劉學(xué)貴 周靜瑤 黃明遠(yuǎn) 岳丹丹 呂夢(mèng)超 孫羽俅 高品一 李丹琦

摘要：對(duì)羥基苯丙酮酸雙加氧酶（p-hydroxyphenylpyruvate dioxygenase，簡(jiǎn)稱HPPD）作為一種化學(xué)除草劑的重要靶標(biāo)酶已引起越來(lái)越多的關(guān)注?；诜肿訉?duì)接技術(shù)，以HPPD靶蛋白為受體，通過(guò)研究配體與受體的結(jié)合模式，以商品化除草劑吡草酮為陽(yáng)性對(duì)照，對(duì)課題組從天然植物透骨草和紫花苜蓿中分離得到的41個(gè)化合物進(jìn)行虛擬篩選，根據(jù)對(duì)接得分以及分析結(jié)合模式得出10個(gè)對(duì)靶標(biāo)活性位點(diǎn)具有較好潛在抑制活性的化合物，同時(shí)，分?jǐn)?shù)高于吡草酮的化合物4′-氧-（赤型-β-愈創(chuàng)木脂甘油基）醚、4′-氧-（蘇型-β-愈創(chuàng)木脂甘油基）醚和（3R）-7-羥基-2′，4′，5′-三甲氧基-異黃烷-7-氧-β-D-葡萄糖苷不僅可以完全嵌入HPPD活性囊中，且存在與吡草酮相似的氨基酸殘基作用以及氫鍵和π-π堆積等作用。上述結(jié)果對(duì)設(shè)計(jì)新型高效的HPPD抑制除草劑具有重要的指導(dǎo)意義，也為使用計(jì)算技術(shù)開(kāi)發(fā)新型HPPD抑制劑除草劑提供了重要參考。

關(guān)鍵詞：對(duì)羥基苯基丙酮酸雙加氧酶;除草劑;分子對(duì)接;天然產(chǎn)物;先導(dǎo)化合物;篩選;吡草酮

中圖分類(lèi)號(hào)： S482.4 ?文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A ?文章編號(hào)：1002-1302（2020）24-0095-07

眾所周知，雜草在農(nóng)作物的整個(gè)生長(zhǎng)過(guò)程中參與爭(zhēng)奪水分、養(yǎng)分、光照和空間，因而被公認(rèn)為是對(duì)農(nóng)作物生產(chǎn)的普遍威脅[1-4]。除草劑是現(xiàn)代農(nóng)業(yè)中控制雜草的重要工具[5-6]。對(duì)羥基苯丙酮酸雙氧化酶（p-hydroxyphenylpyruvate dioxygenase，簡(jiǎn)稱HPPD）是除草劑中最重要的靶標(biāo)酶之一[7]。它是一種與大多數(shù)生物體中的色素合成和酪氨酸分解代謝有關(guān)的重要酶，在農(nóng)業(yè)和治療領(lǐng)域的藥物發(fā)現(xiàn)中都非常重要[8-12]。在自然界中，HPPD催化4-羥基苯丙酮酸（p-hydroxyphenylpyruvate，簡(jiǎn)稱HPPA）轉(zhuǎn)化為尿黑酸（4-hydroxyphenylpyruvate，HGA），抑制HPPD會(huì)阻止光合作用，從而導(dǎo)致質(zhì)體醌和生育酚不足，并最終導(dǎo)致植物生長(zhǎng)抑制、壞死和死亡[13-16]。自20世紀(jì)90年代以來(lái)，HPPD作為除草劑研究與開(kāi)發(fā)的一個(gè)重要靶標(biāo)酶始終是農(nóng)藥化學(xué)研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)。以HPPD為靶標(biāo)的除草劑已上市多年，其中包括三酮類(lèi)、吡唑類(lèi)和異唑類(lèi)等[17-18]。然而，雜草對(duì)商品化除草劑的抗藥性不斷增強(qiáng)[19-20]，以及它們對(duì)環(huán)境和人類(lèi)的毒副作用，導(dǎo)致人們迫切地想從天然產(chǎn)物中尋找新型除草劑，從而減緩抗性的發(fā)展并減少環(huán)境污染[21-22]。目前，已有報(bào)道證明HPPD抑制劑的先導(dǎo)化合物可來(lái)自桃金娘科（Myrtaceous）植物的揮發(fā)油纖精酮（leptospermone）[23]。因此，基于天然產(chǎn)物的除草劑研究越來(lái)越受到農(nóng)業(yè)領(lǐng)域的關(guān)注[24-26]。

