★ 張雅莉 吉燕華 姜瓔娜 聶鵬 曾治君*（江西中醫(yī)藥大學(xué)/江西省中醫(yī)病因生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 南昌 330004）

由于環(huán)境氣候的變化和肥甘厚膩食物的過度攝取，導(dǎo)致了脾虛濕盛證患者越來越多。該證出現(xiàn)的腹瀉腹脹、食少納呆、面色萎黃等癥狀也極大的影響了人們的正常生活。所以對于研究出治療脾虛濕盛證的藥物具有很大的臨床意義。而模型的構(gòu)建則是藥物研制的至關(guān)重要的一步。比如為尋找相關(guān)中草藥以解決表現(xiàn)為平素面垢油光、易生痤瘡粉刺、身重困倦的濕熱證。如，董銀卯等［1］在《祛濕清熱方對濕熱模型的作用》中采取多因素致濕熱模型，對中醫(yī)驗(yàn)方—祛濕清熱方進(jìn)行了藥理作用評價(jià)，取得了不錯(cuò)效果。

在相關(guān)文獻(xiàn)中，我們發(fā)現(xiàn)了大量脾虛模型，或濕盛模型的單獨(dú)構(gòu)建，而現(xiàn)實(shí)中脾虛多由濕盛造成，濕也易致脾虛，所以脾虛和濕盛往往同時(shí)存在。所以本文旨在同時(shí)研究脾虛和濕盛，及如何構(gòu)建脾虛濕盛大小鼠模型。

從20世紀(jì)70年代，由北京師范大學(xué)首次報(bào)道了大黃脾虛動(dòng)物模型開始［2］，到1982年前中國中醫(yī)研究院基礎(chǔ)理論研究所應(yīng)用大黃致瀉來造脾虛大鼠模型［3］，前后經(jīng)歷了十多年，可見構(gòu)建一個(gè)符合臨床特點(diǎn)的動(dòng)物模型的難度非同一般。然而，近年來，饑飽失常、苦寒瀉下、勞倦傷脾、甘肥過度等各類脾氣虛證模型相繼問世。由于大小鼠和人的種屬差異，且動(dòng)物急性實(shí)驗(yàn)不符合虛證臨床，也不能排除藥物的中毒反應(yīng)和峻瀉導(dǎo)致生化乏源，致使難以說明是脾氣本身的“虛”。所以脾虛濕盛證大小鼠模型的構(gòu)建以解決以上問題為前提，來構(gòu)建更符合臨床的脾虛動(dòng)物模型和以藥物的研制提供基礎(chǔ)為目標(biāo)。

1 大小鼠脾虛模型的構(gòu)建

脾虛［4］包括脾氣虛和脾陽虛，脾氣虛多由于飲食不節(jié)、勞累或久病所致。而脾陽虛多由于脾氣虛加重，出現(xiàn)明顯的寒證所致，或是過用寒涼藥物及攻下太過而引起的以泄瀉、腹痛為主要癥狀的病證。臨床上脾虛患者可因久服耗氣破氣的中藥導(dǎo)致，或過食肥甘厚味、寒涼之品，或腫瘤患者的放療化療等造成。

1.1 耗氣破氣法陳小野等［5］用厚樸、枳實(shí)、大黃按3∶3∶2比例常規(guī)制成100%煎劑隔日灌喂中藥4mL/只（雄鼠）或3mL/只（雌鼠），隔日喂食。造模26周以期達(dá)到造成慢性脾虛大鼠模型。與對照組相比，實(shí)驗(yàn)結(jié)果為脾虛證組大鼠的病理改變以慢性炎癥及各器官的退行性病變?yōu)橹鳌?/p>

1.2 過勞加飲食失節(jié)法模擬人類由于過勞耗氣或飲食失節(jié)導(dǎo)致脾虛。謝仰洲等［6］選用Wistar雄性大鼠60只，體重在120～150g，分為實(shí)驗(yàn)組（40只）、對照組（20只）。隔天在跑步機(jī)上連續(xù)跑步30min，豬油與白菜隔日交叉喂養(yǎng)，自由進(jìn)水。造模后模型大鼠出現(xiàn)體重下降、體溫低、毛疏松色無光澤等癥狀，待個(gè)別大鼠死亡，判定為造模成功。

1.3 秋水仙堿法秋水仙堿為治療腫瘤的化療藥物，臨床多見藥后出現(xiàn)吸收不良綜合征，與中醫(yī)的脾氣虛證類似。所以劉士敬等［7］用秋水仙堿水溶液喂飼大鼠來構(gòu)建脾氣虛模型。結(jié)果發(fā)現(xiàn)模型組大鼠出現(xiàn)食量減少、體重減輕、大便溏泄等癥狀。且模型組血清胃泌素、D-木糖濃度低于對照組大鼠，而血清肌紅蛋白、肌酸磷酸激酶高于對照組，模型大鼠血小板與纖維蛋白原含量也均有不同程度的下降。

