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        CD90在肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌中的表達(dá)及其與患者預(yù)后不良的關(guān)系

        2020-02-28 10:17:32饒井芬劉承一
        臨床肝膽病雜志 2020年2期
        關(guān)鍵詞:承德陽(yáng)性細(xì)胞膽管

        朱 彤, 饒井芬, 劉承一, 肇 爽, 張 力

        1 承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院 腫瘤科, 河北 承德 067000; 2承德醫(yī)學(xué)院, 河北 承德 067000

        肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌是一種源于肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞的原發(fā)性腺癌,在原發(fā)性肝癌中發(fā)病率僅次于肝細(xì)胞癌位居第2位,且近年來其發(fā)病率有所上升[1]。目前對(duì)于肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌主要以手術(shù)切除為首選治療方式,但是由于患者早期診斷困難、手術(shù)切除率低以及術(shù)后容易轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)等因素,患者預(yù)后情況并無明顯提高[2-3]。因此,研究肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌的發(fā)生以及促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)關(guān)鍵因子,對(duì)于腫瘤的治療以及預(yù)后改善具有著重要意義[3]。CD90是錨定于糖基磷脂酰肌醇的一種糖蛋白,在成纖維細(xì)胞、胸腺細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞以及神經(jīng)系統(tǒng)等多種細(xì)胞中均有所表達(dá),目前研究[4-5]顯示,CD90是肝細(xì)胞癌重要的一種抗原標(biāo)志物,在肝細(xì)胞癌發(fā)病和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮著重要作用,而其在肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌中的表達(dá)情況及與患者預(yù)后相關(guān)性目前尚無相關(guān)報(bào)道。本研究旨在探討CD90在肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌中的表達(dá)及與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和預(yù)后不良的相關(guān)性。

        1 資料與方法

        1.1 研究對(duì)象 收集2013年3月-2016年3月承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院手術(shù)切除的肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌患者組織標(biāo)本及其癌旁組織標(biāo)本。另收集同期肝臟外傷手術(shù)中所取正常肝組織標(biāo)本作為對(duì)照。肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌患者均行根治性切除術(shù),且手術(shù)由同一組醫(yī)師完成,均經(jīng)術(shù)后病理檢查證實(shí)為肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌?;颊咝g(shù)前未行放療、化療等相關(guān)治療;癌旁組織取自距離腫瘤組織邊緣2 cm以外的區(qū)域。術(shù)中切取新鮮組織,分類收集并標(biāo)記基本信息后迅速轉(zhuǎn)移至液氮罐中暫存,最后轉(zhuǎn)移至承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院標(biāo)本庫(kù)保存(-80 ℃)。排除合并嚴(yán)重心、腦、腎等系統(tǒng)疾病以及合并其他系統(tǒng)腫瘤患者。標(biāo)本均在患者或家屬知情同意情況下獲取。本研究方案經(jīng)由承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院委員會(huì)審批(批號(hào):20121208)。

        1.2 免疫組化檢測(cè)及結(jié)果判讀 將石蠟標(biāo)本連續(xù)切片后置于恒溫烘箱內(nèi)烤片,脫蠟后進(jìn)行乙醇脫水以及高壓抗原修復(fù);加入3%過氧化氫溶液以及稀釋后的CD90鼠抗人單克隆抗體(北京博奧森科技有限公司),置于4 ℃條件下孵育過夜;加入第二抗體以及DAB顯色。采用顯微鏡觀察,使用自來水沖洗終止染色。蘇木素復(fù)染3 min后使用自來水清洗;使用濃度1%的鹽酸乙醇適度分化,溫水返藍(lán);最后將切片晾干后封片。