天然產(chǎn)物具有多種生物學(xué)特性，常被用于解決農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的病蟲(chóng)害問(wèn)題，特別是植物源天然活性物質(zhì)，可為農(nóng)藥的活性結(jié)構(gòu)提供多種主要的先導(dǎo)構(gòu)型[27]。筆者所在課題組前期致力研究的透骨草和紫花苜蓿均為分布廣泛、藥用歷史悠久的多年生草本植物，其化學(xué)成分具有廣泛的生物活性，具備良好的植物殺蟲(chóng)劑和綠色除草劑開(kāi)發(fā)潛力[28-29]。另外，在農(nóng)藥研發(fā)領(lǐng)域，越來(lái)越多的研究通過(guò)使用計(jì)算化學(xué)在農(nóng)藥分子設(shè)計(jì)與開(kāi)發(fā)方面取得了重大突破。有研究者成功利用基于分子對(duì)接的虛擬篩選方法，得到HPPD抑制劑[30-31]。Fu等[32]成功構(gòu)建了基于藥效團(tuán)模型的虛擬篩選，利用分子對(duì)接技術(shù)識(shí)別HPPD活性位點(diǎn)關(guān)鍵殘基之間的相互作用，并識(shí)別出了潛在的HPPD抑制劑。分子對(duì)接已經(jīng)被證明是一個(gè)越來(lái)越重要的工具，其主要目的是通過(guò)計(jì)算方法預(yù)測(cè)配體-受體的復(fù)雜結(jié)構(gòu)，對(duì)龐大的化合物庫(kù)進(jìn)行虛擬篩選，根據(jù)分?jǐn)?shù)對(duì)結(jié)果進(jìn)行排序，并分析配體-受體的作用方式，這在先導(dǎo)化合物的發(fā)現(xiàn)和優(yōu)化中至關(guān)重要[33]。

基于上述情況考慮，本研究通過(guò)分子對(duì)接技術(shù)，從天然產(chǎn)物透骨草和紫花苜蓿中篩選出具有潛在HPPD抑制劑效用的化合物成分，以備后期對(duì)其進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾，為進(jìn)一步設(shè)計(jì)出新型綠色的HPPD小分子除草劑提供重要參考。

1 材料與方法

1.1 軟件

運(yùn)用軟件SYBYL-X 2.0（試用版）進(jìn)行分子對(duì)接操作，采用軟件Discovery Studio ViewerPro （DS ViewerPro） 5.0進(jìn)行對(duì)接模式分析。

1.2 受體蛋白的收集與處理

從RCSB蛋白數(shù)據(jù)庫(kù)中獲取含有原配體的HPPD靶蛋白復(fù)合物晶體結(jié)構(gòu)（PDB ID：1T47），并以pdb文件格式下載保存。該晶體結(jié)構(gòu)（圖1）分辨率為2.50 ，符合對(duì)接的精確要求。利用Sybyl-X 2.0軟件對(duì)目標(biāo)蛋白進(jìn)行修飾，提取配體保存為1T47_ligand.mol2文件，去除靶蛋白中的水分子以及金屬離子，對(duì)晶體結(jié)構(gòu)中缺失的氨基酸殘基進(jìn)行修正，并加氫，然后再對(duì)蛋白質(zhì)晶體結(jié)構(gòu)進(jìn)行優(yōu)化，最后生成活性口袋，保存文件1T47_H-L-0.50-0.sfxc用于后續(xù)的Surflex-Dock對(duì)接。

