唐蘇鐵，黃光墉，王金生

(1.深圳市寶安區(qū)福永人民醫(yī)院橋頭社區(qū)健康服務(wù)中心，廣東 深圳 518103；2.深圳市寶安區(qū)福永人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東 深圳 518103)

在宮頸上皮內(nèi)瘤變(CINⅠ)、宮頸癌發(fā)生與發(fā)展中，人乳頭瘤病毒(HPV)感染發(fā)揮重要作用[1]。且隨女性年齡增加，其體內(nèi)雌激素水平持續(xù)降低，會(huì)影響內(nèi)分泌、免疫功能，降低對(duì)HPV抵御和清除能力，這可能是HPV持續(xù)感染的關(guān)鍵[2-3]。而且，近年來(lái)，人們開(kāi)始越來(lái)越多地關(guān)注宮頸疾病發(fā)生、發(fā)展中免疫狀態(tài)的作用，其中T淋巴亞群能對(duì)機(jī)體免疫狀態(tài)進(jìn)行反映，被證實(shí)在HPV感染并宮頸病變中存在一定異常表達(dá)[4]。本研究為證實(shí)這一點(diǎn)，分析HPV感染宮頸病變發(fā)生與細(xì)胞免疫功能的相關(guān)性，選擇2016年5月～2018年5月本院200例HPV感染合并宮頸疾病患者的臨床資料，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料：隨機(jī)抽取2016年5月～2018年5月本院200例HPV感染合并宮頸疾病患者，作為研究組。同樣方法選取同期到本院體檢的200名健康人，作為對(duì)照組。研究組年齡35～75歲，平均(56.36±6.33)歲；宮頸炎64例，宮頸上皮內(nèi)瘤變CINⅠ48例，CINⅡ30例，CINⅢ38例，宮頸癌20例。對(duì)照組年齡33～78歲，平均(56.48±6.50)歲。兩組臨床資料保持同質(zhì)性。研究組根據(jù)組織病理學(xué)檢查分為C組(宮頸炎+CINⅠ，n=112)、D組(CINⅡ～Ⅲ，n=68)、E組(宮頸癌，n=20)，且三組臨床資料保持同質(zhì)性。納入標(biāo)準(zhǔn)：研究組符合：①確診為HPV感染；②存在宮頸疾??；③資料完整；對(duì)照組符合：①體檢各項(xiàng)檢查無(wú)異常；②資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并嚴(yán)重心、肝、腎等重要臟器疾??；②近期出現(xiàn)感染性疾病；③長(zhǎng)期采用皮質(zhì)類(lèi)固醇激素或免疫抑制劑治療；④檢測(cè)前2周內(nèi)使用過(guò)局部抗病毒藥物或系統(tǒng)抗病毒藥物；⑤妊娠、哺乳期婦女。

1.2方法

1.2.1HPV分型檢測(cè)：月經(jīng)干凈后3～5 d開(kāi)始取樣，取樣前3 d避免性生活。取樣時(shí)，以專(zhuān)用宮腔采樣刷，收取宮頸口、宮頸上皮脫落細(xì)胞，置入含專(zhuān)用細(xì)胞保存液的取樣瓶?jī)?nèi)，及時(shí)送檢。采用羅氏cobas 4800全自動(dòng)分析儀及21種HPV分型檢測(cè)試劑盒進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)原理為PCR反向點(diǎn)雜交技術(shù)。其中，高危型含16、18、31、33等15種，低危型含6、11、42、43等6種。研究組根據(jù)監(jiān)測(cè)結(jié)果分為A組(高危型NPV感染并宮頸病變，n=94)、B組(低危型NPV感染并宮頸病變，n=106)。

1.2.2外周血T細(xì)胞亞群檢測(cè)：抽取2 ml清晨空腹靜脈血，無(wú)需凍存，直接送檢。將血液標(biāo)本直接與抗體混勻，室溫下避光孵育，持續(xù)20 min；加入紅細(xì)胞裂解液，室溫下避光孵育，持續(xù)10 min。2 000 r/min離心，持續(xù)10 min，棄上清液。以PBS洗液清洗細(xì)胞，重懸，上機(jī)檢測(cè)。外周血T細(xì)胞亞群以美國(guó)BD公司的FACSCanto II型流式細(xì)胞儀檢測(cè)，試劑盒購(gòu)自德國(guó)Partec 公司。檢測(cè)指標(biāo)包括CD3+、CD4+、CD8+，并計(jì)算CD4+/ CD8+。

1.3觀察指標(biāo)：觀察研究組與對(duì)照組、研究組中A組、B組、C組、D組與E組檢測(cè)結(jié)果。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：所得數(shù)據(jù)以SPSS20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析。CD3+、CD4+細(xì)胞計(jì)數(shù)等計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，以t檢驗(yàn)。性別等計(jì)數(shù)資料樣本容量n>40,理論頻數(shù)T>5,用直接χ2檢驗(yàn)。P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

