(蒙陰縣人民醫(yī)院，山東 蒙陰 276200)

肝細胞癌(Hepatocellular carcinoma，HCC)是臨床常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率呈上升趨勢。HCC為原發(fā)性肝癌最主要的組織學類型，了解某些腫瘤蛋白的表達或缺失與HCC臨床病理指標的關系對其預后判斷或臨床治療具有重要意義。本文檢測基質金屬蛋白酶2(Matrix metalloProteinases 2，MMP2)和E-鈣粘附蛋白(Epithelial cadherin，E-Ca)在HCC中的表達，分析其與臨床病理指標的關系，探討其臨床意義。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取本院2011年1月—2016年12月經10%中性福爾馬林固定、石蠟包埋的308例原發(fā)性肝癌組織，患者隨訪2年，在308例病例中，失訪22例(失訪率為7.14%)，免疫組化制片脫片4例，將剩余的282例納入分析，其中男231例，女51例；年齡27～85歲，中位年齡54歲；分級：高分化29例，中分化155例，低分化98例；TNM分期：I期112例，Ⅱ期136例，Ⅲ/Ⅳ期34例；癌灶直徑：≤3 cm者64例，>3 cm者218例；脈管癌栓39例，門靜脈癌栓24例，淋巴結轉移15例。將以上臨床病理指標加上病人的年齡、性別、病灶個數、有無衛(wèi)星灶、有無肝被膜浸潤等指標一同分析。

1.2方法

1.2.1組織芯片構建 根據常規(guī)HE染色切片判定最具代表性的區(qū)域，應用遼寧朝陽恒泰科技公司產的組織芯片制備系統(tǒng)HT-1型制片機制片，取材針直徑1.5 mm，組織芯片間距1.0 mm。

1.2.2免疫組化制片 采用羅氏Benchmark GX全自動免疫組化染色機制片，兔抗人單克隆抗體MMP2和E-Ca購自北京中杉金橋生物有限公司，二抗購自上海羅氏生物有限公司，用PBS代替一抗作為陰性對照，已知陽性的浸潤性導管癌組織作為陽性對照。

1.3結果判定 (1)MMP2染色定位于細胞漿，按照胞漿著色強度分為0、1、2、3分，按照陽性細胞的比例分為4級，1分≤10%，2分11%～50%，3分51%～75%，4分>75%。然后根據以上兩種評分之和判斷陽性程度，0～5分判為陰性，>5分判為陽性[1]。(2)E-Ca陽性定位于細胞膜，按照著色強度分為0、1、2、3分，按照陽性細胞所占的百分比評為5級，0分0%，1分1%～25%，2分26%～50%，3分51%～75%，4分>75%，用細胞染色強度與陽性細胞的百分數相乘，乘積0～3為陰性，>3為陽性[2]。

2 結果

2.1MMP2的表達與臨床病理指標的關系 MMP2的表達與組織學分級、臨床分期、腫瘤直徑、脈管癌栓、門靜脈癌栓、淋巴結轉移、肝被膜浸潤及衛(wèi)星灶相關，與患者年齡、性別、病灶數目無關。見表1。

2.2E-Ca的表達與臨床病理指標的關系 E-Ca的表達與組織學分級、臨床分期、門靜脈癌栓、淋巴結轉移、肝被膜浸潤有關，與患者年齡、性別、腫瘤直徑、脈管癌栓、病灶數目及衛(wèi)星灶無關。見表1。

表1 原發(fā)性肝細胞肝癌中MMP2和E-Ca的表達與臨床病理參數的關系[n(%)]

(續(xù)表)

2.3MMP2在HCC中的表達與術后生存的關系 Kaplan-Meier和Log-rank檢驗顯示，HCC中MMP2陽性表達患者的中位無瘤生存時間和總生存時間均低于陰性表達患者，見表2。

2.4E-Ca在HCC中的表達與術后生存的關系 Kaplan-Meier和Log-rank檢驗顯示，HCC中E-Ca陰性表達患者的中位無瘤生存時間和總生存時間均低于陽性表達患者，見表2。

2.5MMP2和E-Ca在HCC中表達的相關性 Person相關分析顯示，二者在HCC中的表達呈負相關(r=-0.177，P=0.003)。

表2 MMP2和E-Ca的表達與HCC患者無瘤生存和總生存期的關系

3 討論

MMP2能降解細胞外基質(ECM)，破壞腫瘤細胞外屏障，并能誘導炎細胞及腫瘤細胞遷徙，因此在腫瘤細胞的侵襲和轉移中發(fā)揮重要作用。其在多種惡性腫瘤中呈現高表達，并與腫瘤的分化和組織學分級密切相關[3-4]。在本研究中，MMP2的高表達與HCC的組織學分級、臨床分期、肝被膜浸潤、脈管癌栓及淋巴結轉移等多種不良預后指標相關，與國內外研究基本一致，說明MMP2的高表達能促進惡性腫瘤的侵襲和轉移。

E-Ca是一種細胞間粘連跨膜蛋白，廣泛分布于胚胎及成熟組織的上皮細胞膜，在維護上皮細胞的形態(tài)以及結構完整性方面起著重要作用。在腫瘤細胞中如果其表達下降或缺失，致使腫瘤細胞粘附能力下降，造成腫瘤細胞間易分離，容易發(fā)生侵襲和轉移[5]。研究證實[6]，E-Ca的表達下降或缺失與宮頸鱗癌等多種惡性腫瘤的侵襲和轉移相關。本研究E-Ca在HCC中的低表達與組織學分級、臨床分期、門靜脈癌栓、淋巴結轉移及肝被膜浸潤等多個臨床預后不良指標相關，證實E-Ca在HCC中的低表達或失表達可導致HCC患者的預后不良。

上皮細胞轉化(ePithelial-mesenchymal，EMT)被認為在上皮細胞來源的惡性腫瘤的侵襲和轉移中發(fā)揮著重要作用[7]。EMT使上皮細胞獲得侵襲能力，向間質細胞轉化，在此過程中伴隨著蛋白表型的改變，如E-Ca表達的下降或缺失是發(fā)生EMT的重要標志[8]。研究表明，MMPs也與EMT有密切關系，不但本身可以作為EMT發(fā)生的標志，也參與了誘發(fā)EMT過程。有研究顯示，MMPs降解E-Ca，使其表達下降。本研究證實，MMP2和E-Ca在HCC中的表達呈負相關。

本研究用免疫組化技術探討了MMP2和E-Ca在HCC中的表達，并證實了其不同表達與HCC患者的預后相關。今后可進一步觀察二者在HCC中基因水平的表達情況，并探討其能否作為一個靶點治療HCC。