王美娥，胡朝軍，李萍，鄧垂文，吳子燕，曾小峰，張奉春，李永哲，張蜀瀾

(1.中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)院a.風(fēng)濕免疫科 風(fēng)濕免疫病學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, b.檢驗(yàn)科 侵襲性真菌病機(jī)制研究與精準(zhǔn)診斷北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,北京 100730；2.福建醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院檢驗(yàn)科，泉州 362000)

潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis,UC)是主要病變?cè)诮Y(jié)腸或直腸黏膜下層的慢性特發(fā)性炎癥疾病，屬于炎癥性腸病(inflammatory bowel disease,IBD)的一種，臨床表現(xiàn)以腹痛、腹瀉、黏液膿血便為主。亞洲不同地區(qū)UC發(fā)病率不同，但呈逐年上升趨勢(shì)[1]，然而UC的臨床檢出率偏低，因此迫切需要綜合多種方法提高臨床檢出率。UC診斷尚需在排除感染性及非感染性結(jié)腸炎的前提下,通過(guò)內(nèi)鏡和病理檢查進(jìn)行判斷，但這些檢測(cè)有創(chuàng)、依從性差，不適合于早期篩查[2]。研究表明，腸道免疫系統(tǒng)在UC的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮著重要作用，因此血清中自身抗體檢測(cè)對(duì)UC診斷具有一定的價(jià)值[3-4]?？怪行粤＜?xì)胞胞漿抗體(anti-neutrophil cytoplasmic antibodies,ANCA)和抗小腸杯狀上皮細(xì)胞抗體(antibodies to goblet cells,GAB)目前被認(rèn)為是UC的特異性血清學(xué)抗體，適用于早期篩查。但臨床常規(guī)測(cè)定主要以IgG為主，而在腸道黏膜免疫當(dāng)中起到關(guān)鍵作用的是分泌型免疫球蛋白A(secretory immunoglobulin A,sIgA)。sIgA作為腸黏膜上的主要免疫球蛋白，是腸道黏膜上的第一道防線，但I(xiàn)gA抗體對(duì)診斷UC是否比IgG更有價(jià)值，與IgG聯(lián)合檢測(cè)是否有助于提高UC疾病的診斷水平，尚不明了。本研究通過(guò)對(duì)血清中ANCA和 GAB不同類型抗體的測(cè)定，旨在探討不同類型抗體對(duì)UC診斷的臨床價(jià)值。

1 資料與方法

1.1一般資料 隨機(jī)選取2018年4月至2019年4月在北京協(xié)和醫(yī)院診斷為UC的患者93例，其中男47例，女46例；年齡18～78歲， (42.6±12.6)歲。UC的診斷符合2012年在廣州召開的全國(guó)消化病學(xué)術(shù)會(huì)議上制定的炎癥性腸病診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]。其他腸道疾病組93例，均為就診時(shí)主訴腹痛、腹瀉、發(fā)熱，后經(jīng)結(jié)腸鏡、病理組織學(xué)等檢查排除UC的患者，其中男52例，女41例，年齡11～71歲，(34.5±10.4)歲。2組一般資料間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，組間具有可比性。

1.2試劑與儀器 慢性炎癥性腸病抗體檢測(cè)試劑盒、熒光顯微鏡EUPOStar Ⅲ Plus(德國(guó)歐蒙公司)。

1.3方法

1.3.1采集標(biāo)本 所有患者采集靜脈血2 mL，2 000 r/min離心15 min分離血清，血清-20 ℃凍存。

1.3.2抗體測(cè)定 ANCA-IgG、IgA和GAB-IgG、IgA的檢測(cè)均采用間接免疫熒光法，采用慢性炎癥性腸病抗體檢測(cè)試劑盒。馬賽克生物薄片(三基質(zhì))上覆有乙醇固定的中性粒細(xì)胞、猴小腸杯狀細(xì)胞、猴胰腺腺泡和胰島細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)操作按德國(guó)歐蒙公司試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。IgG和IgA檢測(cè)原理和實(shí)驗(yàn)步驟均相同，但在制片過(guò)程中加入的酶標(biāo)二抗類型不同。核周型抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體(perinuclear anti-neutrophil cytoplasmic antibodies, pANCA)IgG、IgA在熒光顯微鏡下表現(xiàn)均為乙醇固定的人中性粒細(xì)胞胞漿呈現(xiàn)環(huán)繞細(xì)胞核周圍光滑的帶狀熒光, 胞漿型抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體(cytoplasmic anti-neutrophil cytoplasmic antibodies,cANCA)IgG、IgA表現(xiàn)均為乙醇固定的人中性粒細(xì)胞胞漿呈現(xiàn)彌漫性分布粗大的顆粒型熒光染色，并在核葉之間有重染。GAB-IgG、IgA在熒光顯微鏡下的表現(xiàn)均為小腸上皮層杯狀細(xì)胞胞漿呈現(xiàn)云霧狀、均勻模糊、邊緣不清的熒光染色。

1.3.3結(jié)果判讀 GAB-IgA、IgG的效價(jià)>10為陽(yáng)性，<10為陰性。ANCA的判讀同上。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 用軟件SPSS 17.0進(jìn)行。陽(yáng)性率比較采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1ANCA-IgG、ANCA-IgA、GAB-IgG、GAB-IgA單項(xiàng)檢測(cè)的陽(yáng)性率 UC組ANCA-IgG、 ANCA-IgA、GAB-IgG、GAB-IgA陽(yáng)性率分別為43.0%、26.8%、38.7%、5.3%，高于其他腸道疾病組的2.1%、0%、5.3%、0%，其中兩組間ANCA-IgA、ANCA-IgG、GAB-IgG陽(yáng)性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2分別為44.40、28.88、30.06，P<0.05)，而兩組間GAB-IgA陽(yáng)性率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=3.29，P>0.05)。見表1。

