□羅瓊，劉洪娜，黃秋霞，羅娜

（長沙醫(yī)學(xué)院 湖南 長沙 410219）

生物多樣性會受到原生存地區(qū)中其他植物入侵的影響。其他植物的入侵能夠?qū)ι鷳B(tài)平衡和環(huán)境多樣性帶來消極影響，植物入侵是當(dāng)前環(huán)境問題中難以解決的問題之一[1]。內(nèi)生細(xì)菌與植物宿主之間的拮抗作用，對植物生長及抗病有一定益處。利用內(nèi)生細(xì)菌能夠保護(hù)植物多樣性，可以解決部分植物入侵問題。研究表明，部分感染內(nèi)生細(xì)菌植物的生長水平遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過未感染內(nèi)生細(xì)菌的植物，內(nèi)生細(xì)菌對于多數(shù)植物幼苗生長都能夠起到促進(jìn)作用[2]。

湘蓮產(chǎn)自湖南省，有祛痰抗炎、清暑利濕、止血化瘀、升發(fā)清陽、鎮(zhèn)定化驚等作用，具有較好藥用和使用價(jià)值。以從湘蓮葉中分離出的內(nèi)生細(xì)菌作為研究對象，研究其對植物出芽、生根、莖生長的作用影響。

1 湘蓮葉內(nèi)生細(xì)菌的分離

研究中所用的湘蓮葉內(nèi)細(xì)菌來自于2018年7月在長沙地區(qū)采摘的新鮮湘蓮葉片。將新鮮葉片采摘到試驗(yàn)室，然后用干凈水源將葉面雜質(zhì)沖洗干凈，接著進(jìn)行滅菌處理，將葉片自然風(fēng)干，放置在冰箱中。

在125℃的高溫高壓滅菌塑料杯中裝入無菌水、培養(yǎng)基、甲醛、高錳酸鉀等試驗(yàn)器材。同時(shí)控制人工氣溫調(diào)節(jié)箱，光照時(shí)間控制在12h內(nèi)，溫度設(shè)置為恒溫28℃；黑暗時(shí)間為10h，其中溫度控制在20℃，在正式使用之前，高錳酸鉀和甲醛的比例為2∶1，放置2d。

將風(fēng)干的湘蓮葉片進(jìn)行壓碎處理，然后分為2份，一份用高錳酸鉀和甲醛混合液浸泡處理，將湘蓮葉片內(nèi)生細(xì)菌完全殺死，另一份碾碎處理。將處理后的2份湘蓮葉片放置在培養(yǎng)基內(nèi)，形成菌落。

2 湘蓮葉內(nèi)生細(xì)菌促生作用的初步研究

2.1 湘蓮葉內(nèi)生細(xì)菌對植物發(fā)芽時(shí)間的影響

2.1.1 湘蓮葉內(nèi)生細(xì)菌對何首烏發(fā)芽時(shí)間影響

為了研究湘蓮葉內(nèi)生細(xì)菌對植物發(fā)芽時(shí)間的影響，選取適量何首烏種子，測定湘蓮葉內(nèi)生細(xì)菌對何首烏種子發(fā)芽時(shí)間和發(fā)芽數(shù)量的作用效果。

當(dāng)加入提取出湘蓮葉內(nèi)生細(xì)菌菌落0.05g后，何首烏的整體發(fā)芽時(shí)間明顯變短，這一結(jié)果能夠說明湘蓮葉內(nèi)生細(xì)菌對植物發(fā)芽具有促進(jìn)作用。另外，從研究結(jié)果能夠看出，湘蓮葉內(nèi)生細(xì)菌對植物發(fā)芽總量并沒有發(fā)生明顯變化。

此外，研究表明何首烏的整體發(fā)芽時(shí)間受到湘蓮葉內(nèi)生細(xì)菌菌量的影響。當(dāng)湘蓮葉內(nèi)生細(xì)菌加入量增多，湘蓮葉內(nèi)生細(xì)菌對植物整體發(fā)芽時(shí)間作用有一定的變化。