1.4 X射線照射法用X線照射大鼠腹部導(dǎo)致脾虛，模擬腫瘤病人放療化療后的脾虛。劉士敬等［8］選用日產(chǎn)HG7001型X線遠(yuǎn)距離照射機(jī)，在密閉盒中對每只大鼠進(jìn)行腹外照射，確定以大鼠的食欲不振、消瘦、大便溏泄等脾虛癥狀為主要診斷指標(biāo)。以公認(rèn)的代表脾氣虛的病理指標(biāo)為輔助，如血清胃泌素、D-木糖濃度；胃、小腸粘膜的組織形態(tài)觀察；血清堿性磷酸激酶及同工酶、肌紅蛋白、血小板指數(shù)、血清纖維蛋白原等。

1.5 利血平法利血平通過耗竭兒茶酚胺，使動(dòng)物出現(xiàn)脾虛患者常見的交感神經(jīng)功能低下、副交感神經(jīng)功能亢進(jìn)等癥狀，且通過利血平能使動(dòng)物長時(shí)間脾虛，有利于健脾中藥緩慢發(fā)揮作用［9-10］。周英［11］用12只80日齡，體重220～250g的SD大鼠作為脾虛組。給大鼠肌注利血平0.2mg/（kg·d），連續(xù)14天，發(fā)現(xiàn)脾虛組大鼠造模第6天出現(xiàn)飲食減少、大便溏、蜷縮或肛門污穢等脾虛證候，且造模結(jié)束時(shí)并見形體消瘦、身軟乏力等表現(xiàn)。

1.6 苦寒瀉下加勞倦法曲長江等［12］選用SPF級雄性KM小鼠110只。將其隨機(jī)編號并且稱重，然后將其分為6組，A組：大黃瀉下造模組；B組：番瀉葉瀉下造模組；C組：勞倦過度造模組；AC組：大黃瀉下加勞倦過度造模組；BC組：番瀉葉瀉下加勞倦過度造模組；O組：空白對照組。且選擇谷雨時(shí)節(jié)造模，持續(xù)時(shí)間為8天。A組在上午用大黃灌胃；B組在上午灌胃番瀉葉水浸液；C組在下午強(qiáng)迫大鼠游泳至耐力極限；AC組上午灌胃大黃，下午游泳；BC組上午灌胃番瀉葉水浸液，下午游泳；O組不施加任何的處理因素。旨在探討單因素和復(fù)合因素對于造模的影響。結(jié)果都出現(xiàn)了肛溫降低和體重下降的結(jié)果。

2 濕盛大小鼠模型的建立

濕［13］可分為外濕和內(nèi)濕。外濕可由起居環(huán)境潮濕，或冒雨涉水感受濕邪等導(dǎo)致。內(nèi)濕則由于過食肥甘，恣食生冷所致，因?yàn)槠樘帩裢?，喜燥惡濕，所以過食肥甘厚味易傷脾胃，致使脾失健運(yùn)不能為胃行其津液，或者素體肥胖，喜靜少動(dòng)，致使氣機(jī)不利，津液輸布障礙，聚結(jié)所致。

2.1 肥甘厚膩飲食法吳賽等［14］用飲食誘導(dǎo)痰濕壅盛證高血壓大鼠模型。用高脂飼料喂養(yǎng)后選出體重、血壓均超過對照組25%的大鼠歸為模型組大鼠。模型大鼠呈現(xiàn)體重增加、毛色黯淡、嗜睡等典型的濕盛證候，且用瘦素作為客觀指標(biāo)來評價(jià)痰濕壅盛證大鼠模型。

2.2 “飲食+環(huán)境+生物致病因子”法湯朝暉等［15］采用“飲食+環(huán)境+生物致病因子”復(fù)合因素造濕盛小鼠模型，也就是肥甘厚膩的食物、潮濕的環(huán)境和病毒細(xì)菌致病因子聯(lián)合造模。實(shí)驗(yàn)分為3組，正常組：正常飼料、自由飲水及自然環(huán)境飼養(yǎng)15天。病毒組：小鼠先在肥甘厚膩飲食、自由飲水和自然環(huán)境中飼養(yǎng)，至第10天上午予以腹腔注射MHV-A59 0.5mL，然后分別在病毒感染后第1天、第3天、第5天上午（9時(shí)～12時(shí)）放入氣候模擬艙［溫度（32±0.5）℃，濕度（60±5）%］；其余時(shí)間在自然環(huán)境、肥甘飼料及自由飲水中飼養(yǎng)。腸菌組：小鼠先給予肥甘飲食、自由飲水和在自然環(huán)境飼養(yǎng)，然后至第10天上午8時(shí)予以大腸桿菌灌胃1次，第12天上午8時(shí)重復(fù)感染一次。入艙暴露及平時(shí)喂養(yǎng)同病毒組。所得結(jié)論是“內(nèi)濕”的形成可能主要與肥甘飲食、濕熱外環(huán)境相關(guān)，而MHV-A59作為生物致病因子所致的濕熱證模型炎癥反應(yīng)更加劇烈。