1.3 配體庫(kù)的構(gòu)建

自天然植物透骨草和紫花苜蓿中分離提取出的化合物主要來(lái)源于課題組前期的研究[34-37]。將41個(gè)化合物的平面結(jié)構(gòu)保存為MDL Molfile （*.mol）格式，隨后將化合物的3D結(jié)構(gòu)以mol.2格式保存，建立化合物庫(kù)。

1.4 分子對(duì)接

利用Sybyl-X2.0軟件中的Surflex-Dock程序，分別導(dǎo)入準(zhǔn)備好的蛋白sfxc格式文件和小分子化合物，選擇之前提取出的1T47_ligand.mol2作為參考配體，其他對(duì)接參數(shù)設(shè)為系統(tǒng)默認(rèn)值即可開(kāi)始對(duì)接。對(duì)接完成后整理結(jié)果，借助DS ViewerPro 5.0軟件將化合物與靶蛋白的結(jié)合效果進(jìn)行可視化并構(gòu)成模式圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 對(duì)接結(jié)果

在軟件的結(jié)果界面，可以看到每個(gè)配體-受體的對(duì)接得分，整理排序見(jiàn)表1。對(duì)接打分函數(shù) total-score 綜合考慮了分子極性、疏水性和焓值等因素，是評(píng)價(jià)小分子和蛋白結(jié)合能力強(qiáng)弱的標(biāo)準(zhǔn)，打分越高表示受體與配體的親和能力越好。一般認(rèn)為，total-score大于或等于7分有較好活性，大于或等于9分有非常好的活性[38-39]。通過(guò)對(duì)接，篩選出結(jié)合效果較優(yōu)（即total score≥7）的化合物分子10個(gè)（圖2）。其中，化合物A、B、D、F、G、I是從透骨草中分離提取得到的，化合物C、E、H、J是從紫花苜蓿中分離提取得到的。值得注意的是，化合物A、B、C的對(duì)接得分高于商品化除草劑吡草酮（benzofenap，得分8.78），有望成為潛在的HPPD抑制劑先導(dǎo)化合物。

2.2 可視化分析

現(xiàn)以對(duì)接得分較高的這些候選分子為例，說(shuō)明這些化合物的對(duì)接模式，配體化合物結(jié)構(gòu)見(jiàn)圖2。以蛋白1T47原配體和除草劑吡草酮的對(duì)接模式圖（圖3、圖4）為對(duì)照，分析這10個(gè)化合物分別與靶蛋白1T47的結(jié)合模式（圖5、圖6），通過(guò)比較說(shuō)明它們之間相似的相互作用模式。

由圖3可看出，蛋白1T47中的配體與周?chē)陌被釟埢鵓he364、Phe336和Leu367有疏水相互作用，與Phe364和Phe336形成π-π堆積作用，與His270有氫鍵作用，Asn363連接在鹵素原子位置。由圖4可知，在吡草酮的對(duì)接構(gòu)象中，配體完全嵌入活性口袋中，化合物與Phe359、Phe336和His270形成了π-π堆疊式相互作用，Phe364處有氫鍵作用，吡草酮的苯環(huán)面對(duì)面地與Phe336相互作用，Val217、Pro243、Val232、Phe347、Phe367在烷基上發(fā)揮作用，且它們之間都存在疏水相互作用。

由圖5可以直觀地了解到各個(gè)分子與靶蛋白1T47相對(duì)接的作用模式。化合物A與該蛋白的Glu349、Asn245、Thr295、Lys252有氫鍵作用，其中Asn245作用于羰基，Glu349和Thr295作用于羥基。該化合物與Gln255生成碳?xì)滏I，與Val189、His270、Phe336、Phe364、Leu367、Leu293存在疏水相互作用。配體B與1T47的Ser230、Phe359、Thr295有常規(guī)氫鍵作用，與Gln255和Gly360產(chǎn)生碳?xì)滏I，與Phe364和Phe336有π-π堆疊式作用，與Pro243、Leu293、Leu228、His270以及Leu367存在疏水相互作用。配體C與1T47的Asn245和Phe359有常規(guī)氫鍵作用，與His270產(chǎn)生碳?xì)滏I，與Phe364、Phe336、Leu293和Leu367存在疏水相互作用。