綜上，湘蓮葉內(nèi)生細(xì)菌對發(fā)芽時(shí)間的作用受到湘蓮葉內(nèi)生細(xì)菌菌落添加量的影響[3]。

2.1.2 湘蓮葉內(nèi)生細(xì)菌對黃葵發(fā)芽時(shí)間的影響

為了驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果的正確性以及普適性，選取黃葵作為植株測驗(yàn)對象。選取適量黃葵種子，測定湘蓮葉內(nèi)生細(xì)菌對黃葵種子發(fā)芽時(shí)間和發(fā)芽數(shù)量的作用效果。

當(dāng)加入提取出湘蓮葉內(nèi)生細(xì)菌0.05g后，黃葵的整體發(fā)芽時(shí)間明顯變短，這一結(jié)果能夠說明湘蓮葉內(nèi)生細(xì)菌對植物發(fā)芽時(shí)間具有促進(jìn)作用。另外，從研究結(jié)果能夠看出，湘蓮葉內(nèi)生細(xì)菌的添加對植物發(fā)芽總量并沒有發(fā)生明顯變化。

此外，經(jīng)過研究發(fā)現(xiàn)，黃葵的整體發(fā)芽時(shí)間不受湘蓮葉內(nèi)生細(xì)菌菌量的影響。當(dāng)湘蓮葉內(nèi)生細(xì)菌菌落加入量增多，湘蓮葉內(nèi)生細(xì)菌對黃葵發(fā)芽時(shí)間作用沒有顯著變化，可見湘蓮葉內(nèi)生細(xì)菌菌落對黃葵發(fā)芽時(shí)間的作用不受到菌落添加量的影響。

2.1.3 小結(jié)

從上述黃葵和何首烏兩組對照植物的試驗(yàn)結(jié)果可知，雖然湘蓮葉內(nèi)生細(xì)菌對不同植株發(fā)芽時(shí)間的作用結(jié)果和情況不同，但是湘蓮葉內(nèi)生細(xì)菌能夠?qū)χ仓臧l(fā)芽起到不同程度的促進(jìn)作用[4-5]。

2.2 湘蓮葉內(nèi)生細(xì)菌對植物根長和莖長的影響作用

通過添加不同比例湘蓮葉內(nèi)生細(xì)菌菌體測定其對植物根長和莖長的作用效果。

2.2.1 湘蓮葉內(nèi)生細(xì)菌對何首烏根長和莖長的影響作用

為了研究湘蓮葉內(nèi)生細(xì)菌對植物根長生長的影響，選取適量發(fā)芽何首烏，測定湘蓮葉內(nèi)生細(xì)菌對何首烏根長生長的作用效果。當(dāng)加入提取出湘蓮葉內(nèi)生細(xì)菌0.05g后，何首烏的整體根長生長情況沒有發(fā)生改變，說明湘蓮葉內(nèi)生細(xì)菌對植物根長沒有促進(jìn)作用。為了排除是否是菌落加入量過少導(dǎo)致作用不明顯的情況，加大菌落用量，加入湘蓮葉內(nèi)生細(xì)菌0.1g，但是何首烏的整體根長生長情況仍然沒有受到影響，說明湘蓮葉內(nèi)生細(xì)菌對植物根長沒有促進(jìn)作用。

為了研究湘蓮葉內(nèi)生細(xì)菌對植物莖長生長的影響，選取適量發(fā)芽何首烏，測定湘蓮葉內(nèi)生細(xì)菌對何首烏莖長生長的作用效果。當(dāng)加入湘蓮葉內(nèi)生細(xì)菌0.05g后，何首烏的整體莖長生長情況受到影響，莖長生長時(shí)間和對照組比較，固定時(shí)間內(nèi)生長效果明顯加快，這一結(jié)果能夠說明湘蓮葉內(nèi)生細(xì)菌對植物莖長有促進(jìn)作用。為了測定不同菌落添加量對于莖長生長的不同影響，加入湘蓮葉內(nèi)生細(xì)菌0.1g，何首烏的整體莖長生長速度與加入0.05g之間沒有明顯變化，說明湘蓮葉內(nèi)生細(xì)菌對植物莖長有促進(jìn)作用，但并不受添加量的影響。

