張羽翀 王夢陽 林慧嬌 張馨蕓 王春梅 孫靖輝 李賀 陳建光 劉佳樂

(1北華大學(xué)藥學(xué)院藥理教研室，吉林 吉林 132013；2吉林市中心醫(yī)院)

五味子是中國傳統(tǒng)中藥，為木蘭科植物五味子的干燥成熟果實(shí)〔1，2〕。五味子木脂素(SCL)是五味子主要活性成分之一。本研究前期工作發(fā)現(xiàn)，SCL具有鎮(zhèn)靜和催眠的作用，該作用與其升高小鼠體內(nèi)γ-氨基丁酸(GABA)和降低谷氨酸(Glu)水平有關(guān)〔3，4〕。研究表明，參與失眠和催眠的中樞神經(jīng)遞質(zhì)除了GABA以外，5-羥色胺(HT)在調(diào)節(jié)睡眠中也起到了重要作用〔5，6〕。氯苯丙氨酸(PCPA)可拮抗5-HT前體(HTP)脫羧所依賴的色氨酸氫化酶，通過抑制5-HTP脫羧來阻斷5-HT的合成可使慢波睡眠減少，晝夜節(jié)律消失，引起失眠的發(fā)生〔7，8〕。所以本文以5-HT為靶點(diǎn)，觀察SCL對(duì)PCPA誘導(dǎo)的失眠大鼠的影響，進(jìn)一步明確SCL的催眠作用及相關(guān)機(jī)制。

1 材料和方法

1.1實(shí)驗(yàn)試劑 SCL(北華大學(xué)五味子開發(fā)及產(chǎn)業(yè)化工程研究中心)；PCPA(Sigma)；5-HT、5-羥吲哚乙酸(HIAA)ELISA試劑盒(中生北控生物科技股份有限公司)。

1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 雄性Wistar大鼠，體重(200±10)g，由長春市億斯實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限責(zé)任公司提供，許可證號(hào)SCXK(吉)-2016-0003。分籠后放于安靜、溫濕度適宜、通風(fēng)良好的環(huán)境中，自由飲水，攝食，適應(yīng)所處環(huán)境7 d后開始實(shí)驗(yàn)。

1.3主要儀器設(shè)備 LD5-10B高速離心機(jī)(北京市離心機(jī)廠)；生化培養(yǎng)箱(BSP-250)(上海市博迅公司)；全自動(dòng)酶標(biāo)儀(瑞士TECAN集團(tuán)公司)；FSH-2型高速勻漿機(jī)(江蘇省金壇億通電子)。

1.4動(dòng)物分組及給藥

1.4.1失眠模型復(fù)制方法 大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1 w后，腹腔注射PCPA(300 mg/kg)，1次/d，連續(xù)3 d。動(dòng)物出現(xiàn)晝夜節(jié)律消失，白天也活動(dòng)不停，表明模型復(fù)制成功。

1.4.2實(shí)驗(yàn)分組 雄性Wistar大鼠，隨機(jī)分組：空白對(duì)照組(CON組)，模型組(MOD組)，SCL組，PCPA+SCL組，每組6只。CON組及模型組給予相同容積蒸餾水，PCPA+SCL組及SCL組灌胃給予100 mg SCL，每天1次，連續(xù)給藥7 d。CON組和SCL組腹腔注射相應(yīng)容積生理鹽水，MOD組和PCPA+SCL組于SCL給藥第5天開始腹腔注射300 mg/kg PCPA，每天1次，連續(xù)給藥3 d。

1.4.3SCL協(xié)同戊巴比妥鈉睡眠實(shí)驗(yàn) 于末次給藥40 min后，腹腔注射給予戊巴比妥鈉(28 mg/kg和35 mg/kg)，此為閾下和閾劑量。觀察時(shí)間為30 min，以實(shí)驗(yàn)大鼠翻正反射消失1 min以上為陽性指標(biāo)。記錄各組大鼠的睡眠只數(shù)、睡眠潛伏期及睡眠持續(xù)時(shí)間。

