亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        乳酸菌對(duì)紅曲黃酒品質(zhì)的影響研究

        2020-02-22 08:00:46董蘊(yùn)王強(qiáng)仇港楊成聰羅晶晶馬磊郭壯趙慧君
        食品研究與開(kāi)發(fā) 2020年3期
        關(guān)鍵詞:分析

        董蘊(yùn),王強(qiáng),仇港,楊成聰,羅晶晶,馬磊,郭壯,趙慧君,*

        (1.湖北文理學(xué)院食品科學(xué)技術(shù)學(xué)院鄂西北傳統(tǒng)發(fā)酵食品研究所,湖北襄陽(yáng)441053;2.棗陽(yáng)市食品藥品監(jiān)督管理局,湖北襄陽(yáng)441021)

        紅曲,又稱紅米、紅米曲,能夠治療高血壓,并且能夠調(diào)節(jié)人體血脂[1-2]。紅曲黃酒是將糯米作為原料,將紅曲作為糖化發(fā)酵劑釀造而成的[3],并且黃酒的酒精度比較低,口味清爽適口,富含極高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值,同時(shí)黃酒還具有抗氧化抗衰老、降血壓降膽固醇和調(diào)節(jié)機(jī)體新陳代謝的功能,因此適當(dāng)?shù)娘嬘糜欣谌梭w的健康[4-5]。乳酸菌是指發(fā)酵糖類主要產(chǎn)物為乳酸的一類無(wú)芽孢、革蘭氏染色陽(yáng)性細(xì)菌的總稱[6],它是一種存在與人體內(nèi)的益生菌。而且乳酸菌能夠控制人體內(nèi)毒素水平,保護(hù)肝臟并增強(qiáng)肝臟的解毒、排毒功能[7-8];具有免疫調(diào)節(jié)作用,增強(qiáng)人體免疫力和抵抗力[9-10];能夠使腸道菌群的構(gòu)成發(fā)生有益變化,改善人體胃腸道功能,恢復(fù)人體腸道內(nèi)菌群平衡,形成抗菌生物屏障,維護(hù)人體健康[11-12];且具有抗腫瘤、預(yù)防癌癥的作用[13]。

        本試驗(yàn)主要研究乳酸菌對(duì)紅曲黃酒的總酸、可溶性固形物、有機(jī)酸含量和滋味品質(zhì)的影響。即在紅曲黃酒樣品中添加不同的乳酸菌,發(fā)酵完成后采用酸堿直接滴定法、折光儀法、高效液相—示差折光法和電子舌技術(shù)并結(jié)合統(tǒng)計(jì)學(xué)方法,研究紅曲黃酒樣品的理化性質(zhì)、有機(jī)酸和各滋味指標(biāo)的變化規(guī)律,分析添加乳酸菌對(duì)紅曲黃酒的整體品質(zhì)。本研究的目的是研究米酒來(lái)源乳酸菌對(duì)紅曲黃酒的品質(zhì)影響,探討其在紅曲黃酒中應(yīng)用的可行性,以其為后續(xù)紅曲黃酒產(chǎn)品的開(kāi)發(fā)提供新的思路。

        1 材料與方法

        1.1 材料

        米酒:湖北米婆婆生物科技有限公司;紅曲:麗水力克生物科技有限公司;糯米:襄陽(yáng)市鑫源超市。

        內(nèi)部溶液、參比溶液、陰離子溶液、陽(yáng)離子溶液:日本Insent 公司;乙腈(色譜純)、磷酸二氫鉀(分析純)、磷酸(分析純)、硫酸銅(分析純)、亞鐵氰化鉀(分析純)、次甲基(分析純)、葡萄糖(分析純)、氫氧化鈉(分析純)、氯化鈉(分析純)、碳酸鈣(分析純):上海國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;MRS 培養(yǎng)基、Luria-Bertani 培養(yǎng)基、石蕊牛乳培養(yǎng)基:青島海博生物技術(shù)有限公司;AxyPrep PCR 清潔試劑盒:康寧生命科學(xué)有限公司;dNTP Mix、2×PCR mix、pMD 18-T 載體、rTaq:寶日醫(yī)生物技術(shù)(北京)有限公司(takara 中國(guó));溶菌酶、蛋白酶K:上海生工生物工程有限公司。

