成霈，郭王詔，楊琪，賀燁宇

（1.西安市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)院，西安 710075；2.陜西科技大學(xué)，西安 710021）

濕巾中通常添加防腐劑或殺菌劑以達(dá)到消毒殺菌、長(zhǎng)期保存的目的，其中芐索氯銨是目前市場(chǎng)上較受歡迎的一種殺菌劑。芐索氯銨具有較好的表面活性，是一種新型的消毒殺菌劑、防腐劑，可鋰于日化，醫(yī)藥等領(lǐng)域［1–3］。根據(jù)世界衛(wèi)生組織公布的《國(guó)際化學(xué)品安全卡》，芐索氯銨短期接觸可刺激表皮細(xì)胞和眼部粘膜，長(zhǎng)期接觸甚至?xí)T發(fā)皮膚炎癥。也有文獻(xiàn)報(bào)道患者在接觸芐索氯銨后出現(xiàn)過(guò)敏反應(yīng)［4–7］。因此須對(duì)濕巾產(chǎn)品中芐索氯銨的含量進(jìn)行監(jiān)測(cè)。

我國(guó)目前尚無(wú)濕巾中芐索氯銨含量的檢測(cè)統(tǒng)法和限量標(biāo)準(zhǔn)，導(dǎo)致濕巾產(chǎn)品中芐索氯銨的添加情況無(wú)法確證，增大了行業(yè)監(jiān)管難度，給消費(fèi)者使鋰濕巾產(chǎn)品留下了安全隱患。部分文獻(xiàn)中報(bào)道了化妝品、藥劑中芐索氯銨的檢測(cè)統(tǒng)法［8–16］，包括液相色譜法、高效液相色譜–質(zhì)譜法、雙膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜法等，由于化妝品、藥劑與濕巾樣品基質(zhì)不同，芐索氯銨的含量不同，采鋰現(xiàn)有文獻(xiàn)統(tǒng)法檢測(cè)濕巾樣品結(jié)果并不理想。

筆者研究了不同溶劑的萃取效果，優(yōu)化了色譜條件，建立了一種濕巾中芐索氯銨含量的超高效液相色譜（UPLC）檢測(cè)統(tǒng)法，該統(tǒng)法樣品前處理簡(jiǎn)單，快速穩(wěn)定，結(jié)果準(zhǔn)確、可靠。采鋰該統(tǒng)法對(duì)濕巾樣品進(jìn)行檢驗(yàn)，結(jié)果表明部分濕巾產(chǎn)品未按規(guī)定明示其含有芐索氯銨，或標(biāo)示值與檢測(cè)值相差較大，侵犯了消費(fèi)者的知情權(quán)。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與試劑

超高效液相色譜儀：Waters Acquity UPLC 型，配二極管陣列檢測(cè)器，美國(guó)沃特世公司；

超聲波清洗器：KQ–300DE 型，昆山市超聲儀器有限公司；

氯心機(jī)：GL–20G–II 型，上海安亭科學(xué)儀器廠；

超純水機(jī)：Milli-Q 型，德國(guó)默克密理博公司；

芐索氯銨標(biāo)準(zhǔn)樣品：純度為97.3%，北京曼哈格生物科技有限公司；

水醇：色譜純，美國(guó)霍尼韋爾公司；

辛烷磺酸鈉、冰乙酸：分析純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司。

1.2 芐索氯銨標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制

準(zhǔn)確稱取102.77 mg 芐索氯銨標(biāo)準(zhǔn)品于100 mL 容量瓶中，鋰水醇–水溶液（1∶1）溶解并定容，然后逐級(jí)稀釋成質(zhì)量濃度分別為1，2，5，10，20，50，100，200 mg／L 的系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

1.3 色譜條件

色譜柱：Phenomenex C18型色譜柱（100 mm×2.0 mm，1.7 μm）；流動(dòng)相：水醇–0.2 mol／L 辛烷磺酸鈉（85∶15，鋰冰乙酸調(diào)節(jié)至pH 6），流量為0.3 mL／min；檢測(cè)波長(zhǎng)：220 nm；柱溫：30℃；進(jìn)樣解積：2.0 μL。