1.4.4大鼠下丘腦組織中5-HT、5-HIAA水平檢測 于末次給藥40 min后，乙醚麻醉后迅速在冰墊上分離出下丘腦，取組織上清液進(jìn)行相應(yīng)的5-HT、5-HIAA水平的檢測(參照說明書)。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS9.0軟件進(jìn)行單因素方差分析及t及χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1SCL協(xié)同閾下劑量戊巴比妥鈉對(duì)大鼠睡眠只數(shù)的影響 與CON組比較(1只)，MOD組大鼠睡眠只數(shù)(0只)減少，SCL組大鼠睡眠只數(shù)(6只)增加；與MOD組相比，PCPA+SCL組大鼠睡眠只數(shù)(4只)增加，提示SCL能夠協(xié)同戊巴比妥鈉增加失眠大鼠的睡眠只數(shù)。

2.2SCL協(xié)同閾劑量戊巴比妥鈉對(duì)大鼠睡眠的影響 與CON組比較，MOD組大鼠睡眠潛伏期顯著升高，睡眠時(shí)間明顯縮短(P<0.05，P<0.01)，SCL組大鼠睡眠潛伏期明顯縮短并且睡眠時(shí)間顯著延長(P<0.01或P<0.05)，與MOD組相比，PCPA+SCL組大鼠睡眠潛伏期明顯縮短，睡眠時(shí)間顯著延長(P<0.05)，提示SCL能夠協(xié)同戊巴比妥鈉對(duì)抗PCPA所致的大鼠失眠。見表1。

表1 SCL協(xié)同閾劑量戊巴比妥鈉對(duì)各組大鼠睡眠潛伏期和睡眠時(shí)間的影響

與CON組比較:1)P<0.05，2)P<0.01；與MOD組比較:3)P<0.05，4)P<0.01；下表同

2.3SCL對(duì)失眠大鼠下丘腦中5-HT和5-HIAA水平的影響 見表2。

表2 SCL對(duì)各組大鼠下丘腦中5-HT和5-HIAA水平的影響

與CON組比較，MOD組大鼠下丘腦中5-HT和5-HIAA水平顯著降低(P<0.01)，SCL組大鼠下丘腦中5-HT和5-HIAA水平升高(P<0.05)。與MOD組相比，PCPA+SCL組大鼠下丘腦中5-HT和5-HIAA水平升高(P<0.01)。提示SCL可能通過調(diào)節(jié)下丘腦5-HT和5-HIAA水平而發(fā)揮催眠作用。

3 討 論

戊巴比妥鈉閾劑量及閾下劑量睡眠試驗(yàn)是評(píng)價(jià)藥物催眠功效的經(jīng)典方法〔9，10〕。本實(shí)研究通過采取戊巴比妥鈉閾下劑量及閾劑量協(xié)同睡眠試驗(yàn)，觀察并記錄大鼠的睡眠只數(shù)、睡眠潛伏期、睡眠持續(xù)時(shí)間，從而明確SCL的催眠作用。早在1968年Jouvet〔11〕就提出了5-HT致眠學(xué)說，降低腦內(nèi)5-HT會(huì)引起失眠，而失眠的恢復(fù)同腦內(nèi)5-HT水平的恢復(fù)呈正相關(guān)〔12，13〕。PCPA以阻斷5-HT的合成為靶點(diǎn)，是目前公認(rèn)的誘導(dǎo)失眠動(dòng)物模型工具藥〔14，15〕。與上述報(bào)道一致，本研究提示SCL能夠改善PCPA誘導(dǎo)的大鼠的失眠。5-HT神經(jīng)元通過上行投射影響下丘腦高級(jí)中樞，下丘腦中5-HT是參與睡眠-覺醒調(diào)節(jié)的重要組成部分〔16，17〕。5-HIAA是5-HT的代謝產(chǎn)物，腦內(nèi)的5-HT在單胺氧化酶作用下脫胺生成5-羥吲哚乙醛，5-羥吲哚乙醛再經(jīng)醛脫氫酶催化生成5-HIAA，因此腦內(nèi)5-HIAA能反映5-HT能神經(jīng)系統(tǒng)的活躍程度〔9，18〕。本研究提示SCL的催眠作用與5-HT有關(guān)。綜上，SCL對(duì)PCPA所致失眠大鼠具有催眠作用，該作用與其調(diào)節(jié)大鼠下丘腦組織中5-HT水平有關(guān)。