        1.2 儀器與設(shè)備

        LC-20ADXR 高效液相色譜儀:日本島津公司;SA 402B 電子舌:日本 Insent 公司;Abbemat 350 全自動(dòng)折光儀:奧地利安東帕中國(guó)有限公司;vetiri 梯度基因擴(kuò)增儀:美國(guó)AB 公司;BX53 全功能生物顯微鏡:美國(guó)奧林巴斯公司。

        1.3 方法

        1.3.1 米酒樣品的采集

        從湖北省孝感市采集4 份米酒樣品,裝入采樣箱中快速的帶回實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行樣品處理。

        1.3.2 米酒中乳酸菌的分離鑒定

        將米酒樣品各吸取1 mL 上清后加入石蕊牛乳培養(yǎng)基在37 ℃培養(yǎng)箱中富集24 h,取富集液0.5 mL 于0.85%的生理鹽水中進(jìn)行倍比稀釋,取稀釋10-5倍和10-6倍的溶液在含有碳酸鈣的MRS 固體培養(yǎng)基上涂布,并在37 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h,挑取有透明圈的單菌落純化3 次后用30%的甘油將菌落凍存于-80 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

        采用十六烷基三甲基溴化銨(cetrimonium bromide,CTAB) 法提取菌株的 DNA 后用引物 27F 和1495R 擴(kuò)增菌株的16S rDNA,擴(kuò)增體系為:10x 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerasechainreaction,PCR)緩沖液2.5μL,dNTP(2.5 mmol/L)2 μL,27F 0.5 μL ,1495R 0.5 μL,rTaq 0.5 μL,DNA 模板 2 μL,ddH2O 補(bǔ)充至 25 μL;擴(kuò)增條件為:94 ℃,4 min;94 ℃,45 s;55 ℃,45 s;72 ℃,1 min 30 s;72 ℃,10 min;30 個(gè)循環(huán)。1.0%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)PCR 產(chǎn)物后清潔試劑盒進(jìn)行清潔;隨后將PCR 清潔產(chǎn)物進(jìn)行連接、轉(zhuǎn)化和驗(yàn)證,將陽(yáng)性克隆送往測(cè)序公司進(jìn)行測(cè)序。將測(cè)序所得結(jié)果進(jìn)行同源性分析后,應(yīng)用Mega7.0 軟件構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)。

        1.3.3 紅曲黃酒的制作

        糯米經(jīng)浸米、蒸煮、晾曬后添加80 g 紅曲,295 mL漿水和390 mL 純凈水,同時(shí)將在米酒中分離出的9 株乳酸菌分別加入釀造罐中,對(duì)照組不添加乳酸菌。黃酒放入28 ℃培養(yǎng)箱中發(fā)酵7 d 后置于18 ℃中后發(fā)酵14 d。將發(fā)酵好的紅曲黃酒從培養(yǎng)箱中取出后,取300 g 樣品于離心機(jī) 4 ℃ 3 000 r/min 離心 10 min 取上清備用。

        1.3.4 紅曲黃酒中可溶性固形物與總酸的影響測(cè)定

        1)可溶性固形物:將紅曲黃酒滴5 滴于全自動(dòng)折光儀的鏡面,測(cè)定紅曲黃酒的可溶性固形物,取3 個(gè)平行的平均值為最后測(cè)量值。

        2)總酸:根據(jù)國(guó)標(biāo) GB/T 13662-2018《黃酒》測(cè)總酸的步驟,即將10 mL 樣品置于150 mL 燒杯中,并加無(wú)二氧化碳的水50 mL,置于磁力攪拌器上,攪拌時(shí)用氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)液滴定,直至pH8.20 為終點(diǎn)。分別記錄數(shù)據(jù),同時(shí)做空白試驗(yàn)。