表1 兩組患者血清中ANCA-IgA/IgG、GAB-IgA/IgG結(jié)果

2.2ANCA-IgA/IgG、GAB-IgA/IgG分別聯(lián)合檢測(cè)的陽(yáng)性率 組合中一個(gè)指標(biāo)為陽(yáng)性則判斷為陽(yáng)性。ANCA-IgA/IgG聯(lián)合檢測(cè)UC組的陽(yáng)性率為49.5%，高于其他腸道疾病組的2.1%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=54.36，P<0.05)。GAB-IgA/IgG聯(lián)合檢測(cè)UC組的陽(yáng)性率為38.7%，高于其他腸道疾病組的5.3%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=30.07，P<0.05)。見表1。

2.3ANCA-IgG/IgA、GAB-IgG/IgA四項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)的陽(yáng)性率 組合中一個(gè)為陽(yáng)性則判斷為陽(yáng)性。UC組的陽(yáng)性率為70.9%，高于其他腸道疾病組的7.5%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=78.79,P<0.05)。見表1。

2.4ANCA、GAB中IgA、IgG的敏感性與特異性的比較 ANCA-IgA、GAB-IgA的特異性(100%、100%)高于ANCA-IgG、GAB-IgG(97.8%、94.6%)，但敏感性(26.8%、5.3%)低于ANCA-IgG、GAB-IgG(43.0%、38.7%)。見表2。

表25種檢測(cè)方式的敏感性、特異性、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值(%)

檢測(cè)項(xiàng)目敏感性特異性陽(yáng)性預(yù)測(cè)值 陰性預(yù)測(cè)值A(chǔ)NCA-IgG43.097 95.263.2ANCA-IgA26.810010057.8GAB-IgG38.794.687.860.7GAB-IgA5.310010051.4ANCA-IgA/IgG49.597.895.865.9GAB-IgA/IgG38.794.687.860.7ANCA-IgA/IgG+GAB-IgA/IgG70.992.590.476.1

2.5ANCA-IgA/IgG、GAB-IgA/IgG 4項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)的診斷價(jià)值 4項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)的敏感性、特異性為70.9%、92.5%，相比于單獨(dú)檢測(cè)ANCA-IgA/IgG、GAB-IgA/IgG的敏感性和特異性為49.5%、38.7%和97.8%、94.6%，聯(lián)合4項(xiàng)指標(biāo)特異性下降，但敏感性有所升高。見表2。

3 討論

UC是一種以腹痛、腹瀉、黏液血便為主要臨床表現(xiàn)的消化系統(tǒng)疑難疾病，在排除各種其他原因引起的腸道炎癥基礎(chǔ)上，綜合臨床表現(xiàn)、實(shí)驗(yàn)室和放射學(xué)檢查、內(nèi)鏡及病理學(xué)檢查作出診斷。而血清學(xué)標(biāo)志物檢測(cè)方便、無(wú)創(chuàng)，對(duì)疾病比較特異。臨床常規(guī)測(cè)定主要以IgG為主，實(shí)驗(yàn)室采用的方法有間接免疫法、ELISA等。在國(guó)內(nèi)開展血清學(xué)IgA檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)室不多。本文旨在探討IgG、IgA的聯(lián)合檢測(cè)是否有一定的臨床應(yīng)用價(jià)值。

國(guó)內(nèi)外研究表明，ANCA、GAB對(duì)UC的診斷及鑒別診斷有臨床價(jià)值[4]。本研究ANCA-IgG、GAB-IgG在UC中的敏感性分別為43.0%、38.7%，ANCA-IgG的診斷敏感性比國(guó)內(nèi)研究[6-8](50.0%～80.0%)稍低，與IgA抗體同時(shí)檢測(cè)的敏感性、特異性均有所提高。GAB的診斷敏感性、特異性均相對(duì)較差，國(guó)內(nèi)研究也較少。何淳等[6]研究GAB-IgG陽(yáng)性率為30.0%，本研究陽(yáng)性率為38.7%。目前國(guó)內(nèi)外研究尚少，不宜進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。本研究通過(guò)對(duì)2種類型抗體進(jìn)行測(cè)定，ANCA-IgA特異性高于ANCA-IgG，GAB-IgA高于GAB-IgG，ANCA-IgA、GAD-IgA在本研究高達(dá)100%、100%，可能對(duì)UC的明確診斷更有價(jià)值。但I(xiàn)gA的敏感性低于IgG，對(duì)UC的檢出率低，不適合單獨(dú)檢測(cè)IgA，IgA、IgG聯(lián)合檢測(cè)可提高檢出率。而ANCA-IgA/IgG、GAB-IgA/IgG 4種抗體聯(lián)合檢測(cè)可提高敏感性至70.9%，因此聯(lián)合檢測(cè)可以提高UC的檢出率，減少漏檢率、誤診率。但是本研究存在一些不足，比如例數(shù)太少、納入的研究為回顧性病例、缺乏多中心研究、缺乏隨訪。ANCA間接免疫熒光法檢測(cè)的是所有抗原，包括未知的抗原。而UC中ANCA的靶抗原尚不明確，可能是今后研討的方向。

綜上所述，針對(duì)UC，臨床實(shí)驗(yàn)室開展不同類型免疫球蛋白自身抗體的檢測(cè)可能存在一定的臨床應(yīng)用價(jià)值。ANCA、GAB-IgA比IgG特異性好，IgG輔之IgA同時(shí)檢測(cè)有助于提高UC的診斷水平。