謝曉丹

（莆田市食品藥品檢驗檢測中心 福建莆田 351100）

1 前言

蒙脫石散是臨床常用的消化道黏膜保護劑，其主要成分為蒙脫石，輔料為香蘭素、葡萄糖、糖精鈉等，在食道、胃、十二指腸等病癥引起的疼痛癥狀的輔助治療中廣泛應用，其對消化道內病毒、病菌等有良好的抑制效用，同時還有助于黏膜修復[1]。 其中，香蘭素是重要的食品藥品添加劑，但需嚴格控制其含量，食用過量會導致惡心、呼吸困難、嘔吐、頭痛等。 為保證藥品質量，保障患者用藥安全，通過有效檢測方法準確測定蒙脫石散中香蘭素含量具有重要意義[2]。 近年來，隨著食品藥品檢測技術創(chuàng)新和發(fā)展，高效液相色譜法（HPLC）作為新型檢測技術在中西藥有效成分含量測定應用廣泛，有著操作便捷、靈敏度高、檢測快、準確度高、重現性佳等優(yōu)勢。本文對HPLC 測定蒙脫石散中的有效性成分香蘭素進行試驗研究，以期為該藥的藥效和質量評定提供可靠依據。

2 材料及儀器

2.1 材料

香蘭素對照品（中國食品藥品檢定研究院，生產批號：20180519）；蒙脫石散（思密達，博福-益普生制藥有限公司，國藥準字H20000690）；乙腈（色譜純，上海吉至生化科技有限公司，生產批號：CX0111180）；磷酸二氫鉀（分析純，蘇州恒程化工科技有效公司）；氫氧化鉀（分析純，上?；瘜W試劑有限公司）；超純水。

2.2 儀器

高效液相色譜儀：Agilent-1200 型，美國安捷倫科技公司，包括G1311A 四元梯度泵、G1313A 自動進樣器、G1316A 柱溫箱、G1315B 二級管陣列檢測器及G1322A 真空脫氣機；ChemStationRevA10.02 色譜工作站；電子天平（感量0.1 mg）：MS205DU 型，北京賽多利斯公司。

3 方法

3.1 溶液制備

對照品溶液制備：精確量取香蘭素對照品20.0mg，通過流動相超聲溶解并定容至50 mL 容量瓶內，充分混合均勻并稀釋，制成20 μg/mL 對照品溶液，備用。

供試驗品溶液制備：精確量取市場出售的蒙脫石散0.94 g，用流動相溶解，定容至50 mL 容量瓶中，加30 mL 水，充分混合均勻后，先進行超聲脫氣，然后通過0.45 μm 針頭濾膜進行過濾，備用。

3.2 色譜條件

色譜柱為AgillentSB-C18 （4.6 mm×1 500 mm，3.5 μm）；流動相為0.05 mol/L 磷酸鹽緩沖液（量取磷酸二氫鉀13.6 g 加水溶解并稀釋至2 000 mL，再用8 mol/L 氫氧化鉀溶液將pH 調至5.0±0.1； 乙腈（97.5∶2.5，V/V）；梯度洗脫，柱溫維持在30℃；流速設置為1.0 mL/min；檢測波長為279 nm；進樣量為10 μL。

3.3 流動相及檢測波長選擇

將一定濃度對照品溶液于波長200～400 nm 進行紫外光譜掃描，結果表明在279 nm 處有最大吸收，但是考慮在其他波長檢測中蒙脫石散內的輔料會影響到半峰寬度，所以本試驗確定檢測波長為279 nm。

選用不同體積比磷酸二氫鉀溶液與乙氰為流動相，發(fā)現0.05 mol/L 磷酸二氫鉀溶液與乙氰體積比為97.5∶2.5 時，出峰時間短，且色譜峰半峰寬較小。

3.4 方法考察

線性關系分析：吸取對照品溶液1、2、3、4、5、6 mL通過流動相定容至50 mL 容量瓶中，配制成20、40、60、80、100、120 μg/L 濃度的標準品溶液，充分搖勻。然后分別取以上標準品溶液按10 μL 進樣，于3.2 色譜條件下測定并記錄溶液色譜峰面積，橫坐標為濃度（X）、峰面積（Y）為縱坐標，繪制標準曲線圖，再進行線性回歸分析[3]。