        1.3.5 紅曲黃酒滋味品質(zhì)的測(cè)定

        按照王玉榮[14]的方法,將紅曲黃酒用電子舌來(lái)測(cè)定酸味、咸味、苦味、澀味和鮮味5 個(gè)基本味及苦味、澀味、鮮味的3 個(gè)回味。將在陰離子或陽(yáng)離子中洗滌后的傳感器在參比溶液中浸泡30 s,得到參比溶液電勢(shì)Vr;再置于待測(cè)樣品中浸泡30 s,得到樣品溶液電勢(shì)Vs,則可通過(guò)不同傳感器Vs-Vr的電勢(shì)差值評(píng)價(jià)鮮味、苦味、澀味、咸味和酸味的基本值;洗滌3 s 后與參比溶液中浸泡 30 s,得到電勢(shì) Vr’,通過(guò) Vr’-Vr的電勢(shì)差檢測(cè)苦味、澀味和鮮味的回味。每個(gè)樣品重復(fù)測(cè)4 次,選后3 次的測(cè)量數(shù)據(jù)作為本研究分析的原始數(shù)據(jù)。

        1.3.6 紅曲黃酒有機(jī)酸的測(cè)定

        根據(jù)郭瑛[15]的方法測(cè)定紅曲黃酒中有機(jī)酸的含量。其中標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制:稱取琥珀酸1.5 g(加熱)、酒石酸 0.75 g、蘋果酸 0.3 g、乳酸 1.5 g、草酸 0.15 g,然后用超純水溶解并定容至50 mL,配置成混合標(biāo)準(zhǔn)母液。分別吸取 0.1、0.2、0.5、1.0、1.4 mL 的母液并用超純水定容至 10 mL 再加 200 μL 的磷酸混樣做標(biāo)曲,經(jīng) 0.22 μL濾頭過(guò)濾后使用高效液相色譜法(high performance liquid chromatography,HPLC)測(cè)定。將紅曲黃酒樣品各取 2 mL 加 200 μL 磷酸定容到 10 mL,再用 0.22 μL 濾膜過(guò)濾后置于2 mL 進(jìn)樣品中使用HPLC 分析。

        測(cè)定條件為檢測(cè)器:紫外吸收檢測(cè)器;流動(dòng)相:采用0.01 mol/L KH2PO4(pH2.9);柱溫:30 ℃;流速:1 mL/min;壓力:22.0 MPa;進(jìn)樣體積:20 μL;分離柱型號(hào):C18 Agilent ZORBAX SB-Aq(4.6×250 mm)5 μm;檢測(cè)波長(zhǎng):214 nm。

        1.4 統(tǒng)計(jì)分析

        本研究使用主成分分析(principal component anal ysis,PCA)對(duì)紅曲黃酒滋味品質(zhì)整體結(jié)構(gòu)的差異進(jìn)行分析;并使用SAS9.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,使用Origin2017軟件繪圖,同時(shí)使用Mega7.0 構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)。

        2 結(jié)果與分析

        2.1 米酒曲中乳酸菌的分離鑒定

        從4 個(gè)米酒曲樣品中共分離出了9 株疑似乳酸菌菌株,所有菌株的過(guò)氧化氫試驗(yàn)均為陰性,革蘭氏染色均為陽(yáng)性,且形態(tài)均為球狀。在菌株分離的基礎(chǔ)上,本研究對(duì)疑似乳酸菌菌株進(jìn)行了基因組DNA 提取,并進(jìn)一步對(duì)其16S rDNA 進(jìn)行了PCR 擴(kuò)增,將PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物于1.0%的瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行檢測(cè),如圖1所示。

        圖1 乳酸菌16S rDNA 的PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物凝膠電泳圖Fig.1 Gel electrophoresis of PCR amplified product of lactic acid bacteria 16S rDNA

