張語嫣，李孟圈

(鄭州大學第一附屬醫(yī)院 乳腺外科，河南 鄭州 450052)

乳腺癌是女性常見的惡性腫瘤之一，乳腺癌浸潤轉(zhuǎn)移是晚期乳腺癌患者死亡的主要原因。根據(jù)免疫組化結(jié)果將乳腺癌大致分為Luminal A型、Luminal B型、人類表皮生長因子受體2(human epidermal growth factor-2，Her-2)陽性和三陰性，其中Luminal B型乳腺癌包括一大類預后不良指標的激素受體陽性的乳腺癌，在我國占全部乳腺癌的50%左右[1]。上皮鈣黏素(E-cadherin)是一種鈣依賴介導的跨膜糖蛋白，對維持上皮細胞的聚集、黏附及形態(tài)結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性有重要作用，在正常細胞中能夠穩(wěn)定表達，但在腫瘤細胞中表達多不穩(wěn)定。E-cadherin表達的下調(diào)，會促進上皮間質(zhì)化，進而降低上皮細胞間的緊密連接程度，與腫瘤細胞的浸潤、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。本研究探討E-cadherin和Her-2在Luminal B型乳腺癌中的表達特點，分析其臨床意義，以期為Luminal B型乳腺癌的個體化治療提供參考。

1 資料與方法

1.1 病例資料選取2017年10月至2019年1月鄭州大學第一附屬醫(yī)院收治的146例接受改良根治術(shù)的乳腺癌患者。經(jīng)病理免疫組織化學檢驗證實為Luminal B型乳腺癌。病理組織學分級參照WHO分類標準，分期參照AJCC第八版《癌癥分期手冊》標準。146例患者均為女性，年齡29～70歲，中位年齡50歲。

1.2 實驗方法采用免疫組化SP法檢測E-cadherin。鼠抗人E-cadherin單克隆抗體、DAB顯色試劑盒均購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)公司。SP試劑盒購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。將石蠟標本制備成4 μm的切片，采用免疫組織化學二步法(Envision法)進行檢測，具體操作步驟按試劑盒說明書進行。

1.3 結(jié)果判讀E-cadherin表達以半定量法判讀：乳腺癌細胞中存在≥50%的連續(xù)膜染色，則認為E-cadherin表達為陽性；如果<50%，則認為E-cadherin表達為陰性或低表達。Her-2表達結(jié)果判讀：免疫組化結(jié)果+++或Fish基因檢測為陽性。Ki-67結(jié)果判讀：在顯微鏡下，以細胞核內(nèi)出現(xiàn)棕色顆粒定義為陽性計數(shù)1 000個細胞(10個高倍視野100個細胞)，計算Ki-67陽性細胞占細胞總數(shù)的百分比。以Ki-67≤30%為低表達，Ki-67>30%為高表達。

1.4 統(tǒng)計學方法采用SPSS 21.0統(tǒng)計軟件處理數(shù)據(jù)。計數(shù)資料(月經(jīng)狀態(tài)、組織學分級等)以頻數(shù)和率(%)表示，組間比較采用χ2檢驗；用Spearman秩相關(guān)分析E-cadherin、Her-2與分子指標之間的關(guān)系。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 Her-2與臨床病理特征的關(guān)系146例Luminal B型乳腺癌患者中，Her-2陽性者50例(34.25%)，Her-2陰性者96例(65.75%)。Her-2表達與原發(fā)腫瘤直徑、組織學分類和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目有關(guān)(均P<0.05)。Her-2表達與年齡、月經(jīng)狀態(tài)、組織學分級、切除淋巴結(jié)數(shù)目和TNM分期無關(guān)(均P>0.05)。見表1。

2.2 E-cadherin與臨床病理特征的關(guān)系146例Luminal B型乳腺癌患者中，E-cadherin陽性者125例(85.62%)，E-cadherin陰性者21例(14.38%)。E-cadherin表達與組織學分類和TNM分期有關(guān)(均P<0.05)。E-cadherin表達與年齡、月經(jīng)狀態(tài)、組織學分級、原發(fā)腫瘤直徑、切除淋巴結(jié)數(shù)目和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目無關(guān)(均P>0.05)。見表2。

2.3 相關(guān)分析在Luminal B乳腺癌組織中，E-cadherin表達與Ki-67、Her-2表達呈正相關(guān)(均P<0.05)，與ER、PR表達無關(guān)(均P>0.05)。Her-2在Luminal B型乳腺癌組織中的表達與PR表達呈負相關(guān)(P<0.05)，與Ki-67表達呈正相關(guān)(P<0.05)，與ER表達無關(guān)(P>0.05)。見表3。