由圖6可看出， 化合物D中， Glu349生成了范德華力，His270、Phe359和Gly360有常規(guī)氫鍵作用，Thr295、Glu215處有碳?xì)滏I生成，Ser230存在供氫作用，Leu293對(duì)烷基作用，Phe336在苯環(huán)處形成 π-π 疊加作用?；衔顴中Gln255與Gln269在環(huán)上3個(gè)羥基處有常規(guī)氫鍵作用，Phe364作用于苯環(huán)產(chǎn)生堆疊效果，Ser230、Phe359、GLY360和Gln334處分別有碳?xì)滏I生成，Val232與Val217作用于烷基，存在疏水相互作用?；衔颋中His187和Glu349產(chǎn)生范德華力，Asn245在羰基和羥基處、Gln255在氧原子處以及His 270在羥基處均有常規(guī)氫鍵作用，Phe364和Phe336在苯環(huán)上形成T形作用，Val189垂直于苯環(huán)內(nèi)產(chǎn)生烷基作用?；衔颎中Ser230在羰基處和Thr295在羥基處有常規(guī)氫鍵作用，Phe364在苯環(huán)上有π-π疊加作用，Val217、Val232、Phe359三者均連在末端烷基位置上，Leu367和Leu293呈對(duì)立面作用在苯環(huán)上?；衔颒中Lys252和Asn245連在氧原子上產(chǎn)生氫鍵作用，TYR225和Phe364位于架構(gòu)前端有碳?xì)滏I，Phe336在苯環(huán)上有π-π疊加作用，Leu367有烷基作用?；衔颕中在羰基處的殘基Asn245和羥基處的Gln334存在常規(guī)氫鍵作用，Ser230連接在碳?xì)滏I上，Phe364和Phe359在苯環(huán)上產(chǎn)生π-π堆疊式作用，Val232、Val189和Pro243作用于烷基，也存在疏水作用?；衔颙中Gln269、Ser230連在氧原子上，以及羥基處的Gln255都產(chǎn)生常規(guī)氫鍵作用，Phe364在苯環(huán)上形成T形作用。

3 討論與結(jié)論

吡草酮是一種典型的吡唑類(lèi)商品化除草劑，2-苯甲酰基乙烯-1-醇基團(tuán)作為一個(gè)共同的結(jié)構(gòu)單元，存在于其化合物分子或其異構(gòu)體或其代謝物中，充當(dāng)?shù)孜颒PPA的α-酮酸部分的等排體，并且，2-苯甲?；蚁?1-醇基團(tuán)具有與HPPA競(jìng)爭(zhēng)HPPD活性中心的能力。由此可見(jiàn)植物進(jìn)入白化狀態(tài)是歸因于其吡唑部分與HPPD的結(jié)合和它的酶抑制性[40]。吡唑類(lèi)結(jié)構(gòu)主要包括吡唑部分和苯環(huán)部分，近年來(lái)不斷有研究對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行優(yōu)化，特別是苯并雜環(huán)類(lèi)，發(fā)現(xiàn)了許多優(yōu)秀的廣譜除草劑先導(dǎo)化合物[10，41-43]。

通過(guò)分子對(duì)接模擬，我們發(fā)現(xiàn)抑制劑小分子的烯醇結(jié)構(gòu)是與氨基酸殘基配位的關(guān)鍵，另外一個(gè)重要的作用力就是小分子與氨基酸殘基形成的 π-π堆積作用[44]。通過(guò)比較發(fā)現(xiàn)，在蛋白1T47原配體和吡草酮的對(duì)接結(jié)果中，Phe359、Phe336、His270、Phe364等氨基酸殘基在活性位點(diǎn)發(fā)揮了重要的作用，同時(shí)，本課題組經(jīng)虛擬篩選得到的分?jǐn)?shù)高于吡

