丹東市婦女兒童醫(yī)院（丹東市中心醫(yī)院婦兒院區(qū)）醫(yī)學(xué)檢驗科 （遼寧 丹東 118002）

內(nèi)容提要：目的：分析全自動生化分析儀在樣本交叉污染情況下檢測乙型病毒性肝炎的結(jié)果，評價臨床是否可共用標(biāo)本進行免疫生化檢測。方法：從2019年6月～2020年6月本院受檢血液樣本中選擇30例擁有不同含量的HBsAg的乙型病毒性肝炎陽性血液標(biāo)本，同時同樣選擇30例乙肝病毒檢測結(jié)果為陰性的血液樣本，共同作為本次研究觀察對象。依據(jù)血液標(biāo)本采集時間順序分別在分析儀監(jiān)測前提下，分析血液標(biāo)本被輕度污染后酶標(biāo)儀HBsAg含量及HBV-DNA含量，將檢測結(jié)果與被污染前數(shù)據(jù)進行對比，分析吸樣污染后對HBsAg及HBV-DNA的結(jié)果影響。結(jié)果：樣本交叉污染前后，生化分析儀提示HBsAg數(shù)據(jù)結(jié)果波動不大，而PCR定量檢測時可見HBVDNA含量有較大波動。結(jié)論：臨床工作中全自動生化儀器對樣本進行檢測時可能造成樣品被污染情況發(fā)生，但是其檢測結(jié)果只對PCR定量檢測HBV-DNA時影響較大，而對酶免HBsAg檢測結(jié)果并無明顯影響，可見，檢測儀器自身的狀態(tài)決定樣本可能受到污染的程度，所以在計劃應(yīng)用同一份標(biāo)本進行生化和免疫檢測時，應(yīng)提前評估生化儀對檢測免疫的影響程度，再決定是否采用同一樣本進行。

全自動生化分析儀對標(biāo)本交叉檢測時允許絕對誤差為0.32～0.7mmol/L，相關(guān)報道指出，在絕對誤差范圍內(nèi)的交叉污染不會影響一般生化檢測項目的實際指標(biāo)[1]。部分學(xué)者研究指出因全自動生化儀具備自動清洗功能，因此在標(biāo)本交叉檢測時如果自動清洗功能仍具備，那么在免疫及生化檢測共有同一標(biāo)本對HBV檢測結(jié)果影響甚微[2]。作者用酶免法對標(biāo)本HbsAg值進行檢測，采用PCR定量分析HBV-DNA數(shù)值，以研究臨床診斷時是否可以生化免疫項目共用一個血液樣本，具體匯報如下。

1.資料與方法

1.1 臨床資料

血液樣本選自2019年6月～2020年6月本院收治患者，共選取60份，其中30份為明確感染乙肝病毒樣本，分大三陽、小三陽、弱陽性等20份；將三組分別編號D1-D10，X1-X10，R1-R10，其中大小三陽組即D組和X組HbsAg含量均為陽性，且S/CO值均為30～50，弱陽性組及R組標(biāo)本HbsAg含量亦為陽性且S/CO值＜10。選取的60分標(biāo)本HBV-M均為非陽性，對應(yīng)的編號分別為d1-d10，x1-x10，r1-r10。所有入選標(biāo)本，均多次檢測確保指標(biāo)符合研究要求[3]。

儀器設(shè)備：儀型號為TOSHIBA TBA-40FR，Wellscan全自動酶標(biāo)儀，美國ABI 7500PCR儀。

1.2 方法

以上標(biāo)本經(jīng)生化分析儀操作前，先酶標(biāo)平行3次檢測，經(jīng)酶標(biāo)儀讀數(shù)取均值，記錄數(shù)據(jù)。同時，進行平行3次PCR定量檢測HBV-DNA，取均值，記錄數(shù)據(jù)。

1.3 觀察指標(biāo)

檢測并記錄污染前后酶標(biāo)儀HBsAg的結(jié)果，HBV-DNA的含量，最后把數(shù)據(jù)結(jié)果進行分析對比，評價全自動生化分析儀的工作時存在的下交叉污染程度，以判斷對樣本檢驗結(jié)果影響的程度[4]。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析

應(yīng)用SPSS 20.0分析統(tǒng)計軟件對樣本檢測結(jié)果進行統(tǒng)一運算統(tǒng)計分析，對統(tǒng)計數(shù)據(jù)部分應(yīng)用±s表示，以t為計量資料檢驗，計數(shù)資料的檢驗則通過χ2計算，當(dāng)數(shù)據(jù)結(jié)果提示P＜0.05時判斷為具有統(tǒng)計學(xué)差異。

2.結(jié)果

HBV-M血清樣品生化儀檢測前后HBsAg酶標(biāo)結(jié)果對比時，各組HBsAg數(shù)據(jù)結(jié)果波動不大，而PCR定量檢測時可見HBV-DNA含量有較大波動。

3.討論

由此可見，全自動化分析儀在檢測時候可能對血液樣品造成一定程度污染，在陰性血液樣本HBV-DNA檢測過程中可以明顯地體現(xiàn)出來，但是針對于酶免HBsAg讀數(shù)中的陽性標(biāo)本HBV-DNA定量影響卻不明顯[5]。造成這個現(xiàn)象的原因可能有多種因素，其中試驗設(shè)計本身也可能存在缺陷，其中酶免HBsAg用樣品量（50μL）數(shù)值過大。研究中，全自動生化儀檢測交叉污染對酶免HBsAg標(biāo)值的干擾，結(jié)果表明是在合理范圍內(nèi)的，不過如果檢測過程中存在吸樣后不清洗或者清洗不充分情況下，就可能存在較大污染，嚴(yán)重干擾實際檢測結(jié)果[6]。研究指出ELISA檢測靈敏度較高，但是依然存在假陽性可能[7]。不同廠家不同型號的儀器，樣品自身可能攜帶的污染程度也有較大區(qū)別，因此工作中應(yīng)對儀器進行必要的維護和清潔保養(yǎng)。污染率都在1%以下，都不會對實驗帶來很大的污染，但是會造成免疫分析假陽性。因此，生化項目與免疫分析不宜共用標(biāo)本，如果迫不得已，需要根據(jù)自身實際情況進行設(shè)計實驗。確定全自動生化分析儀樣本攜帶污染的影響程度并不是很大的時候，才可以進行實驗。