表1 146例Luminal B型乳腺癌患者Her-2與臨床病理 特征的關(guān)系

注：a表示剔除23例無組織學分級者；Her-2—人類表皮生長因子受體2。

表2 146例Luminal B型乳腺癌E-cadherin表達與 臨床病理特征的關(guān)系

注：a表示剔除23例無組織學分級者；E-cadherin—上皮鈣黏素。

表3 Luminal B乳腺癌組織中E-cadherin和Her-2表達 與分子指標表達的相關(guān)性

注：ER—雌激素受體；PR—孕激素受體；E-cadherin—上皮鈣黏素；Her-2—人類表皮生長因子受體2。

3 討論

分子亞型與乳腺癌的轉(zhuǎn)移方式和自然病程密切相關(guān)，針對不同分子亞型乳腺癌的特異性治療有助于改善預后[2-3]。乳腺癌中占比最高的分子分型為Luminal B型。Luminal B型乳腺癌激素受體陽性率較高，總體預后較Luminal A型乳腺癌差。根據(jù)Her-2的表達情況將Luminal B型乳腺癌分為Her-2陰性型和Her-2陽性型。

E-cadherin作為鈣黏附蛋白家族中的重要成員之一，促使正常乳腺上皮細胞的黏附、定位、緊密連接。上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial to mesen-chymal transition，EMT)是上皮細胞喪失極性和黏附性并獲得侵襲性和轉(zhuǎn)移性的過程[4-5]。E-cadherin表達下調(diào)正是EMT發(fā)生的重要起始步驟。本研究發(fā)現(xiàn)，E-cadherin表達與組織學分類和TNM分期有關(guān)。在146例乳腺癌中，浸潤性導管癌的E-cadherin陰性表達率為8.2%，浸潤性小葉癌的E-cadherin陰性表達率為100.0%，與Singhai等[6]、董浙清等[7]研究發(fā)現(xiàn)相符。E-cadherin陰性表達往往表現(xiàn)為腫瘤細胞間的黏附能力減弱，侵襲能力增強，可考慮作為乳腺癌預后不良的指標之一。

Her-2是分子量為185 kDa的跨膜蛋白，其基因位于染色體17q12，是人類表皮生長因子受體家族成員之一，在調(diào)節(jié)細胞生長發(fā)育中起重要作用[8]。Her-2是調(diào)節(jié)乳腺生長發(fā)育的關(guān)鍵細胞因子，其過量表達常導致乳腺癌的發(fā)生，參與乳腺惡性腫瘤的生長、分化、侵襲、轉(zhuǎn)移的過程。Her-2陽性Luminal B亞型乳腺癌較Her-2陰性亞型乳腺癌更容易出現(xiàn)復發(fā)和轉(zhuǎn)移[9]。本研究結(jié)果顯示，與Her-2陰性表達者相比，Her-2陽性表達者的原發(fā)腫瘤直徑>2 cm的占比和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率較高。這提示在Luminal B型乳腺癌中，Her-2陽性者的惡性程度較高。

Her-2基因擴增或表達陽性與惡性腫瘤的高度侵襲性密切相關(guān)。E-cadherin的表達缺失可使上皮細胞間的黏附能力減弱，癌細胞轉(zhuǎn)移的風險增加。本研究結(jié)果顯示，E-cadherin表達與Her-2表達呈正相關(guān)。這提示兩者之間存在復雜交互的作用機制，需進一步研究。Ki-67 抗原是細胞增殖最常用的免疫組織化學標記物，對評估乳腺癌預后有重要價值[10]。Ki-67的表達強度反映腫瘤細胞增殖的活躍程度。PR具有調(diào)節(jié)乳腺癌生長和分化的功能，PR缺失可能是癌細胞惡性增殖和激素治療抵抗的因素之一[11]。本研究中，Her-2陽性表達與PR表達呈負相關(guān)，與Ki-67表達呈正相關(guān)。Her-2可能通過調(diào)控PR、Ki-67表達參與乳腺癌的侵襲轉(zhuǎn)移過程。

綜上所述，在Luminal B型乳腺癌中，E-cadherin低表達者和Her-2陽性表達者更容易出現(xiàn)腫瘤細胞的侵襲轉(zhuǎn)移。