草酮的化合物（A、B、C）不僅可以完全嵌入HPPD活性囊中，而且周?chē)即嬖陉P(guān)鍵的氨基酸殘基參與作用，與蛋白1T47原配體和吡草酮中產(chǎn)生的氫鍵和 π-π 堆積等作用相似。這些共同點(diǎn)證明了這3個(gè)化合物有潛力成為HPPD抑制劑的先導(dǎo)化合物，可用作進(jìn)一步優(yōu)化設(shè)計(jì)新的HPPD潛在抑制劑的依據(jù)。本研究提供了一套基于分子對(duì)接篩選HPPD抑制劑先導(dǎo)化合物的方案，為后期設(shè)計(jì)、合成新型綠色高效的HPPD抑制劑除草劑提供了參考。

致謝：由衷地感謝Tripos公司提供的軟件SYBYL-X 2.0（試用版），為本研究中進(jìn)行分子對(duì)接創(chuàng)造了技術(shù)條件。

參考文獻(xiàn)：

[1]孫金秋，任相亮，胡紅巖，等. 農(nóng)田雜草群落演替的影響因素綜述[J]. 雜草學(xué)報(bào)，2019，37（2）：1-9.

[2]Hao G F，Tan Y，Xu W F，et al. Understanding resistance mechanism of protoporphyrinogen oxidaseinhibiting herbicides：Insights from computational mutation scanning and site-directed mutagenesis [J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry，2014，62：7209-7215.

[3]馬小艷，馬 艷，馬亞杰，等. 關(guān)于將氮肥運(yùn)籌技術(shù)納入農(nóng)田雜草綜合防除體系的思考[J]. 雜草學(xué)報(bào)，2018，36（4）：1-5.

[4]Wang D W，Li Q，Wen K，et al. Synthesis and herbicidal activity of pyrido[2，3-d]pyrimidine-2，4-dione-benzoxazinone hybrids as protoporphyrinogen oxidase inhibitors [J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry，2017，65：5278-5286.

[5]陳仕紅，何永福，冉海燕，等. 幾種除草劑對(duì)冬甘藍(lán)田雜草防除效果及安全性[J]. 雜草學(xué)報(bào)，2018，36（1）：53-56.

[6]劉 延，沈奕德，王 亞，等. 南繁水稻田雜草發(fā)生與化學(xué)防治[J]. 雜草學(xué)報(bào)，2019，37（1）：51-55.

[7]Neidig M L，Kavana M，Moran G R，et al. CD and MCD studies of the non-heme ferrous active site in （4-hydroxyphenyl） pyruvate dioxygenase：Correlation between oxygen activation in the extradiol and α-KG-dependent dioxygenases [J]. Journal of the American Chemical Society，2004，126：4486-4487.

[8]Neidig M L，Decker A，Choroba O W，et al. Spectroscopic and electronic structure studies of aromatic electrophilic attack and hydrogen-atom abstraction by non-heme iron enzymes [J]. Proceedings of the National Academy of Sciences，2006，103：12966-12973.

[9]Lee D L，Prisbylla M P，Cromartie T H，et al. The discovery and structural requirements of inhibitors of p-hydroxyphenylpyruvate dioxygenase [J]. Weed Science，1997，45：601-609.

[10]Wang D W，Lin H Y，Cao R J，et al. Synthesis and herbicidal evaluation of triketone-containing quinazoline-2，4-diones [J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry，2014，62：11786-11796.

[11]Wang D W，Lin H Y，Cao R J，et al. Design，synthesis and herbicidal activity of novel quinazoline-2，4-diones as 4-hydroxyphenylpyruvate dioxygenase inhibitors [J]. Pest Management Science，2015，71：1122-1132.

