顧叢叢

本文主要探究影響布魯氏菌病抗體檢測的因素。以布魯氏菌病抗體檢測方法為出發(fā)點，分析采血管、標本放置時間、試驗溫度、前帶現(xiàn)象均會對布魯氏菌抗體檢測造成一定影響，出現(xiàn)假陽性情況。并以此為基礎(chǔ)提出樣本準備、操作方法、評定結(jié)果的對策，以期為相關(guān)工作者提供參考。

一、布魯氏菌病抗體檢測方法

1、布魯氏菌病主要是通過布魯氏菌所引起的傳染病，具有人獸共患特點，世界動物衛(wèi)生組織將其歸納為B類動物疫病之中，我國將其列入到二級動物疫病。豬、牛、羊最易感染此病，犬與60多種家禽、家畜、野生動物易感性有所不同，主要是侵害生殖系統(tǒng)，易引發(fā)不孕、流產(chǎn)等。近幾年中，布魯氏菌病陽性率逐漸升高，已成為重點防范病種。

2、本次主要使用虎紅平板凝集試驗。由于培養(yǎng)布魯氏菌營養(yǎng)條件苛刻，時間漫長，因此診斷布魯氏菌病主要依據(jù)血清學(xué)診斷標準。原理是依據(jù)相應(yīng)抗體可在體外產(chǎn)生特異性結(jié)合，并展現(xiàn)出可見反應(yīng)，通過已知抗原進行未知抗體檢測。因為在酸性條件下抑制IgM活性，主要對IgG類凝集抗體進行檢查，具有良好特異性，與二巰基乙醇試驗、補體結(jié)合試驗等吻合率較高。虎紅平板凝集試驗具有價格便宜、靈敏度高、操作便捷、檢測速度快，更加適合普查群體布魯氏菌病，也是國際貿(mào)易中豬、牛、羊布魯氏菌病指定檢測試驗。

二、布魯氏菌病抗體檢測影響因素

1、采血管影響。在布魯氏菌抗體檢測中，首先將標本放置在采血管中，以此進行后續(xù)檢測。而不同采血管對于抗體檢測結(jié)果具有一定影響。經(jīng)研究表明，選擇鄉(xiāng)鎮(zhèn)牛羊各50頭檢測布魯氏菌病抗體，使用負壓采血管在羊頸靜脈與牛尾靜脈采血共2管，采血管一個是普通采血管，另一個則含有肝素鈉抗凝劑，以以每分鐘2500轉(zhuǎn)的速度離心10分鐘，取上清液檢測。結(jié)果表明，在虎紅平板凝集試驗中，普通采血管檢測結(jié)果均為陰性，而含抗凝劑的采血管試驗結(jié)果則為陽性，在不同抗凝條件下，同一血液樣品的實驗結(jié)果產(chǎn)生兩種不同結(jié)果。主要是由于普通采血管中沒有抗凝劑，血液樣品采集后通常放置30分鐘離心，產(chǎn)生的上清液則為血清而含有抗凝劑的采血管，血液樣品混合而后離心，上清液則是血漿，前者沒有纖維蛋白質(zhì)，后者則與之相反。使用血漿試驗，將會因為纖維蛋白質(zhì)與試管凝集抗原及布魯氏菌病虎紅平板凝集抗原相結(jié)合，出現(xiàn)假陽性情況。通過上述實驗可知，日常工作中應(yīng)當使用普通采血管進行標本采集，避免產(chǎn)生假陽性問題。

2、放置時間影響。試驗中采集血清后，需將放置一定時間才能進行后續(xù)實驗。不同放置時間對于檢測結(jié)果也存在相應(yīng)影響。經(jīng)研究表明，在試驗中使用普通采血管，將其分別放置10、30、60分鐘進行虎紅平板凝集試驗，結(jié)果表明血液標本在放置10至30分鐘后陽性率從8.7%向4.3%降低，而放置60分鐘后，血液標本陽性率逐漸穩(wěn)定。由此可知，隨著血清標本增加放置時間，將會降低假陽性率，主要是由于血清中存在少量纖維蛋白，導(dǎo)致血清凝結(jié)成塊，此時試驗纖維蛋白將會與抗原相結(jié)合，出現(xiàn)假陽性，而經(jīng)過長時間放置后，血清中纖維蛋白會逐漸收縮，可提高檢測結(jié)果準確率。因此，工作人員在檢測過程中，應(yīng)當將抗原與血清放置一段時間，避免影像檢測結(jié)果。

