吳曼菊 高淑萍 黃豐光

（河源市疾病預(yù)防控制中心 廣東河源 517000）

1 前言

禽流感主要由甲型流感病毒引起，一旦人類產(chǎn)生感染，極易引發(fā)嚴(yán)重的并發(fā)癥，危害人體健康[1，2]。因此，了解活禽市場在外環(huán)境禽流感病毒的分布特征對廣東省河源市防控禽流感疫情有重要意義。

2 材料與方法

2.1 樣本采集

選取河源市2016—2019 年活禽市場外環(huán)境禽流感病毒檢測數(shù)據(jù)作為分析對象，各年度的采集樣本量均在300 份及以上。樣本采集的類型主要包括：糞便樣本、籠具表面擦拭樣本、宰殺或擺放禽肉案板表面的擦拭樣本、清洗禽類的污水、其他（包括刀具、脫毛機(jī)、砧板等），采集樣本的月份為11 月至次年5 月。

2.2 檢測方法

采用實(shí)時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)對禽流感病毒進(jìn)行檢測。首先，采用天隆NP968 核酸提取儀及其配套的核酸提取試劑盒提取病毒核酸（RNA），然后采用相應(yīng)的試劑盒展開檢測。 當(dāng)A 型流感病毒的檢測結(jié)果為陽性時，進(jìn)一步對各亞型進(jìn)行檢測。若出現(xiàn)陰性結(jié)果，則不再進(jìn)行H5、H7 和H9 亞型分型檢測。 對于出現(xiàn)H7 亞型陽性結(jié)果的，再繼續(xù)進(jìn)行H7N9 亞型核酸檢測。

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

在Excel 表中錄入相應(yīng)數(shù)據(jù)，并采用SPSS23.0 統(tǒng)計(jì)軟件展開數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料采用百分比表示，并進(jìn)行卡方檢驗(yàn)；對于多組比較，則需展開α 校正，P＜0.05 代表差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 調(diào)查結(jié)果與分析

3.1 2016—2019 年河源市活禽市場外環(huán)境禽流感病毒檢測結(jié)果

分析2016—2019 年河源市活禽市場外環(huán)境禽流感病毒的檢測結(jié)果，表1 數(shù)據(jù)顯示，共采樣1 305份，2017 年的陽性率最低（13.07%），2019 年的陽性率最高（22.33%），其次是2018 年（21.29%）。2016 年的陽性率略高于平均水平（18.75%）。 各年份的陽性檢出率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=6.351，P＜0.05）。 其中，相比于2017 年的陽性率，2018 年和2019 年的陽性率更高（χ2=8.222、10.061，P＜0.05）。 2016 年與2017 年的陽性率差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞0.05）。2018 年與2019 年的陽性率差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞0.05）。2016 年，H5 亞型陽性檢出率最高（3.13%）；2017 年、2018 年、2019 年，H9 亞型陽性的檢出率最高，分別為10.40%、12.90%、18.33%。 從整體來看，陽性檢出率按照從高到低排序，排名前三的依次為H9 亞型陽性（12.18%）、H5 和H9 混合陽性（2.30%）、H5 亞型陽性（1.23%）。

表1 2016—2019 年河源市活禽市場外環(huán)境禽流感病毒檢測結(jié)果

3.2 2016—2019 年河源市不同月份活禽市場外環(huán)境禽流感病毒檢測結(jié)果

分析4 年間河源市不同時間污染狀況的分布情況，表2 數(shù)據(jù)顯示，河源市12 月、1 月的陽性檢測率最高，分別為4.60%、4.29%，其次是11 月（3.45%），再次是4 月（2.61%），然后是5 月（1.69%）和2 月（1.23%），最后是3 月（0.69%）。 河源市11 月至1 月的污染度較為嚴(yán)重。11 月、12 月、1 月的陽性率之間差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞0.05），但均較2、3、4、5 月的陽性率高（P＜0.05）。 2、3、4、5 月份的陽性率間差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞0.05）。

表2 不同月份活禽市場外環(huán)境禽流感病毒檢測結(jié)果（n，%）

3.3 2016—2019 年河源市不同樣本活禽市場外環(huán)境禽流感病毒檢測結(jié)果

分析不同樣本中禽流感病毒檢測結(jié)果，表3 的數(shù)據(jù)結(jié)果顯示，依據(jù)陽性檢出率從高到低排序，依次為清洗禽類的污水（50.00%）、宰殺或擺放禽肉案板表面的擦拭樣本（27.78%）、籠具表面擦拭樣本（22.51%）、其他（16.16%）、糞便樣本（15.82%）。 不同樣本陽性率之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=11.286，P＜0.05）。 相比于其他樣本的陽性率，清洗禽類的污水的陽性率最高（P＜0.05）。 宰殺或擺放禽肉案板表面的擦拭標(biāo)本的陽性率則較其他（除清洗禽類的污水外）樣本的陽性率高（P＜0.05）?；\具表面擦拭樣本則較其他、糞便樣本的陽性率高（P＜0.05）。 糞便樣本和其他在陽性率方面差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞0.05）。

