盧小燕 鐘東玲 邱姍姍

（茂名市食品藥品檢驗所 廣東茂名 525000）

1 前言

麥味地黃丸由麥冬、五味子、山茱萸、熟地黃、山藥、茯苓、澤瀉、牡丹皮八味藥構成，換言之是六味地黃丸以及麥冬、五味子兩味藥構成，六味地黃丸本身具備滋養(yǎng)腎陰的功效，配以麥冬清肺養(yǎng)陰止咳，解熱解憂，滋補強?。辉偌由衔逦蹲涌梢宰棠I養(yǎng)陰，斂肺止咳。 因《中國藥典》中并無麥味地黃丸中五味子醇甲含量測定的方法，查詢藥典等書籍和網(wǎng)絡上的大量文獻，也并未見到測定麥味地黃丸中五味子醇甲含量的報道，但是有許多其他中成藥測定五味子醇甲的方法可供借鑒，為了更好地控制其內(nèi)在質(zhì)量，確保臨床療效穩(wěn)定可靠，本試驗采用高效液相色譜法對本品中五味子的有效成分五味子醇甲的含量進行了研究，以期為相關人員提供參考。

2 儀器與試藥

儀器詳見表1，藥品及試劑詳見表2。

表1 試驗儀器

表2 藥品及試劑

3 方法與結(jié)果

3.1 供試品制備方法的選擇（樣品批號：12032650）

3.1.1 參考提取方法

五子衍宗丸[1]中供試品的提取方法：將樣品打粉后，取細粉約3.5 g，精密稱定，至250 mL 錐形瓶中，精密量取甲醇25 mL 加至錐形瓶中，密塞，稱定重量，超聲處理30 min（功率250 W，頻率45 kHz），取出，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

為了驗證該方法能否將樣品中的五味子醇甲完全提取，取相當量的樣品采用加熱回流1 h 的方法制備供試品溶液，分別測定2 種供試品溶液。

3.1.2 提取時間的比較

取本樣品細粉3.5 g， 精密稱定（3.502 3、3.546 4、3.557 9 g），共取3 份分別置于具塞錐形瓶中，精密量取甲醇25 mL 于錐形瓶中，密塞，稱定重量，分別超聲處理20、30、45 min（功率100 W，頻率25 kHz）。

3.1.3 五味子醇甲的含量測定中波長的測定

用紫外分光光度計掃描200～300 nm 的波長，測定五味子醇甲對照品的最大吸收峰，并參考《中國藥典》2010 版一部，得到五味子醇甲的吸收波長為250 nm。

3.1.4 流動相的選擇

藥材五味子藥材中五味子醇甲含量測定的流動相只有甲醇和水，試驗初期采用的流動相是甲醇-水（71∶29），后改用流動相甲醇-水（68∶32）來比較試驗。結(jié)果表明，甲醇-水（68∶32）的分離效果良好，達到2.0，且五味子醇甲的液相色譜圖峰形較好，拖尾因子小于1.2，詳見表3、圖1～圖2。

表3 不同流動相下五味子醇甲的液相色譜結(jié)果比較

圖1 以甲醇-水（71∶29）為流動相的液相圖

圖2 以甲醇-水（68∶32）為流動相的液相圖

3.2 試驗方法

3.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適應性試驗

色譜柱：RP-18 endcapped（5 μm）；流動相：甲醇-水（68∶32）；流速：1.0 mL/min；柱溫：25℃；測定波長：250 nm；進樣量：10 μL。

3.2.2 對照品溶液的制備

精密稱定五味子醇甲對照品（批號：10857-200201）15.27 mg 加至100 mL 容量瓶中，加甲醇至容量瓶刻度，搖勻，然后精密量取5mL 至15 mL 量瓶中，加甲醇至量瓶刻度，搖勻，即得（每1 mL 中含五味子醇甲0.050 9 mg）。

3.2.3 供試品溶液的制備

將本樣品用粉碎機打粉，稱取約3.5 g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，稱定重量，再超聲處理（功率100 W，頻率45 kHz）30 min，放冷，稱定其失重，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