[12]Xu Y L，Lin H Y，Cao R J，et al. Pyrazolone-quinazolone hybrids：a novel class of human 4-hydroxyphenylpyruvate dioxygenase inhibitors [J]. Bioorganic and Medicinal Chemistry，2014，22：5194-5211.

[13]Purpero V M，Moran G R. Catalytic，noncatalytic，and inhibitory phenomena：Kinetic analysis of （4-hydroxyphenyl） pyruvate dioxygenase from Arabidopsis thaliana [J]. Biochemistry，2006，45：6044-6055.

[14]Wu C S，Huang J L，Sun Y S，et al. Mode of action of 4-hydroxyphenylpyruvate dioxygenase inhibition by triketone-type inhibitors [J]. Journal of Medicinal Chemistry，2002，45：2222-2228.

[15]Yang C，Pflugrath J W，Camper D L，et al. Structural basis for herbicidal inhibitor selectivity revealed by comparison of crystal structures of plant and mammalian 4-hydroxyphenylpyruvate dioxygenases [J]. Biochemistry，2004，43：10414-10423.

[16]Borowski T，Bassan A，Siegbahn P E M. 4-Hydroxyphenylpyruvate dioxygenase：A hybrid density functional study of the catalytic reaction mechanism [J]. Biochemistry，2004，43：12331-12342.

[17]Woodyard A J，Hugie J A，Riechers D E. Interactions of mesotrione and atrazine in two weed species with different mechanisms for atrazine resistance [J]. Weed Science，2009，57：369-378.

[18]Witschel M. Design，synthesis and herbicidal activity of new iron chelating motifs for HPPD-inhibitors [J]. Bioorganic and Medicinal Chemistry，2009，17：4221-4229.

[19]王紅春，徐蓬，孫鈺晨，等. 江蘇省稻田雜草的發(fā)生現(xiàn)狀與防控建議[J]. 雜草學(xué)報(bào)，2019，37（4）：1-5.

[20]賈 芳，崔海蘭，李香菊，等. 耐草甘膦雜草的研究現(xiàn)狀[J]. 雜草學(xué)報(bào)，2019，37（1）：1-9.

[21]Fu Y，Zhang D，Kang T，et al. Fragment splicing-based design，synthesis and safener activity of novel substituted phenyl oxazole derivatives [J]. Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters，2019，29：570-576.

[22]Yang C，Zhi X Y，Li J. Natural products-based insecticidal agents 20. Design，synthesis and insecticidal activity of novel honokiol/magnolol azo derivatives [J]. Industrial Crops and Products，2015，76：761-767.

[23]Dayan F E，Singh N，McCurdy C R，et al. β-Triketone inhibitors of plantp-hydroxyphenylpyruvate dioxygenase：Modeling and comparative molecular field analysis of their interactions [J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry，2009，57（12）：5194-5200.

[24]Diao W R，Hu Q P，F(xiàn)eng S S，et al. Chemical composition and antibacterial activity of the essential oil from green Huajiao （Zanthoxylum schinifolium） against selected foodborne pathogens [J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry，2013，61：6044-6049.

[25]Lin L，Mulholland N，Wu Q Y，et al. Synthesis and antifungal activity of novel sclerotiorin analogues [J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry，2012，60：4480-4491.

[26]Sousa R M O F，Rosa J S，Oliveira L，et al. Activities of apiaceae essential oils against armyworm，Pseudaletia unipuncta （Lepidoptera：Noctuidae） [J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry，2013，61：7661-7672.

[27]蘇 生，黃 瑞，張 莉，等. 豆科植物殺蟲(chóng)殺菌資源及其活性成分研究進(jìn)展[J]. 現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2016，6：112-116.

[28]Liu X G，Lv M C，Bian J，et al. Research advances on the chemical constituents and pharmacological activities of Phryma leptostachya L. [J]. Asina Journal of Traditional Medicines，2018，13（6）：233-241.

