鄒光美　黃朝任　陳武　吳博文　陸穎

[摘要] 目的 探討SLE患者T淋巴細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞與25-羥維生素D水平的相關(guān)性及分析部分危險(xiǎn)因素。方法選取2017年9月～2018年12月在本院就診的SLE患者共100例（其中活動(dòng)期組70例，穩(wěn)定期組30例），另選取同期50例健康體檢者為對(duì)照組，分別檢測(cè)各組研究對(duì)象的T淋巴細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞、25-羥維生素D、補(bǔ)體、免疫球蛋白、血沉及血常規(guī)等項(xiàng)目水平進(jìn)行比較與分析。 結(jié)果SLE活動(dòng)期組及穩(wěn)定期組患者的CD3+T細(xì)胞及CD8+Ts細(xì)胞水平明顯高于對(duì)照組，而兩組的Th/Ts比值、NK細(xì)胞均明顯低于對(duì)照組（P<0.05）。SLE活動(dòng)期組CD4+Th細(xì)胞明顯低于對(duì)照組，另外其25（OH）D水平明顯低于SLE穩(wěn)定期組及對(duì)照組（P<0.05）。SLE活動(dòng)期及穩(wěn)定期兩組患者的C3及C4水平均明顯低于對(duì)照組，兩病例組的ESR水平明顯高于對(duì)照組，而SLE活動(dòng)期組的IgM水平明顯低于其他兩組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。SLE活動(dòng)期組的RBC、HGB、PLT及LYM%的水平較其他兩組均明顯減低，而NEUT%的水平則明顯高于其他兩組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。SLE穩(wěn)定期組的RBC、NEUT%的水平明顯高于對(duì)照組，而該組的LYM%的水平則明顯低于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。Spearman相關(guān)性分析結(jié)果顯示，NK細(xì)胞與CD4+Th細(xì)胞、25（OH）D、C3、IgA和IgG呈正相關(guān)，與CD8+Ts細(xì)胞呈負(fù)相關(guān)（P<0.05）。25（OH）D與CD4+Th細(xì)胞、Th/Ts比值、C3、IgA、IgG、RBC、HGB和PLT呈正相關(guān)，與ESR呈負(fù)相關(guān)（P<0.05）。Logistic回歸分析結(jié)果顯示CD3+T細(xì)胞、CD8+Ts細(xì)胞及ESR是SLE患者的危險(xiǎn)因素，而25（OH）D、NK細(xì)胞、C3、HGB及PLT為保護(hù)因素。 結(jié)論T淋巴細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞與25（OH）D等異常與SLE患者發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，聯(lián)合檢測(cè)補(bǔ)體、免疫球蛋白、血沉等對(duì)SLE患者活動(dòng)性具有警示的臨床應(yīng)用價(jià)值，檢驗(yàn)多項(xiàng)目綜合檢測(cè)篩查危險(xiǎn)因素對(duì)SLE的診療及改善預(yù)后有重要的指導(dǎo)意義。

[關(guān)鍵詞] 系統(tǒng)性紅斑狼瘡;T淋巴細(xì)胞亞群;NK細(xì)胞;25-羥維生素D;危險(xiǎn)因素

[中圖分類號(hào)] R593.241? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B? ? ? ? ? [文章編號(hào)] 1673-9701（2020）01-0134-05

Correlation and risk factors of T lymphocyte subsets， NK cells and 25-hydroxyvitamin D levels in the patients with SLE

ZOU Guangmei1? ?HUANG Chaoren2? ?CHEN Wu1? ?WU Bowen1? ?LU Ying1

1.Department of Clinical Laboratory， Yulin First Peoples Hospital in Guangxi Zhuang Autonomous Region， Yulin 537000， China; 2.Department of Clinical Laboratory， Yulin Hospital of TCM in Guangxi Zhuang Autonomous Region， Yulin? ?537000， China

