緩、多器官畸形及不良孕產(chǎn)史等癥狀[13]，但卻是細胞染色體核型分析的盲點和難點。BoBs檢測可對常見的9種染色體微缺失綜合征進行診斷，這9種微缺失綜合征在活產(chǎn)嬰兒中的綜合發(fā)生率約為1/1 600[14]，本研究中BoBs檢測出的4例染色體微缺失/微重復綜合征，染色體核型分析結(jié)果顯示未見異常。

BoBs 技術(shù)較為簡單，儀器成本低，通量高，每個反應可檢測92份標本。BoBs技術(shù)與核型分析比較，BoBs 技術(shù)比核型分析能更快速獲得結(jié)果，是較為理想的產(chǎn)前診斷補充工具。對于新發(fā)展的產(chǎn)前診斷實驗室，開展 BoBs技術(shù)的成本效益較高。

4 結(jié) 論

BoBs技術(shù)能夠高效檢出常見染色體非整倍體和微缺失綜合征，因其快速、精確、操作簡便、通量高等優(yōu)勢，滿足臨床的需求，值得推廣。