陳朋娟 呂少蓓 郝瑩瑩

（萊陽(yáng)市中醫(yī)醫(yī)院檢驗(yàn)科 山東煙臺(tái) 265200）

1 前言

肺結(jié)核是臨床常見的傳染性疾病，由結(jié)核分枝桿菌感染所致，早期僅表現(xiàn)為低熱、盜汗、乏力等，隨著病情的加重，病原菌及其分泌物會(huì)逐步侵蝕肺組織并造成患者肺功能障礙，嚴(yán)重者甚至出現(xiàn)血行傳播[1，2]。肺結(jié)核早期治療的預(yù)后較好，但目前肺結(jié)核的診斷依賴于痰結(jié)核菌培養(yǎng)、檢測(cè)耗時(shí)較久，用于疾病早期診斷及病情監(jiān)測(cè)的價(jià)值有限。因此，尋找相對(duì)簡(jiǎn)便的血清學(xué)指標(biāo)成為臨床肺結(jié)核研究的重點(diǎn)。

腺苷脫氨酶（ADA）、乳酸脫氫酶（LDH）均是與肺結(jié)核相關(guān)的血清指標(biāo)，ADA 在淋巴細(xì)胞及肺組織中含量較為豐富，當(dāng)淋巴細(xì)胞被破壞后ADA 釋放入血[3]；LDH 在肺中含量較為豐富，肺部疾患發(fā)生時(shí)LDH 含量會(huì)異常上升。 本次研究檢測(cè)肺結(jié)核患者、健康人血清中ADA、LDH 的含量，并進(jìn)一步探討ADA、LDH 含量與肺結(jié)核病情相關(guān)指標(biāo)的內(nèi)在聯(lián)系，以期明確ADA、LDH 在肺結(jié)核疾病診斷、病情判斷中的價(jià)值。

2 資料與方法

2.1 一般資料

2017 年1 月—2020 年1 月萊陽(yáng)市中醫(yī)醫(yī)院收治的肺結(jié)核患者88 例作為肺結(jié)核組，同期體檢的健康志愿者50 名作為正常對(duì)照組。 肺結(jié)核組中男性47 例、女性41 例，年齡20～69 歲，平均年齡（43.27±11.95）歲；正常對(duì)照組中男性27 名、女性23 名，年齡21～72 歲，平均年齡（45.84±10.67）歲。2 組研究對(duì)象一般資料的比較差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.2 入組及排除標(biāo)準(zhǔn)入組標(biāo)準(zhǔn)

入組標(biāo)準(zhǔn)：符合肺結(jié)核診斷標(biāo)準(zhǔn)；首次確診、院外未接受自主治療；心肝腎功能基本正常；全程配合實(shí)驗(yàn)室檢查、數(shù)據(jù)收集完整。 排除標(biāo)準(zhǔn)：合并細(xì)菌性肺炎、病毒性肺炎、哮喘、慢性阻塞性肺疾病等肺部基礎(chǔ)性疾患；既往肺部手術(shù)史；合并自身免疫性疾病。

2.3 ADA、LDH 檢測(cè)

入院即刻獲取2 組研究對(duì)象的空腹肘靜脈血血清，采用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)ADA、LDH 的含量。

2.4 病情相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)

采用相同方法獲取血清， 采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)Th1 細(xì)胞因子干擾素-γ（IFN-γ）、腫瘤壞死因子α（TNF-α）、Th2 細(xì)胞因子白介素-4（IL-4）、白介素-10（IL-10）的含量，采用放射免疫法測(cè)定血清中觸珠蛋白（HP）、脯氨酸肽酶（PEPD）、基質(zhì)蛋白酶抑制劑-1（TIMP-1）的含量。

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

文中數(shù)據(jù)處理選擇軟件SPSS25.0，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間比較采用t 檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Pearson 檢驗(yàn)，P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 2 組ADA、LDH 的比較

肺結(jié)核組患者血清中ADA、LDH 的含量均顯著高于正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），詳見表1。