[Abstract] Objective To investigate the correlation between T lymphocyte subsets， NK cells and 25-hydroxyvitamin D levels in the patients with SLE and to analyze some risk factors. Methods A total of 100 patients with SLE who were admitted to our hospital from September 2017 to December 2018 were selected （70 cases in the active phase group and 30 cases in the stable phase group）. Another 50 healthy subjects were selected as the control group during the same period. The levels of T lymphocyte subsets， NK cells， 25-hydroxyvitamin D， complement， immunoglobulin， erythrocyte sedimentation rate and blood routine test were detected in each group， and compared and analyzed. Results The levels of CD3+T cells and CD8+Ts cells in the SLE active phase group and the stable phase group were significantly higher than those in the control group. The ratio of Th/Ts and NK cells in the two groups were significantly lower than those in the control group （P<0.05）. The CD4+Th cells in the SLE active phase group were significantly lower than those in the control group. In addition， the 25（OH）D level was significantly lower than that in the SLE stable phase group and the control group （P<0.05）. The levels of C3 and C4 in the SLE active phase group and the stable phase group were significantly lower than those in the control group，and the levels of ESR in the SLE active phase group and the stable phase group were significantly higher than those in the control group.The levels of IgM in the SLE active phase group was significantly lower than that in the other two groups，with significantly differences（P<0.05）.The levels of RBC， HGB， PLT and LYM% in the SLE active phase group were significantly lower than those in the other two groups，with significantly differences（P<0.05）， and the levels of NEUT% in the SLE active phase group were significantly higher than those in the other two groups，with significantly differences（P<0.05）. The levels of RBC， NEUT% in the SLE stable phase group were significantly higher than those in the control group，and the levels of LYM% in the SLE stable phase group was significantly lower than that in the control group，with significantly differences（P<0.05） Spearman correlation analysis showed that NK cells were positively correlated with CD4+Th cells， 25（OH）D， C3， IgA and IgG， and negatively correlated with CD8+Ts cells （P<0.05）. 25（OH）D was positively correlated with CD4+Th cells， Th/Ts ratio， C3， IgA， IgG， RBC， HGB and PLT， and negatively correlated with ESR （P<0.05）. Logistic regression analysis showed that CD3+T cells， CD8+Ts cells and ESR were risk factors for the patients with SLE， and 25（OH）D， NK cells， C3， HGB and PLT were protective factors. Conclusion Abnormal T lymphocyte subsets， NK cells and 25（OH）D are closely related to the occurrence and development of SLE. Combined detection of complement， immunoglobulin， and erythrocyte sedimentation rate has clinical application values for alerting the activity of SLE patients. The testing of multi-item comprehensive detection and screening for risk factors has an important guiding significance for the diagnosis and treatment of SLE and prognosis improvement.

[Key words] Systemic lupus erythematosus （SLE）; T lymphocyte subsets; NK cells; 25-hydroxyvitamin D; Risk factors

系統(tǒng)性紅斑狼瘡（systemic lupus erythematosus，SLE）是一種慢性自身免疫性疾病，其發(fā)病特點(diǎn)是好發(fā)于育齡期女性，通過自身抗體的異常升高，免疫復(fù)合物的沉積和參與多器官系統(tǒng)損傷，該病有較高患病率及病死率[1]。SLE發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，免疫系統(tǒng)紊亂貫穿整個(gè)發(fā)病過程中，研究發(fā)現(xiàn)其可能與T細(xì)胞、B細(xì)胞、單核細(xì)胞等過度活化導(dǎo)致的免疫異常應(yīng)答等有密切關(guān)系[2]。NK細(xì)胞不僅能發(fā)揮直接殺傷的作用，同時(shí)還能分泌一系列可溶性的趨化因子和細(xì)胞因子，從而起到免疫調(diào)節(jié)的作用，已有文獻(xiàn)報(bào)道NK細(xì)胞的數(shù)量在SLE患者體內(nèi)明顯降低，但其中的具體機(jī)制還不明確[3]。維生素D受體廣泛分布于多種免疫細(xì)胞表面，國(guó)內(nèi)外多項(xiàng)研究表明 SLE患者中普遍存在25-羥維生素D的缺乏，25（OH）D在T淋巴細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)作用已經(jīng)得到高度重視[4]。此外，SLE患者的補(bǔ)體、免疫球蛋白、血沉及血常規(guī)也存在著不同程度的異常，本研究探討T細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞及25-羥維生素D水平的相關(guān)性在國(guó)內(nèi)尚無報(bào)道，同時(shí)分析其他部分檢驗(yàn)項(xiàng)目的相關(guān)危險(xiǎn)因素，進(jìn)而為SLE患者的臨床診療價(jià)值提供重要參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年9月～2018年12月在本院就診的確診為SLE患者100例進(jìn)行研究，其中SLE活動(dòng)期70例，SLE穩(wěn)定期30例。納入標(biāo)準(zhǔn)：診斷符合1997年美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)推薦的SLE分類標(biāo)準(zhǔn)[5]，根據(jù)系統(tǒng)性紅斑狼瘡疾病活動(dòng)指數(shù)積分表（SLEDAI）進(jìn)行評(píng)分， 本研究將SLE患者分為活動(dòng)組（SLEDAI評(píng)分≥10分）和穩(wěn)定組（SLEDAI評(píng)分<10分），其中男6例，女94例，年齡13～62歲，平均（33.75±10.54）歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并有急慢性感染、惡性腫瘤、肝腎嚴(yán)重疾病、其他自身免疫疾病及資料不完整等患者。收集同期本院健康體檢人員50例作為健康對(duì)照組，年齡15～60歲，平均（33.42±10.62）歲，其中男3例，女47例。兩組的年齡、性別比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。本研究經(jīng)本院醫(yī)院倫理委員會(huì)討論批準(zhǔn)進(jìn)行，研究對(duì)象均知情同意。

