楊 莉，馮光泉，曾鴻超，毛忠順，張文斌，曾 江，劉云芝

（文山學(xué)院 文山三七研究院，云南 文山 663099）

異菌脲（iprodione）是一種非內(nèi)吸性保護(hù)性二甲酰亞胺類殺菌劑，又名撲海因。其化學(xué)名為3（3，5-二氯苯基）-1-異丙氨基甲?；覂?nèi)酰脲[1]。作為一種廣譜性殺菌劑，異菌脲能夠抑制孢子萌發(fā)和菌絲生長(zhǎng)，對(duì)葡萄孢屬、鏈核盤菌屬和核盤菌屬真菌有效，同時(shí)對(duì)鏈格孢屬和絲核菌屬真菌也有效，可以作葉面噴霧或種子處理[2-3]。

三七Panax Notoginseng（Burk）F.H.Chen，主產(chǎn)于云南省文山州，是我國(guó)的名貴中藥材[4]。三七是多年生喜陰性宿根植物，三年生三七才具有較好的藥用價(jià)值[3]，由于在地時(shí)間長(zhǎng)且生長(zhǎng)環(huán)境潮濕，在生長(zhǎng)過(guò)程中病蟲害較多。在三七生產(chǎn)上，異菌脲主要用于防治三七黑斑病、灰霉病、炭疽病、立枯病等病害[5]，防治效果較好，得到了廣泛應(yīng)用。三七上異菌脲的檢測(cè)方法鮮有報(bào)道，為此，本文開(kāi)展了三七樣品中異菌脲檢測(cè)方法的研究，建立了三七中異菌脲的檢測(cè)方法，并對(duì)50%的異菌脲可濕性粉劑進(jìn)行了消解動(dòng)態(tài)和殘留規(guī)律的研究。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試三七為三年生三七干燥塊根，用中藥材高速粉碎機(jī)粉碎、過(guò)60目篩，置于陰涼處備用。

1.2 儀器與試劑

Agilent 7890B 帶NPD氣相色譜儀（美國(guó)安捷倫公司），電子天平TE1502S（梅特勒托利多儀器有限公司），F(xiàn)loril固相萃取柱 （雅源科技公司），熱恒溫水浴鍋HHS型（上海博迅實(shí)業(yè)有限公司），正己烷、丙酮（色譜純，ikampure公司），氯化鈉（優(yōu)級(jí)純，京精細(xì)化學(xué)品有限責(zé)任公司）。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液與工作液的制備

準(zhǔn)確稱取適量異菌脲標(biāo)準(zhǔn)品，并用丙酮溶解、定容，得到濃度為1.00 g/L的異菌脲標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。用丙酮再將儲(chǔ)備液稀釋為1.00 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)工作液。

1.4 試驗(yàn)方法

1.4.1 田間施藥及采樣方法

根據(jù)NY/T 788—2004《農(nóng)藥殘留試驗(yàn)準(zhǔn)則》（以下簡(jiǎn)稱為“準(zhǔn)則”）的要求，施用50%的異菌脲可濕性粉劑1 912.5 g/hm2，三七的供試面積為60 m2（含3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)20 m2），施用量為3.06 g/m2，土壤的供試面積為36 m2（含3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)12 m2），施用量為0.510 g/m2。于2015年8月7日施藥后，采集樣品8次，即施藥后1～2 h、1 d、3 d、7 d、14 d、21 d、30 d、45 d進(jìn)行三七整株樣品的采集，每次每組試驗(yàn)按照不同處理、不同重復(fù)分別隨機(jī)采集三七植株50株，分離地上與地下部分，清洗干凈并晾干后，裝入自封袋中，于-20℃下貯藏備用。

1.4.2 超聲提取法

準(zhǔn)確稱取2.0 g三七粉末樣品21份，分為5組，分別精密加入濃度為1.00 mg/mL異菌脲標(biāo)準(zhǔn)溶液0.2 mL、0.4 mL、0.8 mL、1.0 mL及 2.0 mL置于150 mL具塞三角瓶中，加入體積比為4∶1的正己烷-丙酮混合液進(jìn)行超聲提取30 min后，將上清液過(guò)濾至100 mL的具塞三角瓶中，重復(fù)提取兩次，每次振蕩20 min，濾液減壓濃縮至近干后用正己烷溶解，待凈化。