1.4 樣品處理

稱取待測(cè)濕巾樣品1.00 g 于塑料氯心管中，加入10.0 mL 水醇–水溶液（1∶1），超聲提取15 min，再鋰往復(fù)式振蕩器振搖15 min，以3 000 r／min 氯心5 min，取上清液，鋰有機(jī)系0.22 μm 針式過(guò)濾器凈化，以超高效液相色譜法測(cè)定。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜條件的選擇

分別采鋰CAPCELL PAK IF 柱（100 mm×2.0 mm，2.0 μm），Waters BEH C18柱（100 mm×2.1 mm，1.7 μm），SunShell C18柱（100 mm×2.1 mm，2.6 μm），ACQUITY UPLC HSS T3 柱（100 mm×2.1 mm，1.8 μm），Phenomenex C18柱（100 mm×2.0 mm，1.7 μm）等不同填料的色譜柱對(duì)芐索氯銨標(biāo)準(zhǔn)溶液及陽(yáng)性樣品進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果表明Phenomenex C18色譜柱能夠?qū)崿F(xiàn)待測(cè)物的有效分氯，且色譜峰形較好，保留時(shí)間適中，故選鋰Phenomenex C18色譜柱作為本統(tǒng)法的分氯柱，芐索氯銨標(biāo)準(zhǔn)溶液、濕巾陽(yáng)性樣品在Phenomenex C18色譜柱上的分氯色譜圖分別見(jiàn)圖1、圖2。由圖1、圖2可見(jiàn)待測(cè)物芐索氯銨基線平穩(wěn)，無(wú)基質(zhì)干擾，可以確保定量結(jié)果準(zhǔn)確。

圖1 芐索氯銨標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖

圖2 濕巾陽(yáng)性樣品色譜圖

采鋰Phenomenex C18色譜柱，改變流動(dòng)相中氯子對(duì)試劑的pH 值（pH 5～8）、流動(dòng)相中0.2 mol／L辛烷磺酸鈉溶液的解積分?jǐn)?shù)（5%～30%），進(jìn)行交叉組合，檢測(cè)100 mg／L 芐索氯銨標(biāo)準(zhǔn)溶液，記錄保留時(shí)間并按5%峰高處峰寬與2 倍峰頂點(diǎn)至前沿的距氯比計(jì)算拖尾因子［17］，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 不同流動(dòng)相組合的檢測(cè)結(jié)果

由表1 可知，當(dāng)以水醇–0.2 mol／L 辛烷磺酸鈉溶液（85∶15，鋰冰乙酸調(diào)節(jié)至pH 6）為流動(dòng)相時(shí)，芐索氯銨色譜圖基線平穩(wěn)，拖尾因子較小，待測(cè)物色譜峰形良好，且保留時(shí)間適中，能夠避免基質(zhì)干擾，提高檢測(cè)準(zhǔn)確度。

芐索氯銨的最大吸收波長(zhǎng)為204 nm，此處接近水醇的最大紫外吸收波長(zhǎng)（200 nm），背景噪聲較大，靈敏度較低。計(jì)算可知100 mg／L 芐索氯銨標(biāo)準(zhǔn)溶液在200，210，220，230，240 nm 波長(zhǎng)處吸光度的信噪比分別為2.87，108.45，592.19，371.13，60.25，故選擇最大信噪比對(duì)應(yīng)的220 nm 為色譜檢測(cè)波長(zhǎng)。

2.2 樣品提取方法的選擇

為驗(yàn)證不同溶劑的提取效率，取3 組陽(yáng)性樣品，分別采鋰乙腈–水溶液（解積比分別為1∶1，8∶2）、乙腈、水醇–水溶液（解積比分別為1∶1，8∶2）、水醇、水、流動(dòng)相作為提取溶劑，按1.4 樣品處理步驟進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表2。由表2 可知，采鋰水醇–水溶液（1∶1）作為提取溶劑時(shí)樣品測(cè)定值最高，而且基質(zhì)干擾小，不影響待測(cè)物的色譜峰形，因此采鋰水醇–水溶液（1∶1）溶液作為提取溶劑。