1.2 儀器與試劑

采集EDTA抗凝血2管各3 mL，1管使用美國(guó)貝克曼（FC-500）測(cè)定T淋巴細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞水平，另1管使用日本SYSMEX（XN-9000）測(cè)定血常規(guī)項(xiàng)目。采集靜脈血3～5 mL加入促凝管中，使用德國(guó)羅氏生化（c702）及免疫分析（e602）儀器，分別檢測(cè)補(bǔ)體（C3、C4）、免疫球蛋白（IgA、IgM、IgG）及25（OH）D。以上項(xiàng)目均使用對(duì)應(yīng)公司原裝相關(guān)配套試劑。血沉用枸櫞酸鈉抗凝管2 mL，使用日本SYSMEX（MONITOR-100）儀器法檢測(cè)。

1.3 方法

兩組均在清晨空腹?fàn)顟B(tài)下抽血，檢測(cè)補(bǔ)體（C3、C4），免疫球蛋白（IgA、IgM、IgG）及25（OH）D項(xiàng)目， 3000 r/min離心10 min后取血清進(jìn)行上機(jī)檢測(cè)。T淋巴細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞項(xiàng)目則為混勻后50 μL全血樣本加入10 μL對(duì)應(yīng)熒光抗體，混勻避光放置30 min后，加入原裝溶血?jiǎng)?00 μL后上機(jī)檢測(cè)。血常規(guī)及血沉則充分混勻后直接上機(jī)檢測(cè)。以上所有檢測(cè)項(xiàng)目均嚴(yán)格按標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程處理，在儀器運(yùn)行正常及室內(nèi)質(zhì)控正常情況下進(jìn)行測(cè)定。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS17.0 軟件對(duì)相關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料符合正態(tài)分布的用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，組間采用方差分析LSD-t法兩兩比較;偏態(tài)分布計(jì)量資料采用中位數(shù)（四分位數(shù)）[M（P25～P75）]表示，組間比較采用秩和檢驗(yàn)的Kruskal Wallis檢驗(yàn)分析;相關(guān)性采用Spearman進(jìn)行分析;采用多因素Logistic回歸進(jìn)行危險(xiǎn)因素分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 SLE病例組與對(duì)照組T細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞及25（OH）D水平比較

SLE活動(dòng)期及穩(wěn)定期兩組患者的CD3+T細(xì)胞及CD8+Ts細(xì)胞水平明顯高于對(duì)照組，而兩組的Th/Ts比值、NK細(xì)胞均明顯低于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。SLE活動(dòng)期組CD4+Th細(xì)胞明顯低于對(duì)照組，另外其25（OH）D水平明顯低于SLE穩(wěn)定期組及對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表1。

2.2 SLE病例組與對(duì)照組補(bǔ)體、免疫球蛋白及血沉水平比較

SLE活動(dòng)期及穩(wěn)定期兩組患者的C3及C4水平均明顯低于對(duì)照組，兩病例組的ESR水平明顯高于對(duì)照組，而SLE活動(dòng)期組的IgM水平明顯低于其他兩組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。三組研究對(duì)象組間的IgA、IgG水平差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見表2。