1.4.3 凈化

上述樣品溶液用Florisil固相萃取小柱進(jìn)行凈化，用體積比為1∶4的丙酮-正己烷混合溶液進(jìn)行洗脫。用正己烷溶液預(yù)淋洗小柱兩次，棄去淋洗液，然后立即倒入待凈化的樣品溶液，取2 mL洗脫液進(jìn)行洗脫，收集濾液，將收集的淋洗液于40 ℃水浴減壓濃縮至近干，之后分別用體積比為1∶2的丙酮-正己烷混合液進(jìn)行溶解，搖勻。

1.4.4 GC-NPD色譜條件

毛細(xì)管柱類型：HP-5；檢測(cè)器溫度：300 ℃；進(jìn)樣口溫度：250 ℃；柱溫：初始溫度為50 ℃，以20 ℃/min的速率升溫至190 ℃，再以30 ℃/min的速率升溫至270 ℃，保持5 min；進(jìn)樣體積：1 uL。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

配制標(biāo)準(zhǔn)曲線，濃度分別為0.1 mg/L，0.2 mg/L，0.3 mg/L，0.4 mg/L，0.5 mg/L，以面積對(duì)濃度作圖，面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，得圖1。

圖1 異菌脲的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

求得回歸方程：y=100.9x +31.1，r2=0.994。

2.2 方法的精密度與準(zhǔn)確度

當(dāng)異菌脲標(biāo)準(zhǔn)品的添加濃度在0.2～2.0 mg/kg時(shí)，三七中的添加回收率為80.2%～94.6%，標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.6%～3.0%，變異系數(shù)為0.7%～4.4%，說(shuō)明該方法完全符合異菌脲殘留量檢測(cè)與分析的要求（見(jiàn)表1）。

表1 方法回收率、標(biāo)準(zhǔn)偏差 n=19

2.3 異菌脲在三七莖葉及塊根中的消解動(dòng)態(tài)：

異菌脲在三七莖葉中原始沉積量為0.031 mg/kg，在三七塊根中是0.007 mg/kg。試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，施藥48 d后，異菌脲在三七莖葉中的消解率均達(dá)到70%以上，塊根中的達(dá)到90%以上，見(jiàn)表2。

表2 異菌脲在三七莖葉和塊根的消解動(dòng)態(tài)試驗(yàn)結(jié)果

由表2可以看出，三七莖葉和塊根中的異菌脲殘留量（c，mg/kg）與異菌脲施用后的取樣時(shí)間（t，d）之間呈較明顯的負(fù)指數(shù)函數(shù)關(guān)系，可以用一級(jí)動(dòng)力學(xué)方程式ct=c0e-kt（其中：c0為施藥后的原始沉積量，ct為施藥后間隔t時(shí)的農(nóng)藥濃度，e為常數(shù)，k為消解速率常數(shù)，t為施藥后的天數(shù)）來(lái)擬合試驗(yàn)數(shù)據(jù)，如圖2、圖3。對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行擬合后得到異菌脲在三七莖葉及塊根中的降解動(dòng)態(tài)方程分別為ct=0.031e-0.025t、ct=0.007e-0.052t；其半衰期分別為28.12 d、13.211 d，相關(guān)系數(shù)（R）分別為0.953和0.766。

圖2 三七莖葉中異菌脲的消解動(dòng)態(tài)圖

圖3 三七塊根中異菌脲的消解動(dòng)態(tài)圖

3 討論

本文建立了三七中異菌脲的殘留檢測(cè)方法，以正己烷：丙酮（4∶1，v∶v）提取后，超聲提取30 min，然后，以正己烷：丙酮（2∶1，v∶v）作為淋洗液，F(xiàn)rolisil 小柱凈化，該方法重復(fù)性高，添加回收率可達(dá) 80%以上，符合農(nóng)藥殘留檢測(cè)的要求，可用于三七中異菌脲的提取及檢測(cè)。同時(shí)，通過(guò)對(duì)50%的異菌脲可濕性粉劑在三七地上及地下部分的消解動(dòng)態(tài)研究可看出，異菌脲是一種易降解的農(nóng)藥，可以在三七上按說(shuō)明書使用。