[29]李 剛. 紫花苜蓿研究進(jìn)展[J]. 安徽農(nóng)學(xué)通報(bào)，2019，25（14）：71-75.

[30]Fu Y，Sun Y N，Yi K H，et al. Combination of virtual screening protocol by in silico toward the discovery of novel 4-hydroxyphenylpyruvate dioxygenase inhibitors [J]. Frontiers in Chemistry，2018，6：14.

[31]Liu Y X，Gao S，Ye T，et al. Combined 3D-quantitative structure-activity relationships and topomer technology-based molecular design of human 4-hydroxyphenylpyruvate dioxygenase inhibitors [J]. Future Medicinal Chemistry，2020，12：795-811.

[32]Fu Y，Liu Y X，Yi K H，et al. Quantitative structure activity relationship studies and molecular dynamics simulations of 2-（aryloxyacetyl） cyclohexane-1，3-diones derivatives as 4-hydroxyphenylpyruvate dioxygenase inhibitors [J]. Frontiers in Chemistry，2019，7：556.

[33]Ravichandran R，Sundararajan R. In silico-based virtual drug screening and molecular docking analysis of phyto chemical derived compounds and FDA approved drugs against BRCA1 receptor [J]. Journal of Cancer Prevention & Current Research，2017，8（2）：00268.

[34]孫羽俅. 紫花苜蓿中三萜皂苷及其神經(jīng)保護(hù)活性研究[D]. 沈陽(yáng)：沈陽(yáng)化工大學(xué)，2019.

[35]呂夢(mèng)超. 紫花苜?；瘜W(xué)成分研究及其抗神經(jīng)退行性疾病作用機(jī)制的網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)初探[D]. 沈陽(yáng)：沈陽(yáng)化工大學(xué)，2019.

[36]岳丹丹. 透骨草中化學(xué)成分及其神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)活性研究[D]. 沈陽(yáng)：沈陽(yáng)化工大學(xué)，2020.

[37]黃明遠(yuǎn). 紫花苜?；瘜W(xué)成分和生物活性研究[D]. 沈陽(yáng)：沈陽(yáng)化工大學(xué)，2018.

[38]Cavasotto C N，Abagyan R A. Protein flexibility in ligand docking and virtual screening to protein kinases [J]. Journal of Molecular Biology，2004，337（1）：209-225.

[39]林子峰，黃新安，徐培平，等. 基于虛擬篩選的熱毒寧抗HRV 3C蛋白酶抑制劑作用的研究[J]. 中藥藥理與臨床，2017，33（4）：142-146.

[40]Grossmann K，Ehrhardt T. On the mechanism of action and selectivity of the corn herbicide toprame-zone：a new inhibitor of 4-hydroxyphenylpyruvate dioxygenase [J]. Pest Management Science，2007，63（5）：429-439.

[41]Jeanmart S，Edmunds A J F，Lamberth C，et al. Synthetic approaches to the 2010—2014 new agro-chemicals [J]. Bioorganic and Medicinal Chemistry，2016，24（3）：317-341.

[42]Wang D W，Lin H Y，Cao R J，et al. Synthesis and herbicidal activity of triketone quinoline hybrids as novel 4-hydroxyphenylpyruvate dioxygenase inhibitors [J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry，2015，63（23）：5587-5596.

[43]Lei K，Hua X W，Tao Y Y，et al. Discovery of （2-benzoylethen-1-ol）-containing 1，2-benzothiazine derivatives as novel 4-hydroxyphenylpyruvate dioxygenase （HPPD） inhibiting-based herbicide lead compounds [J]. Bioorganic and Medicinal Chemistry，2016，24（2）：92-103.

[44]徐玉玲. 新型吡唑類(lèi)HPPD抑制劑的設(shè)計(jì)、合成及生物活性研究[D]. 武漢：華中師范大學(xué)，2015.張俊有，張棟源，蔣家珍. 采用半果接種法研究幾種殺菌劑對(duì)芒果炭疽病的防治效果[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2020，48（24）：102-107.