劉向陽

(陜西省延安市洛川縣果樹研究所，陜西洛川 727400)

洛川縣是中國蘋果優(yōu)生區(qū)的核心地帶[1]，蘋果是洛川縣的主導(dǎo)產(chǎn)業(yè)。近年來，洛川蘋果樹腐爛病(ValsamaliMiyabeet Yamada)的發(fā)生危害逐年加重[2]，防治主要以刮治、噴灑石硫合劑等殺菌劑為主，但效果并不明顯[3]。筆者測定了洛川縣10個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)的蘋果樹腐爛病分離菌株對常用的3種殺菌劑戊唑醇、嘧霉胺、苯醚甲環(huán)唑的抗藥性和敏感性，為防治腐爛病提供參考。

1 試驗(yàn)材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試菌。由洛川縣10個(gè)蘋果主產(chǎn)鄉(xiāng)鎮(zhèn)的蘋果樹發(fā)病枝條上分離獲得10個(gè)菌株(表1)。

表1 洛川縣10個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)的蘋果樹腐爛病菌分離菌株

供試殺菌劑3種，430g/L戊唑醇懸浮劑(江蘇龍燈化學(xué)有限公司)；400g/L嘧霉胺懸浮劑(永農(nóng)生物科技有限公司)；40%苯醚甲環(huán)唑懸浮劑(利民化工股份有限公司)。

1.2 試驗(yàn)方法

PDA培養(yǎng)基制備。土豆400g，加蒸餾水2L，沸水煮30分鐘，過濾去渣，加入蒸餾水補(bǔ)至體積2L，加瓊脂40g，葡萄糖40g，煮至瓊脂融化，倒入錐形瓶定容至200ml，以121℃加熱30分鐘滅菌備用。

含藥培養(yǎng)基制備。將上述錐形瓶內(nèi)PDA培養(yǎng)基置于微波爐內(nèi)融化后放在無菌操作臺上，將3種殺菌劑以1000μg/mL的藥劑為母液進(jìn)行8個(gè)濃度梯度稀釋(10、5、2.5、1.25、0.625、0.3125、0.15625、0.078125μg/mL)后，加入到50℃左右的培養(yǎng)基中充分混勻，迅速倒入培養(yǎng)皿中制成含藥的系列培養(yǎng)基平板[4]。

檢測10個(gè)分離菌株對3種藥劑的抗藥性。采用最低濃度抑制法 (MIC)[5]，參照嚴(yán)紅等[6]方法適當(dāng)修改。將10個(gè)分離菌株分別接種到含有430g/L戊唑醇懸浮劑、400g/L嘧霉胺懸浮劑、40%苯醚甲環(huán)唑懸浮劑的PDA平板上，各藥劑濃度均為10μg/mL。能在其上生長的視為抗性菌，不能生長的視為敏感菌。

測定10個(gè)分離菌株對3種藥劑的敏感性。采用菌絲生長速率法[7]，將活化3天后的10個(gè)菌株用5mm打孔器分別接種到8個(gè)濃度梯度的含藥培養(yǎng)基平板。3天后用十字交叉法測量菌落直徑[8]。以不加農(nóng)藥的PDA平板做對照，處理和對照均重復(fù)3次。計(jì)算抑制率和毒力回歸方程。數(shù)據(jù)采用Excel和DPS軟件計(jì)算3種殺菌劑對10個(gè)分離菌株的EC50、毒力回歸方程，相關(guān)系數(shù)及其置信區(qū)間。

抑制率(%)=(對照菌落直徑均值-處理菌落直徑均值)/(對照菌落直徑均值-接種菌餅直徑)×100

2 結(jié)果與分析

2.1 10個(gè)分離菌株對3種殺菌劑的抗藥性

如表2，10個(gè)分離菌株對400g/L嘧霉胺均產(chǎn)生抗藥性，均有菌落生長。10個(gè)分離菌株中，只有10號菌株對430g/L戊唑醇產(chǎn)生抗藥性，有菌落生長，其余菌株未產(chǎn)生抗藥性，無菌落生長。10個(gè)菌株對40%苯醚甲環(huán)唑均未產(chǎn)生抗藥性，均無菌落生長。

表2 蘋果樹腐爛病10個(gè)分離株菌對3種殺菌劑的抗藥性

注：+表示菌有抗藥性，有菌落生長；-表示菌無抗藥性，無菌落生長。

2.2 10個(gè)分離菌株對3種藥劑的敏感性

如表3，3種藥劑對10個(gè)分離菌株的EC50值：430g/L戊唑醇0.1385～0.5239μg/mL，大小值相差3.78倍(均值0.25μg/ml)；400g/L嘧霉胺0.3790～2.1340μg/mL，大小值相差5.63倍(均值1.13μg/ml)；40%苯醚甲環(huán)唑0.1229～0.3313μg/mL，大小相差2.70倍(均值0.20μg/ml)。表明10個(gè)分離菌株對40%苯醚甲環(huán)唑的敏感性差異最小，穩(wěn)定性最好；對400g/L嘧霉胺敏感性差異最大，穩(wěn)定性最差；對430g/L戊唑醇的敏感性和穩(wěn)定性居中。

在表3的毒力回歸方程中(方程是根據(jù)藥劑不同濃度下菌落大小與對照比較，算出抑制率與含藥濃度的關(guān)系，y代表抑制率，x代表藥劑濃度)，3種殺菌劑在不同濃度下相關(guān)系數(shù)在0.8436～0.9992之間，其相關(guān)性為強(qiáng)相關(guān)性。

3 小結(jié)與討論

由洛川10個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)的蘋果樹腐爛病分離菌株中，10個(gè)菌株對40%苯醚甲環(huán)唑懸浮劑均未產(chǎn)生抗藥性。只有10號菌株對430g/L戊唑醇懸浮劑產(chǎn)生抗藥性，其余9個(gè)菌株未產(chǎn)生抗藥性。10個(gè)菌株對400g/L嘧霉胺懸浮劑均產(chǎn)生抗藥性。10個(gè)分離菌株對40%苯醚甲環(huán)唑的敏感性差異最小，穩(wěn)定性最優(yōu)。對400g/L嘧霉胺的敏感性差異最大，穩(wěn)定性最差。

3種殺菌劑對10個(gè)分離菌株的EC50值，400g/L嘧霉胺0.3790～2.1340μg/ml>430g/L戊唑醇0.1385～0.5239μg/ml>40%苯醚甲環(huán)唑0.1229～0.3313μg/ml。嘧霉胺的EC50值相對最大，說明其抑菌效果最差，戊唑醇的EC50值較大，抑菌效果較好；苯醚甲環(huán)唑的EC50值最小，抑菌效果最好。因此，建議生產(chǎn)上防治蘋果樹腐爛病時(shí)優(yōu)先選用苯醚甲環(huán)唑。

本試驗(yàn)不足之處在于不能完全保證錐形瓶中只有200ml培養(yǎng)基，經(jīng)過高壓滅菌冷卻后會出現(xiàn)一定偏差導(dǎo)致所配濃度不精準(zhǔn)。周海波等人[9]研究了山西省不同地理來源的菌株敏感性無明顯差異，本研究與其結(jié)果一致。索朗拉姆等人[10]測定蘋果腐爛病對苯醚甲環(huán)唑敏感性得出的EC50值，本研究與其不一致，原因可能是所用藥劑的有效成分含量不同。