3.2 2 組Th1/Th2 細(xì)胞因子的比較

肺結(jié)核組患者血清中Th1 細(xì)胞因子IFN-γ、TNF-α 的含量低于正常對(duì)照組，Th2 細(xì)胞因子IL-4、IL-10 的含量高于正常對(duì)照組， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），詳見表2。

表1 2 組研究對(duì)象血清中ADA、LDH 含量的比較，U/L）

表1 2 組研究對(duì)象血清中ADA、LDH 含量的比較，U/L）

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表2 2 組研究對(duì)象血清中IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-10 含量的比較，pg/mL）

表2 2 組研究對(duì)象血清中IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-10 含量的比較，pg/mL）

組別 例數(shù) Th1 細(xì)胞因子 Th2 細(xì)胞因子IFN-γ TNF-α IL-4 IL-10正常對(duì)照組肺結(jié)核組20.78±2.91 32.63±4.27 t 16.262 12.946 -11.242 -17.443 P 0.000 0.000 0.000 0.000 50 88 49.28±5.73 35.61±4.09 37.61±4.52 28.79±3.41 32.19±4.58 41.76±4.93

3.3 血清中HP、PEPD、TIMP-1 的含量

蛋白指標(biāo)肺結(jié)核組患者血清中HP、PEPD、TIMP-1的含量均顯著高于正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），詳見表3。

表3 2 組研究對(duì)象血清中HP、PEPD、TIMP-1 含量的比較

組別 例數(shù) HP（μg/mL） PEPD（mU/mL） TIMP-1（ng/mL）正常對(duì)照組肺結(jié)核組1392.64±153.79 2093.47±251.85 t-25.619 -35.070 -17.860 P 0.000 0.000 0.000 50 88 783.62±89.58 1382.94±150.85 851.26±94.88 1211.52±13.76

3.4 相關(guān)性分析

經(jīng)Pearson 檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，肺結(jié)核患者血清中ADA、LDH 的含量與Th1 細(xì)胞因子IFN-γ、TNF-α 的含量呈負(fù)相關(guān)，與Th2 細(xì)胞因子IL-4、IL-10 的含量呈正相關(guān)；與蛋白指標(biāo)HP、PEPD、TIMP-1 的含量呈正相關(guān)（P＜0.05），詳見表4。

4 討論

肺結(jié)核的早期診斷是制定合理治療方案的基礎(chǔ)，也是優(yōu)化患者治療情況的關(guān)鍵，但是痰結(jié)核菌培養(yǎng)耗時(shí)較長(zhǎng)且無法多次檢測(cè)，其用于肺結(jié)核早期診斷及病情監(jiān)測(cè)方面的價(jià)值存在局限性。 血清學(xué)指標(biāo)具有樣本獲取便捷、結(jié)果獲知迅速、可反復(fù)檢測(cè)等優(yōu)勢(shì)，故尋找血清學(xué)敏感指標(biāo)以輔助診斷肺結(jié)核、判斷病情嚴(yán)重程度具有積極的臨床意義。ADA 是參與嘌呤核苷酸代謝的催化酶， 其在淋巴細(xì)胞中的含量極高，當(dāng)結(jié)核分枝桿菌破壞T 淋巴細(xì)胞后ADA 大量分泌入血，故可在肺結(jié)核患者血清中早期檢測(cè)到含量大幅上升的ADA[4，5]。 LDH 屬于糖酵解酶，普遍表達(dá)于機(jī)體所有組織細(xì)胞中，但在肺組織中的表達(dá)量相對(duì)豐富，當(dāng)肺組織損傷發(fā)生時(shí)血清中LDH 的含量可出現(xiàn)不同程度的上升[6]。 本次研究首先對(duì)比了肺結(jié)核患者及正常人血清中ADA、LDH 含量的差異，結(jié)果顯示與正常對(duì)照組比較，肺結(jié)核組患者血清中ADA、LDH 的含量較高，表明ADA、LDH 的異常表達(dá)可用于肺結(jié)核的輔助診斷。