研究組CD3+、CD4+、CD4+/ CD8+均低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，CD8+高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。研究組中，A組CD3+、CD4+、CD4+/ CD8+均低于B組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，CD8+高于B組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。E組CD3+、CD4+、CD4+/ CD8+均低于C組、D組，且D組低于C組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；E組CD8+細(xì)胞計(jì)數(shù)高于C組、D組，且D組高于C組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1各組外周血T細(xì)胞亞群檢測(cè)結(jié)果對(duì)比

組別例數(shù)CD3+(%)CD4+(%)CD8+(%)CD4+/ CD8+研究組20062.63±7.1835.08±3.5525.84±2.111.58±0.15A組9459.02±7.25②32.21±4.05②28.68±2.27②1.35±0.16②B組10666.24±7.1237.95±3.9023.00±2.571.80±0.14C組11268.10±8.00③37.94±3.70③23.01±2.01③1.82±0.15③D組6864.02±7.96③33.02±5.50③26.02±2.00③④1.33±0.25③E組2058.96±6.9929.30±3.9629.00±2.061.29±0.11對(duì)照組20069.90±5.42①40.24±3.70①21.22±2.40①1.89±0.18①

注：與研究組比較，①P<0.05；與B組比較，②P<0.05;與E組比較，③P<0.05；與C組比較，④P<0.05

3 討論

宮頸癌是一種常見(jiàn)婦科惡性腫瘤，高危因素較多，包括免疫力下降、多孕、多產(chǎn)、不良性行為、HPV感染等[5-6]。HPV屬于無(wú)包膜小型DNA病毒。多數(shù)宮頸癌患者存在高危型HPV感染，但并非所有HPV感染患者均可進(jìn)展為宮頸癌。而且，宮頸癌發(fā)生與發(fā)展過(guò)程中，除HPV感染外，機(jī)體免疫功能變化也具有臨床意義[7]。

T淋巴細(xì)胞是免疫應(yīng)答一個(gè)重要部分，可經(jīng)由體液免疫、細(xì)胞免疫等途徑，有效殺滅病原體。CD4+和CD8+是T淋巴細(xì)胞常見(jiàn)亞群。CD4+提升極易誘發(fā)超敏反應(yīng)，引發(fā)自身免疫性疾?。欢^(guò)度下降會(huì)影響免疫功能，導(dǎo)致感染等疾病發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)提升。CD8+具有直接殺傷性，表達(dá)提升可引發(fā)嚴(yán)重免疫紊亂，降低則會(huì)導(dǎo)致出現(xiàn)過(guò)度免疫反應(yīng)。故兩者比例處于正常水平時(shí)，才能維持免疫系統(tǒng)平衡，發(fā)揮抗腫瘤作用。而一旦機(jī)體出現(xiàn)宮頸病變，其外周血T淋巴細(xì)胞亞群數(shù)量會(huì)出現(xiàn)變化，且隨著病情加重，可能引發(fā)細(xì)胞免疫系統(tǒng)失衡現(xiàn)象，導(dǎo)致免疫監(jiān)視功能削弱或喪失。腫瘤篩查中檢測(cè)T淋巴細(xì)胞亞群，可為輔助檢查、預(yù)后評(píng)估等提供依據(jù)[8]。

本次研究重點(diǎn)調(diào)查了HPV感染宮頸疾病患者不同HPV分型、病理類(lèi)型下T淋巴細(xì)胞亞群表達(dá)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，研究組CD3+、CD4+、CD4+/ CD8+較對(duì)照組低，且CD8+較對(duì)照組高?？梢?jiàn)與健康人相比，HPV感染并宮頸病變患者存在T淋巴細(xì)胞亞群異常表達(dá)。而且，高危型HPV感染患者CD3+、CD4+、CD4+/ CD8+較低危型低，且CD8+較低危型高。唐玲等同樣證實(shí)，高危型HPV感染并宮頸病變患CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均低于低危型，CD8+高于低危型[9]，與此相符?？紤]是因高危HPV感染可影響機(jī)體免疫系統(tǒng)，逃避免疫監(jiān)測(cè)，導(dǎo)致免疫功能處于相對(duì)較差狀態(tài)。而且，隨HPV感染并宮頸疾病嚴(yán)重程度的增加，其CD3+、CD4+、CD4+/ CD8+逐漸降低，CD8+逐漸增高，與楊晶等結(jié)果[10]相符。提示機(jī)體免疫功能下降、免疫功能紊亂，在宮頸病變發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要作用。

綜上所述，HPV感染在宮頸病變發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要作用，且影響機(jī)制可能是細(xì)胞免疫功能下降，逃避免疫監(jiān)測(cè)，刺激生殖道，促進(jìn)宮頸疾病發(fā)生、發(fā)展，需引起高度關(guān)注。