3.2.4 陰性溶液的制備

按處方比例取除五味子外的其他藥材70 g，依照處方所示的方法制備陰性對照溶液，再按“3.2.2”項下方法制成陰性溶液。

3.3 方法學考察

3.3.1 專屬性試驗

吸取麥味地黃丸供試品溶液、五味子醇甲對照品溶液以及陰性對照品溶液各10 μL，分別注入色譜儀，按“3.2.1”項下色譜條件測定，驗證陰性是否有干擾，詳見表4。

3.3.2 線性關系考察

精密稱量五味子醇甲對照品0.015 27g 至100 mL量瓶中，加甲醇溶解至量瓶刻度，搖勻，分別精密量取1、3、5、7、10、15 mL 至15 mL 量瓶中，加甲醇溶解至量瓶刻度，搖勻，即得6 個濃度（0.152 70、0.101 80、0.071 26、0.050 90、0.030 54、0.010 18 μg/μL）的對照品溶液，各進樣10 μL，注入液相色譜儀中按“3.2.1”項下擬訂的色譜條件測定。

表4 系統(tǒng)適應性試驗結(jié)果

以五味子醇甲對照品測得的峰面積值為縱坐標，對照品的濃度為橫坐標，繪制標準曲線，得回歸方程：y=2090158x+0.1005008，相關系數(shù)（r）=0.999 9（n=6）。 結(jié)果表明，五味子醇甲進樣量在0.010 18～0.152 70 μg 內(nèi)與峰面積呈良好線性關系。

3.3.3 精密度試驗

取同一濃度（0.050 9 mg/mL）的供試品溶液，按擬定的色譜條件連續(xù)進樣6 次，測得五味子醇甲的峰面積。 結(jié)果的相對標準偏差（RSD）=1.34%（n=6），在同一色譜條件下連續(xù)6 次，對同一五味子醇甲對照品溶液進樣，所得峰面積大小非常接近，顯示精密度良好。

3.3.4 穩(wěn)定性試驗

取同一份供試品溶液，在擬定的同一色譜條件下對同一供試品溶液在不同時間段，即0、2、4、6、8、12 h 分別進樣，結(jié)果含量的RSD=1.16%（n=6），因此在12 h 內(nèi)供試品溶液中五味子醇甲的含量能維持基本穩(wěn)定。

3.3.5 重復性試驗

取同一批號的樣品6 份，在相同的色譜條件下進行測定，結(jié)果表明在取樣量相差不大的情況下，五味子醇甲的平均含量是0.2028%，在0.2000%～0.2045%內(nèi)，RSD=1.07%，相對標準偏差較小。

3.3.6 加樣回收試驗

取同一批相同濃度供試品進行6 次回收率試驗。 對照品的加入量中五味子醇甲的含量和樣品的五味子醇甲含量之和在標準曲線線性范圍內(nèi)，結(jié)果表明6 次同一供試品溶液中測得五味子醇甲的平均回收率為98.6%，RSD=0.66%，測得結(jié)果不超過規(guī)定的平均回收率95%～105%，表明該方法可行。

3.3.7 樣品含量測定

取3 個批號樣品（12032650、130503、130604302），每個批號的供試品平行取2 份，按照“3.2.2”項下的方法制備供試品溶液，分別吸取已有的對照品和供試品各10 μL 注入液相色譜儀中按“3.2.1”項下擬訂的色譜條件進行測定，詳見表5。

表5 麥味地黃丸含量測定結(jié)果

4 討論

麥味地黃丸為《中國藥典》2010 年版一部所收載的品種，原標準并沒有收錄五味子醇甲的含量測定項，而五味子為處方的君藥之一，為確定五味子在處方中的含量，本方法通過測定五味子醇甲含量達到測定五味子含量的目的。經(jīng)過試驗，確立了麥味地黃丸中五味子醇甲含量測定的方法。 本文采用RP-18 endcapped（5 μm）色譜柱，甲醇-水（68∶32）為流動相，檢測波長為250 nm 測定麥味地黃丸中五味子醇甲的含量，五味子醇甲濃度的線性關系良好；重現(xiàn)性、穩(wěn)定性、精密度試驗結(jié)果良好，五味子醇甲液相色譜的峰與鄰峰的分離效果好；且供試品提取方法僅采用超聲提取，方法簡便快捷，該方法可為麥味地黃丸的質(zhì)量控制提供參考。