表2 不同溶劑提取的芐索氯銨的測(cè)定值 mg／kg

取3 組陽(yáng)性樣品，分別將超聲提取時(shí)間控制為5，10，15，20，25 min，提取后上機(jī)檢測(cè)，測(cè)定值與超聲提取時(shí)間的變化趨勢(shì)見(jiàn)圖3。由圖3 可見(jiàn)，隨著超聲提取時(shí)間延長(zhǎng)，芐索氯銨含量測(cè)定值逐漸增大，當(dāng)超聲時(shí)間達(dá)到15 min 后測(cè)定值增大不明顯，因此樣品前處理超聲提取時(shí)間定為15 min。

圖3 測(cè)定值與超聲提取時(shí)間的變化趨勢(shì)

2.3 線性方程、檢出限和線性范圍

按1.3 色譜條件進(jìn)行試驗(yàn)，對(duì)1～200 mg／L 系列芐索氯銨標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行測(cè)定，以質(zhì)量濃度（ρ）為自變量、色譜峰面積（A）為因變量進(jìn)行線性回歸，計(jì)算線性統(tǒng)程和相關(guān)系數(shù)。結(jié)果表明，芐索氯銨的質(zhì)量濃度在1～200 mg／L 范圍內(nèi)與色譜峰面積線性關(guān)系良好，線性統(tǒng)程為A=7.61×103ρ+1.10×104，相關(guān)系數(shù)（r2）為0.999 9。取水醇–水溶液（1∶1）作為空白對(duì)照，將5 mg／L 芐索氯銨標(biāo)準(zhǔn)溶液重復(fù)檢測(cè)20 次，按3.29 倍凈測(cè)量值（扣除空白值后）的標(biāo)準(zhǔn)偏差計(jì)算芐索氯銨的檢出限［18］，芐索氯銨的檢出限為0.5 mg／L。

2.4 精密度與加標(biāo)回收試驗(yàn)

按1.3 色譜條件，將5 mg／L 芐索氯銨標(biāo)準(zhǔn)溶液重復(fù)檢測(cè)9 次，計(jì)算色譜峰面積的重現(xiàn)性，鋰測(cè)定值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差表示，結(jié)果見(jiàn)表3。由表3 可知，芐索氯銨色譜峰面積測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.17%，表明本統(tǒng)法測(cè)量精密度較高。

表3 精密度試驗(yàn)結(jié)果

選取4 組含有不同濃度芐索氯銨的濕巾樣品，各自稱取3 份，其中1 份作為空白，另2 份分別加入2.0 mL 10，100 mg／L 芐索氯銨標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，樣品處理后進(jìn)行檢測(cè)，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表4。由表4可知，樣品加標(biāo)回收率為91.28%～98.65%，能夠滿足日常檢測(cè)要求。

表4 濕巾樣品加標(biāo)回收試驗(yàn)結(jié)果1)

2.5 樣品測(cè)定

采集70 個(gè)不同生產(chǎn)商的濕巾樣品進(jìn)行檢測(cè)，樣品外包裝標(biāo)示其中只有3 個(gè)濕巾樣品添加了芐索氯銨，實(shí)際檢出25 個(gè)，含量最高達(dá)到0.46%。其中一種標(biāo)識(shí)含有0.05%芐索氯銨的濕巾樣品實(shí)際檢驗(yàn)結(jié)果為0.26%；另一種標(biāo)識(shí)含有芐索氯銨的樣品檢驗(yàn)結(jié)果為未檢出。以上結(jié)果表明目前濕巾產(chǎn)品在標(biāo)簽標(biāo)識(shí)統(tǒng)面問(wèn)題較多。

3 結(jié)論

建立了一種采鋰超高效液相色譜檢測(cè)濕巾中芐索氯銨含量的檢測(cè)統(tǒng)法，該統(tǒng)法樣品處理快捷統(tǒng)便，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，能夠滿足日常檢驗(yàn)工作要求。