表3 不同樣本活禽市場外環(huán)境禽流感病毒檢測結(jié)果

4 討論

禽流感屬于甲型禽流感病毒，一般僅感染禽類。對于甲型流感病毒而言，其基因組是8 個節(jié)段的RNA片段[3]。 對于禽流感病毒而言，其是由可編碼不同蛋白質(zhì)的8 節(jié)段單股負(fù)鏈RNA 構(gòu)成，具有極強(qiáng)的基因重組能力。不同宿主之間進(jìn)行病毒傳播時，容易發(fā)生基因重配。一旦發(fā)生基因變異，將增強(qiáng)與人的結(jié)合能力，從而對人類公共衛(wèi)生帶來威脅，頻繁引起人和動物的流感流行[4，5]。

活禽市場作為禽類集中地，在混合圈養(yǎng)的情況下，當(dāng)通風(fēng)與衛(wèi)生條件不良時，均會加大禽流感病毒基因重組而產(chǎn)生新亞型的風(fēng)險[6]。 現(xiàn)階段，H5N1、H5N6、H7N9 是引發(fā)人感染禽流感的常見型別。 活禽市場外環(huán)境禽流感病毒的污染分布與其發(fā)生率有密切的關(guān)系。 早在2014 年河源市就出現(xiàn)首例人感染H7N9禽流感疫情，2014 年和2015 年發(fā)現(xiàn)多例人感染H7N9 禽流感病例，流行病調(diào)查表明3 人有明確的禽類接觸史，病例活動區(qū)域有3 份外環(huán)境拭子陽性[7]。因此，對活禽市場外環(huán)境污染分布情況進(jìn)行監(jiān)控尤為重要，其不僅是了解禽流感病毒污染分布的基礎(chǔ)，而且是及時采取有效防疫措施和加強(qiáng)管理的重要依據(jù)。

河源市活禽市場外環(huán)境的病毒亞型日益增多，H5 亞型、H9 亞型及兩者的混合型均檢出。河源市禽流感病毒亞型中，其主要以H9 亞型為主。 黃豐光[8]等學(xué)者在2014—2015 年對河源市的檢測數(shù)據(jù)顯示，H5 亞型、H9 亞型的陽性率分別為2.68%、5.64%。相比于2014—2015 年的檢測結(jié)果，2016—2019 年河源市H9 亞型的陽性率顯著升高。 可見近年來，河源市禽類攜帶的主要亞型是H9 亞型。 而其他亞型的陽性率較低，得益于疫苗接種舉措的開展。 在2017年，我國展開了重組禽流感病毒（H5+H7）二價滅活疫苗秋季集中免疫，因而H7 和H5 亞型的陽性率較低。然而，河源市H5 亞型依然存在，且H9 亞型的陽性率較高， 這提示在今后的工作中應(yīng)加強(qiáng)對活禽市場的檢測，并及時變更疫苗組分，從而不斷提高禽類防病的效果。另外，這也可能是活禽市場銷售活禽的攤位集中，在空間有限的情況下，加之空氣流動不暢、衛(wèi)生條件不合格等因素，導(dǎo)致H9 亞型的陽性檢出率增高。 良好的環(huán)境和衛(wèi)生條件對改善禽流感污染的嚴(yán)重程度有一定的作用。因此，應(yīng)合理安排活禽市場的攤位，并確?？諝鈺惩?。 同時，還應(yīng)注重對衛(wèi)生條件的檢查，以降低污染。

河源市11 月、12 月及1 月的污染度較為嚴(yán)重。可見，河源市禽流感病毒污染具有明顯的季節(jié)性特征。冬春季是禽流感高發(fā)季節(jié)已被廣泛認(rèn)同[9]。在對禽流感病毒展開檢測的過程中，應(yīng)重點(diǎn)對11 月、12 月以及1 月的禽流感病毒污染情況展開重點(diǎn)檢測，并及時采取有效的防疫措施。

河源市宰殺或擺放禽肉案板表面的擦拭樣本、籠具表面擦拭樣本的陽性檢出率最高。 這主要是由于禽流感病毒極易與禽類下呼吸道、肺部的3Gal 等受體結(jié)合并繁殖[10]。當(dāng)屠宰帶有病毒的禽類時，呼吸道內(nèi)的病毒會被釋放，因而陽性率較高。 除此之外，消毒不徹底等也是導(dǎo)致人感染禽流感病毒的高危因素。 因此，應(yīng)做到及時清洗和徹底消毒，以降低禽類從業(yè)人群的病毒感染風(fēng)險。與此同時，還應(yīng)面向禽類從業(yè)人群展開健康教育，增強(qiáng)其防護(hù)意識，降低感染風(fēng)險[11]。

綜上所述，河源市活禽市場外環(huán)境普遍存在禽流感病毒的污染，病原體主要以H9 亞型為主，且季節(jié)性特征明顯，因而應(yīng)針對河源市活禽市場外環(huán)境禽流感病毒污染的分布情況進(jìn)行密切檢測，以對病毒的流行趨勢和特征進(jìn)行了解和全面掌握，為防控措施的制定提供方向。與此同時，還應(yīng)進(jìn)一步禁止活禽宰殺市場，并不斷改變農(nóng)村家禽散養(yǎng)模式，以對病毒的傳染源進(jìn)行控制。 另外，還應(yīng)通過諸多渠道（如大眾媒體、社交平臺等）對禽類從業(yè)人員展開健康宣傳教育，以提升從業(yè)人員的防護(hù)意識。 除此之外，還應(yīng)注重定期消毒，以進(jìn)一步降低高危人群的感染風(fēng)險。