2.3 SLE病例組與對(duì)照組血常規(guī)部分項(xiàng)目水平比較

SLE活動(dòng)期組的RBC、HGB、PLT及LYM%的水平較其他兩組均明顯減低，而NEUT%的水平則明顯高于其他兩組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。SLE穩(wěn)定期組的RBC、NEUT%水平明顯高于對(duì)照組，而該組的LYM%的水平則明顯低于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。而三組研究對(duì)象組間的WBC水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見表3。

2.4 SLE病例組間的T淋巴細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞與25（OH）D等項(xiàng)目相關(guān)性分析

相關(guān)性分析結(jié)果顯示，NK細(xì)胞與CD4+Th細(xì)胞、25（OH）D、C3、IgA和IgG呈正相關(guān)（P均<0.05），與CD8+Ts細(xì)胞呈負(fù)相關(guān)（P<0.05）。25（OH）D與CD4+Th細(xì)胞、Th/Ts比值、C3、IgA、IgG、RBC、HGB和PLT呈正相關(guān)（P均<0.05），與ESR呈負(fù)相關(guān)（P<0.05），見表4。

2.5 各影響因素對(duì)SLE的非條件Logistic回歸分析

多元回歸分析，通過計(jì)算優(yōu)勢(shì)比（odds ratio，OR）和95%可信區(qū)間（95%CI）分析SLE的相關(guān)危險(xiǎn)因素。研究結(jié)果表明，CD3+T細(xì)胞、CD8+Ts細(xì)胞及ESR是SLE患者的危險(xiǎn)因素，而25（OH）D、NK細(xì)胞、C3、HGB及PLT為保護(hù)因素，見表5。

3 討論

SLE 發(fā)病機(jī)制尚未完全明確，患者發(fā)病相關(guān)的體內(nèi)免疫調(diào)節(jié)異?？杀憩F(xiàn)為 T 淋巴細(xì)胞亞群的比例失衡。國(guó)內(nèi)外多項(xiàng)研究顯示，T淋巴細(xì)胞亞群的活化和增殖異常表現(xiàn)與SLE的發(fā)病密切相關(guān)，結(jié)果均有提示 SLE患者存在CD4+Th細(xì)胞減低，CD8+Ts細(xì)胞增高，Th/Ts比值及NK細(xì)胞減低等情況，本研究結(jié)果與馮靜[6]、王麗娟[7]、Shirota Y等[8]研究結(jié)果一致。NK細(xì)胞是自然殺傷性細(xì)胞，也具有一定的免疫調(diào)節(jié)功能，自身免疫性疾病常出現(xiàn)NK細(xì)胞數(shù)量的減少或功能的缺陷，SLE患者NK細(xì)胞減低，推測(cè)可能影響T淋巴細(xì)胞亞群的平衡[3，6]，本研究中NK細(xì)胞與CD4+Th細(xì)胞呈正相關(guān)，而與CD8+Ts細(xì)胞呈負(fù)相關(guān)的相關(guān)性分析也證實(shí)了這點(diǎn)。張繼云等[9]研究顯示SLE組外周血CD3+T淋巴細(xì)胞與對(duì)照組相比顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而CD8+Ts細(xì)胞與對(duì)照組相比則差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，本研究與此結(jié)論有所不同。推測(cè)可能是SLE患者CD3+T細(xì)胞各項(xiàng)比例的均數(shù)因納入對(duì)象數(shù)量不同，存在地域人群差異或SLE患者處于疾病的不同階段等原因，各研究學(xué)者結(jié)果尚未達(dá)成一致。

近年來國(guó)內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn)，25（OH）D的缺乏可能與某些自身免疫性疾病如SLE、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的發(fā)病有一定相關(guān)性[10]，本研究也同樣證實(shí)了SLE患者25（OH）D水平的下降。目前有學(xué)者認(rèn)為SLE的發(fā)病與遺傳、激素及免疫因素等有關(guān)，維生素D缺乏也可能是其中一個(gè)重要的因素，25（OH）D中約95%含量為25（OH）D3，也有研究表明25（OH）D對(duì)T淋巴細(xì)胞的異常表達(dá)有關(guān)系[11]。馮靜[6]研究結(jié)果顯示SLE組25（OH）D3 水平與 SLEDAI 呈負(fù)相關(guān)，與CD4+Th細(xì)胞、Th/Ts呈正相關(guān)，與CD3+T細(xì)胞、CD8+Ts細(xì)胞、NK細(xì)胞百分率均無相關(guān)性。本研究25（OH）D與CD4+Th細(xì)胞、Th/Ts比值呈正相關(guān)與此相類似。張繼云等[9]研究SLE組外周血25（OH）D與CD3+T細(xì)胞、CD4+Th細(xì)胞計(jì)數(shù)、Th/Ts計(jì)數(shù)比值呈正相關(guān)。Zhao M等[12]研究顯示血清25（OH）D3水平與CD4+Th細(xì)胞（r=-0.423，P=0.002）呈負(fù)相關(guān)，與CD8+Ts細(xì)胞呈正相關(guān)（r=0.318，P=0.024）。本研究還發(fā)現(xiàn)25（OH）D與SLE病情活動(dòng)性有一定關(guān)系，中重度活動(dòng)期組患者明顯低于穩(wěn)定期組及對(duì)照組，與蘇江等[13]研究結(jié)論相似，因此推測(cè)SLE患者提高血清維生素D水平可能對(duì)改善SLE病情有重要的作用。