        結(jié)果判斷:將切片置于400倍顯微鏡下,任選5個(gè)視野進(jìn)行觀察。參照文獻(xiàn)[6]結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn),細(xì)胞質(zhì)染色呈深黃色或黃色作為CD90陽(yáng)性細(xì)胞,計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞百分比并進(jìn)行評(píng)分:0分(陽(yáng)性細(xì)胞0)、1分(陽(yáng)性細(xì)胞≤25%)、2分(26%<陽(yáng)性細(xì)胞≤50%)、3分(50%<陽(yáng)性細(xì)胞≤75%)、4分(陽(yáng)性細(xì)胞>75%);然后根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞染色強(qiáng)度進(jìn)行評(píng)分:0分(無顯色)、1分(淺棕黃色)、2分(棕黃色)、3分(棕褐色)。將陽(yáng)性細(xì)胞百分比評(píng)分與染色強(qiáng)度評(píng)分相加,評(píng)分0分為陰性(-),2~3分為弱陽(yáng)性(+)、4~5分為中度陽(yáng)性(++)、6~7分為強(qiáng)陽(yáng)性(+++)。

        1.3 術(shù)后隨訪 術(shù)后對(duì)患者進(jìn)行隨訪,隨訪截止日期為2019年7月31日,分別以術(shù)后局部/遠(yuǎn)期復(fù)發(fā)以及死亡作為終點(diǎn)事件,分析患者術(shù)后無復(fù)發(fā)生存情況及總體生存情況。

        2 結(jié)果

        2.1 一般資料 共納入49例肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌患者,其中男39例,女10例,年齡33~78歲,平均(53.27±12.95)歲;對(duì)照組40例,其中男31例,女9例,年齡25~74歲,平均(52.93±10.94)歲。2組患者性別、年齡差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值均>0.05)。

        2.2 3組CD90蛋白表達(dá)情況比較 肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌組織CD90中強(qiáng)度陽(yáng)性表達(dá)率為65.31%,癌旁正常組織CD90中強(qiáng)度陽(yáng)性表達(dá)率為30.61%,正常肝組織CD90中強(qiáng)度陽(yáng)性表達(dá)率為0。肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌組織中CD90蛋白中強(qiáng)度陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于癌旁正常組織與正常肝臟組織(P值均<0.05)(表1)。

        表1 3組CD90蛋白表達(dá)情況比較[例(%)]

        注:與肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌組織比較,1)P<0.05;與癌旁正常組織比較,2)P<0.05。

        2.3 CD90蛋白表達(dá)與肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌患者臨床指標(biāo)的關(guān)系 CD90蛋白表達(dá)與肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌患者TNM分期及肝門淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P值均<0.05),而與患者性別、年齡、腫瘤數(shù)目、腫瘤分化情況無關(guān)(P值均>0.05)(表2)。

        2.4 CD90蛋白表達(dá)與肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌患者預(yù)后的關(guān)系 CD90蛋白陰性/弱陽(yáng)性表達(dá)患者術(shù)后無復(fù)發(fā)生存率及總體生存率均明顯優(yōu)于中/強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)患者(χ2值分別為3.845、4.152,P值分別為0.025、0.021)(圖1、2)。

        3 討論

        肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌為原發(fā)性肝癌的一種,是繼肝細(xì)胞癌的第二常見肝內(nèi)惡性腫瘤,以淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移為特征,其腫瘤侵襲以及轉(zhuǎn)移的惡性程度較肝細(xì)胞癌更高[6]。近些年來,肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌發(fā)病率明顯上升,由于患者發(fā)病較為隱匿,臨床表現(xiàn)缺乏特異性,患者早期診斷較為困難且術(shù)后復(fù)發(fā)率高,大部分患者在臨床診斷時(shí)已經(jīng)處于疾病晚期,手術(shù)治療效果不佳甚至無手術(shù)指征,患者臨床預(yù)后極差,已成為肝內(nèi)原發(fā)性惡性腫瘤死亡的主要原因,因此對(duì)于肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌病理發(fā)展機(jī)制的研究有著重要的臨床意義[7-9]。