3、實驗溫度影響。試驗中放置血清時，應(yīng)當將其放在那種溫度環(huán)境下是主要研究問題，不同溫度對于試驗結(jié)果同樣具有一定影響。經(jīng)研究表明，在實驗中采集血清后，將其分別放置在5℃、15℃、30℃、35℃、至5℃溫度中進行試驗，結(jié)果表明，在虎紅平板凝結(jié)實驗中，隨著溫度不斷提高，假陽性率也隨之降低。試驗溫度在15℃以上時，檢測結(jié)果準確率趨近于100%。因此，試驗溫度可穩(wěn)定在20至30℃左右，保證所用試劑與標本室溫平衡，避免出現(xiàn)溫度差對檢測結(jié)果造成影響。

4、前帶現(xiàn)象影響。在檢測布魯氏菌陽性血清標本時，易產(chǎn)生試管凝結(jié)前帶現(xiàn)象，產(chǎn)生此種現(xiàn)象后進行虎紅平板凝結(jié)實驗，結(jié)果表明均為強陽性，而使用試管凝集試驗，血清稀釋度較低為陰性，而血清稀釋度較高時，檢測結(jié)果方為陽性。因此，在虎紅平板凝集試驗中，其檢測結(jié)果為強陽性，而采取試管凝集試驗表明結(jié)果為陰性，則表明實驗中可能產(chǎn)生前帶現(xiàn)象，此時共走人員應(yīng)當將血清稀釋度加大，超過1：1600時，才能將前帶現(xiàn)象所導(dǎo)致的假陽性誤差減少，保證檢測結(jié)果準確性。

三、布魯氏菌病抗體檢測影響因素對策

通過上述分析，在應(yīng)用虎紅平板凝結(jié)實驗進行布魯氏菌病抗體檢測中，應(yīng)當注意以下幾點：

1、標本準備。備好標準陰性與陽性血清、虎紅平板凝集抗原（由畜牧站提供），按說明使用;使用普通采血管采集標本，血清應(yīng)當無腐敗氣味、無溶血、無蛋白凝塊，樣品新鮮;干凈玻璃板或玻片，劃分若干方格（4cm2）;移液器或吸管，可滴加0.03mL液體;混合棒或牙簽，以便攪拌。

2、操作方法。在實驗之前，抗原與血清應(yīng)當在室溫內(nèi)放置約30至60分鐘，標記玻璃板被檢血清標號，添加相應(yīng)0.03mL血清后，繼續(xù)添加0.03mL虎紅平板凝集抗原，使用小棒攪拌抗原與血清，讓兩者充分融合，5分鐘后觀察結(jié)果，與準備的陽性及陰性血清做對照。

3、判定結(jié)果。在對照的陽性與陰性血清下，可判定被檢血清，若是4分鐘內(nèi)被檢血清呈現(xiàn)肉眼可變的凝集現(xiàn)象，則可判定其為陽性（+），若是并無凝結(jié)現(xiàn)象產(chǎn)生，或出現(xiàn)均勻粉紅色，則可判定血清是陰性（至）。

總之，在應(yīng)用虎紅平板凝結(jié)實驗檢測布魯氏菌病抗體時，其將會受到采血管、標本放置時間、溫度、前帶現(xiàn)象的影響，出現(xiàn)假陽性結(jié)果。因此，工作人員在抗體檢測中，應(yīng)當加強對抗原與標本的檢查，樣品應(yīng)當無明顯蛋白凝塊、腐敗其為、無溶血，血清樣品運送與保存中避免出現(xiàn)反復(fù)受熱凍結(jié)情況，確保標本與實驗要求相符，從而提高檢測準確率，以免誤殺牲畜，對農(nóng)牧民利益造成損害。

（作者單位：256400山東省淄博市桓臺縣畜牧獸醫(yī)事務(wù)服務(wù)中心）