重復性試驗：精確量取同批號蒙脫石散6 份，均為0.94 mg，按照供試驗品溶液步驟操作，于3.2 色譜條件下對溶液的香蘭素含量進行HPLC 測定。

穩(wěn)定性試驗：精確量取香蘭素對照品溶液20 μL，分別在1、2、4、6、10、12、24 h 于3.2 色譜條件下進樣，記錄保留時間與峰面積，并計算相對標準偏差（RSD）。

精密度試驗：精確量取香蘭素對照品溶液，配制成20、40、60、100 μg/L 標準溶液，按3.2 色譜條件測定，每一種標準溶液重復進樣測定6 次，計算RSD。

回收率試驗：精密量取香蘭素對照品溶液適量，依照處方量加空白敷料和藥物，混合均勻，進行測定計算回收率[4]。

樣品有效成分量測定：精確量取蒙脫石散樣品3 份，0.94 mg/份，按照供試驗品溶液制備操作，測定峰面積，然后代入回歸方程計算有效成分含量。

4 結果

4.1 色譜表現

按相應色譜條件測定， 得到對照品與供試驗品高效液相色譜圖，顯示有效成分分離度良好，詳見圖1和圖2。

圖1 供試驗品色譜圖

圖2 對照品色譜圖

4.2 線性關系

通過測定，在5.40～32.19 μg/mL 內香蘭素的濃度和峰面積有良好線性關系，相關系數r＞0.972，回歸方程為Y=46342X＋26443（n=6）。

4.3 重復性

對6 份樣品溶液進行測定，測得峰面積RSD 為1.35%，表明該檢測方法有著良好重復性，詳見表1。

表1 HPLC 測定蒙脫石散內香蘭素含量重復性

4.4 精密度

于標準曲線項下，平行測定對照品溶液6 次，測得香蘭素標準溶液的峰面積RSD 為1.12%，表明該測定方法有著良好精密度。

4.5 回收率

結果顯示，蒙脫石散供試驗品溶液中的香蘭素提取回收率為99.56%～100.44%，詳見表2。

表2 HPLC 測定蒙脫石散中的香蘭素回收率

4.6 樣品有效成分含量

通過測定并代入回歸方程計算有效成分平均含量為1.10 mg/g，符合有關規(guī)定，詳見表3。

表3 蒙脫石散中的香蘭素含量

5 討論

蒙脫石散是一種常見的腹瀉治療藥物，適用于成人和兒童急慢性腹瀉，常用于胃潰瘍、反流性食管炎、急性胃腸炎、小兒病毒性腸炎、慢性功能性腹瀉等治療中[5，6]。香蘭素是該藥物的主要輔助添加成分，應為口服藥物，且常用于小兒，因而需嚴格控制用量。因香蘭素分子含有活潑性醛基，易和醇發(fā)生加成反應，出現不易識別的濃度峰，影響含量測定，所以在HPLC 測定中通常需添加一定量的乙腈，以確保檢測色譜柱的穩(wěn)定性，保證檢測結果精確性。

本研究通過HPLC 對西藥蒙脫石散中的香蘭素含量進行測定，結果顯示香蘭素含量為1.10 mg/g，精密度高，且有良好的重復性、穩(wěn)定性，符合藥物標準成分測定要求。在應用HPLC 檢測時，需要設置好色譜條件和流動相，后者需要結合試驗條件將pH控制在標準范圍，以保證在檢測中的分離作用，以便區(qū)分香蘭素含量檢測峰值變化[7]。 另外，進行藥物有效成分檢測時，要在空白藥品中加入標準溶液，用HPLC 色譜測定，不同濃度樣品中藥物的色譜變化也存在差異，且蒙脫石散中的香蘭素的色譜圖含量峰值面積也均不相同，在分析時需要結合檢查記錄，并通過不同濃度峰面積變化比較，實現蒙脫石散提取物中有效成分含量的回收分析。 在香蘭素含量試驗測定中，為保證檢測結果的準確性，基于HPLC 檢測的原理，還有柱切法、反相色譜法等檢測方法，可以實現藥物有效成分含量的測定。 但由于儀器設備的要求和操作復雜度較高，在實際檢查中應用較少。

綜上所述，使用HPLC 對臨床廣泛應用的腹瀉制劑蒙脫石散中的香蘭素進行測定有著良好高精密度、重復性及穩(wěn)定性，符合臨床藥物檢測要求，可作為首選檢測方法，保證藥物的藥效和質量。