        由圖1 可知,9 個(gè)泳道均在1 500 bp 左右的位置出現(xiàn)了一條明亮的條帶,同時(shí)所有泳道并未出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象,因而所有菌株的16S rDNA 片段PCR 擴(kuò)增較為成功,將PCR 產(chǎn)物進(jìn)行清潔、連接和建克隆后,送往測(cè)序公司進(jìn)行測(cè)序,將反饋后的序列結(jié)果進(jìn)行Blast 分析,得到表1 所示結(jié)果。

        由表1 可知,9 株乳酸菌菌株與其對(duì)應(yīng)的模式菌株的序列同源性均達(dá)在99%以上,菌株IMAU50214、IMAU50215、IMAU50216 和 IMAU50218 被 鑒 定 為Weissella cibaria(食竇魏斯氏菌),IMAU50381 和I MAU50382 被鑒定為Weissella confusa(融合魏斯菌),IMAU50387、IMAU50399 和 IMAU50400 被鑒定為戊糖片球菌。同時(shí),將菌株在同源性分析的基礎(chǔ)上,使用Mega7.0 構(gòu)建了系統(tǒng)發(fā)育樹(shù),結(jié)果如圖2 所示。

        表1 乳酸菌16S rDNA 序列分析結(jié)果Table 1 Results of 16S rDNA sequence analysis of lactic acid bacteria

        圖2 基于米酒中乳酸菌16S rDNA 序列系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)Fig.2 Phylogenetic tree based on lactic acid bacteria 16S rDNA sequence in rice wine

        由圖2 可知,菌株 IMAU50214、IMAU50215、IMAU50216 和 IMAU50218 與 Weissella cibaria LMG 17699T(AJ295989)形成了第一個(gè)類群,鑒定為食竇魏斯氏菌;菌株 IMAU50387、IMAU50400 和 IMAU50399 與Pediococcus pentosaceus DSM20336T(AJ305321)形成了第二個(gè)類群,鑒定為戊糖片球菌;菌株IMAU50381和 IMAU50382 與 WeissellaconfusaJCM1093(AB023241)形成了第三個(gè)類群,鑒定為融合魏氏菌。同時(shí)結(jié)合表1發(fā)現(xiàn)因此該鑒定結(jié)果的準(zhǔn)確性較高。

        2.2 不同乳酸菌菌株制備紅曲黃酒總酸與可溶性固形物的分析

        紅曲黃酒的可溶性固形物主要是黃酒中的糖類物質(zhì),根據(jù)紅曲黃酒所測(cè)得可溶性固形物和總酸的指標(biāo)進(jìn)行評(píng)價(jià),結(jié)果如圖3 所示。

        圖3 紅曲黃酒總酸和可溶性固形物箱型圖Fig.3 Box diagram of total acid and soluble solids in monascus yellow rice wine

        由圖3 可知,較對(duì)照組,添加乳酸菌發(fā)酵的紅曲黃酒的可溶性固形物和總酸有著顯著的差異。添加乳酸菌發(fā)酵的紅曲黃酒的可溶性固形物的含量顯著高于對(duì)照組,總酸的含量低于對(duì)照組。并且,添加乳酸菌發(fā)酵的紅曲黃酒的可溶性固形物含量變化幅度不大,而總酸含量變化幅度較大。

        2.3 乳酸菌對(duì)紅曲黃酒有機(jī)酸的影響

        本研究使用HPLC 對(duì)混合標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)行分析,分析結(jié)果如圖4 所示。

        由圖4 分析可知,較對(duì)照組而言,添加乳酸菌W.confuse IMAU50381 和 W.confuse IMAU50382 發(fā)酵的紅曲黃酒中,蘋果酸經(jīng)過(guò)“二次發(fā)酵”全部轉(zhuǎn)化為乳酸,且菌株IMAU50381 和IMAU50382 均為(融合魏氏菌); 添 加 乳 酸 菌 IMAU50387、IMAU50399 和 IMAU50400 發(fā)酵的紅曲黃酒中蘋果酸的含量增加,同時(shí)添加菌株IMAU50387 和IMAU50399 發(fā)酵的紅曲黃酒乙酸降低,且這3 株菌均為Pediococcus pentosaceus(戊糖片球菌)。而添加乳酸菌的IMAU50215 發(fā)酵的紅曲黃酒中,琥珀酸的含量顯著增加,同時(shí)乙酸的含量減少。在添加IMAU50214 發(fā)酵的紅曲黃酒中檸檬酸含量減少同時(shí)蘋果酸含量為零,且樣品總體有機(jī)酸含量較對(duì)照組而言減少。