3 脾虛濕盛證大小鼠模型的建立

《素問·至真要大論》載：“諸濕腫滿，皆屬于脾?！闭f明脾的運(yùn)化失職是濕濁內(nèi)生的關(guān)鍵。而濕為陰邪，易損傷陽氣，且脾喜燥惡濕，濕邪易困脾陽，阻滯氣機(jī)，導(dǎo)致脾的運(yùn)化功能失職。所以脾虛易致濕濁內(nèi)生，而濕邪反過來又易引起脾虛［4，13］。

因?yàn)闈袷⑴c脾虛的相互作用，所以脾虛濕盛大小鼠模型的建立，容易于脾虛模型、濕盛模型的單個(gè)建立。脾虛大小鼠模型的構(gòu)建可以用耗氣破氣加飲食失節(jié)法、過勞加飲食失節(jié)法、苦寒瀉下法等方法。濕盛模型的構(gòu)建可以用肥甘厚膩飲食法和“飲食+環(huán)境+生物致病因子”法。而脾虛濕盛模型可以先通過給予肥甘厚膩飼料、或潮濕環(huán)境導(dǎo)致濕盛實(shí)證，然后在大小鼠存在內(nèi)濕的情況下，再通過上述的導(dǎo)致脾虛的方法，以期造成脾虛濕盛模型。也可以通過上述導(dǎo)致脾虛的方法致虛，再給予一個(gè)不節(jié)飲食或潮濕環(huán)境，來造脾虛濕盛模型。

4 討論

陳小野等用苦寒瀉下藥來導(dǎo)致大鼠脾虛，有可能為瀉下太過，導(dǎo)致食物來不及吸收，生化乏源而出現(xiàn)脾虛類似癥狀，而不是脾本身的虛，以至于不能運(yùn)化水谷精微。

謝仰洲等則通過強(qiáng)制大鼠跑步，使其勞倦，勞則氣耗，形體勞倦則氣傷，就如張景岳所云：“脾胃之傷于外者，唯勞倦最能傷脾。”且用白菜與豬油交替喂飼，飲食失調(diào)容易導(dǎo)致脾虛。但是現(xiàn)今人類的勞倦多由腦力勞動(dòng)，熬夜、睡眠不足所導(dǎo)致［16］，而不是體力活動(dòng)所導(dǎo)致的“勞”。且飲食失調(diào)也多為過食冰冷寒涼食物，張景岳又云：“脾胃屬土，惟火能生，故其本性則常惡寒喜暖，使非真有邪火，則寒涼之物最宜慎用”。所以為了更加符合臨床，可以通過干擾睡眠和灌胃冰水來達(dá)到過勞加飲食失節(jié)而造脾虛大小鼠模型。

秋水仙堿法、X射線照射法、利血平法等造模方法也都可以使大小鼠出現(xiàn)脾虛癥狀。而肥甘厚味飲食加潮濕環(huán)境能夠?qū)е麓笮∈鬂袷?，但是脾虛和濕盛往往同時(shí)存在，脾能燥濕，且脾屬中焦，為水液運(yùn)行的通道，所以脾虛能使水無去處而停聚于內(nèi)。

5 結(jié)論

瀉下藥加勞倦法制脾虛大小鼠模型具有用藥劑量小，造模時(shí)間長和造模因素更接近于臨床脾氣虛證的病因和久病致虛的特點(diǎn)，且易于復(fù)制，得到了廣泛應(yīng)用。但是，峻瀉易導(dǎo)致生化乏源，難以說明是脾氣本身的虛，還是元?dú)獾奶摗?/p>

濕盛模型以“飲食+環(huán)境+生物致病因子”法來造濕盛大小鼠模型，無論從實(shí)驗(yàn)指標(biāo)、造模動(dòng)物的發(fā)熱、還是神倦等觀察癥狀體征，最為接近中醫(yī)濕熱證型。

所以脾虛濕盛大小鼠模型的構(gòu)建應(yīng)該合理安排致虛或致濕飼料的喂養(yǎng)，及有關(guān)藥物的注射，防止模型過多的意外死亡。臨床上脾虛濕盛證一般是慢性病，所以制作模型的過程應(yīng)該要更貼近實(shí)際情況。