        CD90是免疫球蛋白超家族中的一員,其主要通過甘油二酯錨定于糖基磷脂酰肌醇的羧基端而附著于細(xì)胞膜上[10]。在血液干細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)CD90蛋白的表達(dá),經(jīng)過6 d細(xì)胞因子的處理,CD90+細(xì)胞群進(jìn)入細(xì)胞周期,而CD90-細(xì)胞群仍處于細(xì)胞靜止期,提示CD90陽(yáng)性表達(dá)可促進(jìn)細(xì)胞增殖[11]。此外,有研究[12]顯示,CD44+CD90+細(xì)胞亞群在小細(xì)胞肺癌中的成球能力更強(qiáng),且具有上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化特征。而從胚胎干細(xì)胞中分選出來的CD90+細(xì)胞群增殖能力明顯強(qiáng)于CD90-細(xì)胞群,且CD90隨著胚胎干細(xì)胞的成熟表達(dá)逐漸降低[13-14]。而在前列腺癌組織標(biāo)本中,同樣發(fā)現(xiàn)CD90表達(dá)較正常前列腺組織高,且其在血管周圍的表達(dá)水平更高,提示在腫瘤的生長(zhǎng)以及血管形成過程中,CD90均發(fā)揮著重要作用[15]。

        表2 CD90蛋白表達(dá)與肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌患者臨床指標(biāo)關(guān)系分析[例(%)]

        圖1肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌患者術(shù)后無瘤生存情況分析

        本研究結(jié)果顯示,肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌組織CD90中強(qiáng)度陽(yáng)性表達(dá)率為65.31%,癌旁正常組織CD90中強(qiáng)度陽(yáng)性表達(dá)率為30.61%,正常肝組織CD90中強(qiáng)度陽(yáng)性表達(dá)率為0,肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌組織中CD90蛋白中強(qiáng)度陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于癌旁正常組織與正常肝組織(P<0.05)。提示在肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展過程中,CD90蛋白表達(dá)發(fā)揮著重要的影響,可能促進(jìn)了腫瘤細(xì)胞的增殖。此外,本研究進(jìn)一步分析了CD90表達(dá)與患者臨床病理特征的關(guān)系,結(jié)果顯示,CD90蛋白表達(dá)與肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌患者TNM分期及肝門淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P值均<0.05)。提示CD90蛋白與肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌患者疾病進(jìn)展密切相關(guān),同時(shí)CD90可能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的血行轉(zhuǎn)移,與相關(guān)研究[16-17]報(bào)道結(jié)果相似。Kaplan-Meier生存曲線分析結(jié)果顯示,CD90蛋白陰性/弱陽(yáng)性表達(dá)患者術(shù)后無復(fù)發(fā)生存率及總體生存率均顯著優(yōu)于中/強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)患者(P值均<0.05),提示CD90表達(dá)與術(shù)后復(fù)發(fā)及生存情況密切相關(guān),CD90蛋白高表達(dá)可促進(jìn)腫瘤的術(shù)后復(fù)發(fā),影響患者生存預(yù)后,可能與CD90促進(jìn)腫瘤血行轉(zhuǎn)移等因素有關(guān)[18-19]。有學(xué)者[20-21]從肝癌細(xì)胞株、肝癌患者組織以及血液中分選出CD90+細(xì)胞群,結(jié)果顯示,與CD90-細(xì)胞群比較,CD90+細(xì)胞群具有更強(qiáng)的成瘤能力,且能夠無限增殖,因此認(rèn)為CD90+細(xì)胞群可能是“肝癌干細(xì)胞”。本研究也進(jìn)一步證實(shí)了在肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌中,CD90對(duì)腫瘤的發(fā)生可能同樣發(fā)揮了重要的作用。但是由于本研究納入樣本量有限,且腫瘤作為一種多因素影響的共同結(jié)果,CD90可能只是其中因素之一,還需要進(jìn)一步深入研究分析。

        綜上所述,CD90在人肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌組織內(nèi)高表達(dá),且與患者肝門淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及不良預(yù)后有關(guān),在腫瘤發(fā)生發(fā)展及轉(zhuǎn)移過程中產(chǎn)生了重要的影響。

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