        2.4 乳酸菌對(duì)紅曲黃酒滋味的影響

        本研究進(jìn)一步對(duì)發(fā)酵紅曲黃酒的各滋味進(jìn)行相對(duì)強(qiáng)度分析,可得到結(jié)果如圖5 所示。

        圖5 紅曲黃酒各滋味指標(biāo)相對(duì)強(qiáng)度箱型圖Fig.5 The relative strength of different flavor indexes of red koji rice wine box

        經(jīng)圖5 分析可知,與對(duì)照相比,添加乳酸菌發(fā)酵的紅曲黃酒在酸味、苦味、后味B(苦味的回味)和鮮味4個(gè)滋味指標(biāo)上顯著降低;但添加乳酸菌發(fā)酵的紅曲黃酒在咸味上上升;同時(shí),紅曲黃酒對(duì)澀味、后味A(澀味的回味)和豐度(鮮味的回味)影響不顯著。

        2.5 乳酸菌對(duì)紅曲黃酒品質(zhì)整體結(jié)構(gòu)的差異性分析

        主成分分析(principal component anaiysis,PCA)也稱主分量分析,是識(shí)別算法中最基本的多元統(tǒng)計(jì)方法,同時(shí)能夠利用降維的思想,將多指標(biāo)轉(zhuǎn)變?yōu)樯贁?shù)綜合指標(biāo)[16]。本研究在使用電子舌分析添加乳酸菌發(fā)酵的紅曲黃酒滋味品質(zhì)的基礎(chǔ)上,使用PCA 對(duì)紅曲黃酒的品質(zhì)進(jìn)行了分析。經(jīng)PCA 分析發(fā)現(xiàn),信息主要集中在前3 個(gè)主成分,累計(jì)方差貢獻(xiàn)率為90.44%,其中第一主成分和第二主成分的貢獻(xiàn)率分別為31.88%和28.44%。同時(shí)基于主成分分析的添加乳酸菌發(fā)酵的紅曲黃酒因子載荷圖與因子得分圖分別如圖6 和圖7 所示。

        圖6 基于紅曲黃酒品質(zhì)主成分分析的因子載荷圖Fig.6 Factor loading diagram based on principal component analysis of red koji rice wine quality

        由圖6 可知,第一主成分主要由鮮味、豐度(鮮味的回味)和苦味3 個(gè)指標(biāo)構(gòu)成,第二主成分主要由澀味、咸味和后味A(澀味的回味)3 個(gè)指標(biāo)構(gòu)成。且澀味和苦味分布在第一象限,后味A(澀味的回味)分布在第二象限,咸味分布在第三象限,鮮味和豐度(鮮味的回味)分布在第四象限。

        圖7 基于紅曲黃酒品質(zhì)主成分分析的因子得分圖Fig.7 Factor score diagram based on principal component analysis of monascus rice wine quality