表4 肺結(jié)核患者血清中ADA、LDH 含量與病情指標(biāo)的相關(guān)關(guān)系

免疫功能異常直接參與肺結(jié)核的發(fā)生發(fā)展，目前研究認(rèn)為細(xì)胞免疫在肺結(jié)核病情中發(fā)揮較大作用。 Th1、Th2 細(xì)胞均屬于CD4+T 淋巴細(xì)胞亞群，其中Th1 細(xì)胞分泌的IFN-γ、TNF-α 是單核巨噬細(xì)胞的活化因子，有助于增強(qiáng)其吞噬病原菌的能力并局限化炎癥反應(yīng)[7，8]；Th2 細(xì)胞則主要分泌IL-4、IL-10，可抑制巨噬細(xì)胞活性， 導(dǎo)致病原菌在患者體內(nèi)無法完全有效清除[9]。生理狀態(tài)下人體Th1/Th2 免疫處于動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)，當(dāng)結(jié)核分枝桿菌入侵并形成肺結(jié)核時(shí)，Th1 免疫受抑制并逐步轉(zhuǎn)為Th2 免疫優(yōu)勢(shì)狀態(tài)是肺結(jié)核發(fā)生且持續(xù)進(jìn)展的重要原因之一[10]。 本次研究發(fā)現(xiàn)：與正常對(duì)照組比較，肺結(jié)核患者血清中Th1 細(xì)胞因子的含量較低，Th2 細(xì)胞因子的含量較高，證實(shí)肺結(jié)核患者存在Th1/Th2 免疫失衡。 經(jīng)進(jìn)一步Pearson 檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，肺結(jié)核患者血清中ADA、LDH 的含量與IFN-γ、TNF-α 含量呈負(fù)相關(guān)， 與IL-4、IL-10 含量呈正相關(guān)，證實(shí)ADA、LDH 含量可客觀反映肺結(jié)核患者的Th1/Th2 免疫失衡程度。

結(jié)核分枝桿菌感染人體后可導(dǎo)致多種蛋白含量改變，檢測(cè)其含量也成為早期衡量肺結(jié)核病情的輔助手段。 HP 屬于急性反應(yīng)時(shí)相蛋白，當(dāng)結(jié)核分枝桿菌感染導(dǎo)致巨噬細(xì)胞處于低氧狀態(tài)時(shí)，血紅蛋白含量大幅增加，HP 含量反應(yīng)性增加以避免過量血紅蛋白引起的毒性作用。 PEPD 屬于蛋白水解酶，肺結(jié)核患者免疫球蛋白增加、肉芽腫形成、組織降解增加均可誘導(dǎo)PEPD 合成并釋放入血[11]。 肺結(jié)核肉芽腫中存在大量透明質(zhì)酸及膠原蛋白，MMP-9 因具有基質(zhì)分解作用，故高表達(dá)與存在肉芽腫的肺結(jié)核患者中。TIMP-1 是MMP-9 的特異性抑制分子，當(dāng)MMP-9表達(dá)量增加時(shí)TIMP-1 代償性增多，因此也能間接反映肺結(jié)核肉芽腫嚴(yán)重程度[12]。本次研究發(fā)現(xiàn)，與正常對(duì)照組比較，肺結(jié)核患者血清中HP、PEPD、TIMP-1的含量較高，這與肺結(jié)核的肉芽腫等改變符合。經(jīng)進(jìn)一步Pearson 檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，肺結(jié)核患者血清中ADA、LDH的含量與HP、PEPD、TIMP-1 的含量呈正相關(guān)，證實(shí)ADA、LDH 含量可客觀反映肺結(jié)核患者的病情相關(guān)蛋白含量改變程度。

綜上所述，肺結(jié)核患者存在ADA、LDH 異常高表達(dá)，且其具體含量可客觀反映機(jī)體Th1/Th2 免疫的失衡程度和病情相關(guān)蛋白含量改變程度。 ADA、LDH 是輔助診斷肺結(jié)核并判斷病情嚴(yán)重程度的可靠指標(biāo)，值得在日后臨床實(shí)踐中推廣應(yīng)用。