根據(jù)研究結(jié)果能夠看出，湘蓮葉內(nèi)生細(xì)菌對何首烏整體根長生長無促進(jìn)作用，但是對莖長生長有一定的促進(jìn)作用，且這種促進(jìn)作用并不受到菌落添加量的影響。

2.2.2 湘蓮葉內(nèi)生細(xì)菌對黃葵根長和莖長的影響作用

為了研究湘蓮葉內(nèi)生細(xì)菌對植物根長生長的影響，選取適量發(fā)芽黃葵，測定湘蓮葉內(nèi)生細(xì)菌對黃葵根長生長的作用效果。當(dāng)加入湘蓮葉內(nèi)生細(xì)菌0.05g后，黃葵的整體根長生長情況并沒有發(fā)生改變，這一結(jié)果能夠說明湘蓮葉內(nèi)生細(xì)菌對植物根長沒有促進(jìn)作用。為了排除是否是菌落加入量過少導(dǎo)致作用不明顯的情況，加大菌落用量，加入湘蓮葉內(nèi)生細(xì)菌菌落0.1g，但是黃葵的整體根長生長情況并沒有發(fā)生改變，這一結(jié)果能夠說明湘蓮葉內(nèi)生細(xì)菌對植物根長沒有促進(jìn)作用。

為了研究湘蓮葉內(nèi)生細(xì)菌對植物莖長生長的影響，選取適量發(fā)芽黃葵，測定湘蓮葉內(nèi)生細(xì)菌對黃葵莖長生長的作用效果。當(dāng)加入提取出湘蓮葉內(nèi)生細(xì)菌菌落0.05g后，黃葵的整體莖長生長情況受到影響，莖長生長時(shí)間和對照組比較，生長明顯加快，這一結(jié)果能夠說明湘蓮葉內(nèi)生細(xì)菌對植物莖長有促進(jìn)作用。為了測定不同菌落添加量對于莖長生長的不同影響，加入湘蓮葉內(nèi)生細(xì)菌菌落0.1g，黃葵的整體莖長生長速度同加入0.05g之間產(chǎn)生明顯變化，這一結(jié)果說明湘蓮葉內(nèi)生細(xì)菌對植物莖長有促進(jìn)作用，而且受到添加量的影響。

根據(jù)研究結(jié)果能夠看出，湘蓮葉內(nèi)生細(xì)菌的加入對黃葵的整體根生長無促進(jìn)作用，但是對莖長生長有一定的促進(jìn)作用，且這種促進(jìn)作用受到菌落添加量的影響。

2.2.3 小結(jié)

綜上，湘蓮葉內(nèi)生細(xì)菌對植株根長沒有促進(jìn)作用，但是湘蓮葉內(nèi)生細(xì)菌對植株莖長起到不同程度的促進(jìn)作用。

3 結(jié)論

利用長沙地區(qū)湘蓮葉內(nèi)生細(xì)菌作為研究對象，對湘蓮葉的內(nèi)生細(xì)菌進(jìn)行基本分離和初步特性鑒定，研究選用何首烏和黃葵作為試驗(yàn)植株，測定湘蓮葉內(nèi)生細(xì)菌的特性。通過研究結(jié)果可知，湘蓮葉內(nèi)生細(xì)菌能夠?qū)χ参锏陌l(fā)芽起到一定促進(jìn)作用，但是不同植株的作用效果存在明顯差異；湘蓮葉內(nèi)生細(xì)菌對植物根長生長難以起到明顯的促進(jìn)作用；湘蓮葉內(nèi)生細(xì)菌對植物莖長起到一定促進(jìn)作用，但是不同植株的促進(jìn)效果存在明顯差異。