        由圖7 可知,不添加乳酸菌發(fā)酵的紅曲黃酒即對(duì)照組的空間排布整體在第四象限,添加乳酸菌菌株IMAU50381 和IMAU50382 發(fā)酵的紅曲黃酒分布在第一象限,因此其澀味和苦味的滋味指標(biāo)較高,且這兩株菌均為Weissella confuse;添加乳酸菌菌株I MAU50214、IMAU50215 和 IMAU50216 發(fā)酵的紅曲黃酒分布在第四象限,因此其鮮味和豐度(鮮味的回味) 的滋味指標(biāo)較高,且這3 株菌均為Weissella cibaria;添加乳酸菌菌株 IMAU50387、IMAU50400 和IMAU50399 發(fā)酵的紅曲黃酒分布在第三和第四象限,因此其咸味的滋味指標(biāo)較高,且這3 株菌均為Pediococcus pentosaceus。因此可以發(fā)現(xiàn)同種乳酸菌發(fā)酵的紅曲黃酒呈現(xiàn)出了明顯的聚類趨勢(shì),且不同種類的乳酸菌發(fā)酵的紅曲黃酒的各滋味品質(zhì)各不相同,但是相同種類的乳酸菌發(fā)酵紅曲黃酒樣品的品質(zhì)有相似的影響。

        3 結(jié)論

        本研究從米酒樣品中分離出了9 株乳酸菌,其中菌株 IMAU50214、IMAU50215、IMAU50216 和 IMAU50218鑒定為 Weissella cibaria;菌株 IMAU50387、IMAU50400和IMAU50399 鑒定為Pediococcus pentosaceus;菌株IMAU50381 和 IMAU50382 鑒定為 Weissella confuse。隨后用這9 株乳酸菌發(fā)酵紅曲黃酒,并將紅曲黃酒進(jìn)行分析,結(jié)果表明:添加乳酸菌發(fā)酵的紅曲黃酒的可溶性固形物的含量顯著高于對(duì)照組,總酸的含量低于對(duì)照組,并經(jīng)PCA 分析可知相同種類的乳酸菌發(fā)酵紅曲黃酒的品質(zhì)有相似的影響。

        猜你喜歡
        分析
        禽大腸桿菌病的分析、診斷和防治
        隱蔽失效適航要求符合性驗(yàn)證分析
        電力系統(tǒng)不平衡分析
        電子制作(2018年18期)2018-11-14 01:48:24
        電力系統(tǒng)及其自動(dòng)化發(fā)展趨勢(shì)分析
        經(jīng)濟(jì)危機(jī)下的均衡與非均衡分析
        對(duì)計(jì)劃生育必要性以及其貫徹實(shí)施的分析
        GB/T 7714-2015 與GB/T 7714-2005對(duì)比分析
        出版與印刷(2016年3期)2016-02-02 01:20:11
        網(wǎng)購(gòu)中不良現(xiàn)象分析與應(yīng)對(duì)
        中西醫(yī)結(jié)合治療抑郁癥100例分析
        偽造有價(jià)證券罪立法比較分析
        欧美性福利| 亚州国产av一区二区三区伊在 | 亚洲日韩一区二区一无码| 青青草视频国产在线观看| 男奸女永久免费视频网站| 亚洲精品无码久久久久去q| 亚洲人成网站在线观看播放 | 中文字幕一区二区网址| 内射白浆一区二区在线观看| 乌克兰少妇xxxx做受野外| 被黑人做的白浆直流在线播放| 日韩极品免费在线观看| 三级国产精品久久久99| 亚洲av无码专区首页| 国产成人亚洲综合无码精品| 亚洲国产一区二区精品| 久久久久人妻精品一区二区三区| 国产suv精品一区二区883| 国产综合精品久久亚洲| 亚洲一区二区三区免费av| 波多野结衣中文字幕一区二区三区| 久久乐国产精品亚洲综合| 欧美人与动牲交片免费| 日本视频在线观看一区二区 | 亚洲公开免费在线视频| 一级内射免费观看视频| 99久久亚洲精品日本无码| 国产剧情国产精品一区| 日韩av一区在线播放| 无码成年性午夜免费网站蜜蜂| 成人久久精品人妻一区二区三区| 亚洲精品色午夜无码专区日韩| 亚洲肥老太bbw中国熟女| 日韩久久免费精品视频| 国产av一区二区三区性入口| 久青草久青草视频在线观看| 久久久亚洲精品蜜桃臀| 精彩视频在线观看一区二区三区| 免费操逼视频| 囯产精品无码一区二区三区| 久久亚洲综合亚洲综合|