SLE 患者可能由于B細(xì)胞的增殖、分化及激活，引起免疫系統(tǒng)針對(duì)體內(nèi)多種自身抗原成分產(chǎn)生相應(yīng)的自身抗體，最終導(dǎo)致部分患者體內(nèi)免疫球蛋白濃度的異常。謝國(guó)錦等[14]研究表明，在SLE 活動(dòng)期IgM水平是下降的，本研究與此結(jié)論相一致，但其原因暫不明確。而本研究SLE組的IgG、IgA與對(duì)照組相比無顯著差異，與孫家祥等[15]研究有所不同。SLE患者補(bǔ)體C3、C4水平明顯減少，與陳俊華等[16]研究結(jié)果相似，是由于補(bǔ)體C3、C4可使體內(nèi)凋亡細(xì)胞釋放出較多核酸，從而產(chǎn)生更多的抗核抗體與對(duì)應(yīng)抗原相結(jié)合后激活及消耗補(bǔ)體，低C3、C4和ESR監(jiān)測(cè)通常作為SLE活動(dòng)性的判斷指標(biāo)，本研究也證實(shí)此觀點(diǎn)。部分SLE患者侵犯血液系統(tǒng)時(shí)可出現(xiàn)血常規(guī)的異常（貧血、血小板減少或淋巴細(xì)胞百分率減低等），本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，SLE活動(dòng)期組的RBC、HGB、PLT及LYM%的水平較其他兩組均明顯減低，可能是因?yàn)楦腥净驊?yīng)激等情況，而NEUT%的水平則明顯高于其他兩組，同時(shí)還發(fā)現(xiàn)25（OH）D與RBC、HGB和PLT存在一定正相關(guān)性，推測(cè)自身免疫疾病的發(fā)病是多方面綜合影響的。

綜上所述，T 淋巴細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞異常改變?cè)赟LE的發(fā)病中發(fā)揮著重要作用，可了解客觀患者機(jī)體免疫狀態(tài)，對(duì)判斷病情活動(dòng)性及療效觀察具有重要意義。25（OH）D減低與SLE免疫系統(tǒng)異常及活動(dòng)性有一定關(guān)系，通過補(bǔ)體、免疫球蛋白、血沉及血常規(guī)等檢測(cè)可明確危險(xiǎn)因素，有針對(duì)性的治療可減少SLE的并發(fā)癥，改善患者生活質(zhì)量。

[參考文獻(xiàn)]

[1] Wu L，Wang X，Chen F，et al. T cell subsets and immunoglobulin G levels are associated with the infection status of systemic lupus erythematosus patients[J]. Brazilian Journal of Medical and Biological Research=Revista Brasileira de Pesquisas Medicase Biologicas，2017，51（2）：e4547.

[2] 蔡茂文，張晶，周彬. 系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群的臨床分析[J]. 實(shí)用醫(yī)院臨床雜志，2013， 10（2）：88-90.

[3] 馮莉，趙令，馬寧，等. 系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者糖皮質(zhì)激素聯(lián)合免疫抑制劑治療前后外周血NK細(xì)胞和受體表達(dá)變化及其治療作用機(jī)制[J]. 吉林大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2014，40（1）：159-163.

[4] Garcia-Carrasco M，Mendoza-Pinto C，Etchegaray-Morales I，et al. Vitamin D insufficiency and deficiency in mexican patients with systemic lupus erythematosus：Prevalence and relationship with disease activity[J]. Reumatol Clin，2017，13（2）：97-101.