王巧媚，陸丹倩，彭 明，鄧 沖，鄧聚輝

(廣東省中山市中醫(yī)院,廣東 中山 528400)

在臨床中銅綠假單胞菌是一種常見的條件致病菌，根據(jù)菌落形態(tài)可以分為黏液型和非黏液型，兩者在一定條件下可以相互轉(zhuǎn)換。在慢性呼吸道感染疾病中，如慢性阻塞性肺炎、支氣管擴(kuò)張等患者中分離率較高。黏液型銅綠假單胞菌的表面可以產(chǎn)生大量黏液，且其黏液成分以多糖藻酸鹽為主，在持續(xù)定植之后形成生物膜，幫助細(xì)菌躲避機(jī)體的免疫清除，同時(shí)也增強(qiáng)對(duì)抗菌藥物的耐藥性，致使感染持續(xù)發(fā)生，經(jīng)抗菌藥物治療后其效果并不是很理想[1-2]。針對(duì)藥物敏感性的檢測(cè)方法有ATB、儀器法等，但是均適用生長(zhǎng)速度比較快的細(xì)菌，而黏液型銅綠假單胞菌則是生長(zhǎng)比較慢的一種細(xì)菌，因此并不適用。紙片擴(kuò)散法(K-B法)具有可靠、準(zhǔn)確度高等優(yōu)勢(shì)，適用于檢測(cè)黏液型銅綠假單胞菌的藥物敏感性，但是黏液型銅綠假單胞菌在孵育18～24 h后抑菌圈的直徑并不是很明顯，不僅增加了測(cè)量的難度，對(duì)檢測(cè)結(jié)果也造成一定的影響[2-5]。在此次研究中主要分析黏液型銅綠假單胞菌不同時(shí)間的藥敏結(jié)果差異，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1菌株來(lái)源：將2015年1月～2018年12月我院送檢的各類合格標(biāo)本中分離到的黏液型銅綠假單胞菌收集起來(lái)，同一例患者多次分離得到的菌株不予以重復(fù)計(jì)算。將菌株置于-75℃的環(huán)境中保存，一共收得82株。

1.2儀器與試劑：所有菌株經(jīng)過(guò)珠海迪爾半自動(dòng)微生物分析儀鑒定為銅綠假單胞菌，M-H瓊脂培養(yǎng)基購(gòu)自江門凱林，藥敏紙片買自英國(guó)OXOID公司。質(zhì)控菌株ATCC27853來(lái)自國(guó)家衛(wèi)生健康委臨床檢驗(yàn)中心。

1.3試驗(yàn)方法：所有標(biāo)本接種及培養(yǎng)均嚴(yán)格按照《全國(guó)臨床操作規(guī)程》第4版進(jìn)行。對(duì)痰液標(biāo)本先進(jìn)行涂片并篩查，經(jīng)低倍鏡視野進(jìn)行觀察，標(biāo)本中鱗狀上皮細(xì)胞<10個(gè)且白細(xì)胞>25個(gè)為合格。采用統(tǒng)一的K-B法，藥敏結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)參照臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(huì)(CLSI)2018版。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：采用WHONET 5.6和SPSS 19.0進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)處理，用率(%)來(lái)代表計(jì)數(shù)資料，進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1黏液型銅綠假單胞菌的標(biāo)本來(lái)源：在82株黏液型銅綠假單胞菌中，分離自呼吸道標(biāo)本的有75株占91.5%，尿液標(biāo)本的有5株占6.1%，血液標(biāo)本1株占1.2%,分泌物標(biāo)本1株占1.2%。

2.2不同時(shí)間藥物敏感性檢測(cè)結(jié)果的比較：24 h與48 h慶大霉素敏感率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，其他藥物比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；48 h與72 h藥敏結(jié)果比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

3 討論

銅綠假單胞菌是醫(yī)院感染重要的條件致病菌，可引起呼吸道、泌尿道、傷口和血液等多部位的感染。根據(jù)菌落形態(tài)可分為黏液型和非黏液型，兩者在一定條件下可以相互轉(zhuǎn)換。黏液型銅綠假單胞菌24 h形成的菌落較小，容易被忽略，48 h后菌落呈透明、露滴樣融合為一片，可產(chǎn)或不產(chǎn)色素，因此原始平板應(yīng)延長(zhǎng)至48 h后以防漏檢。同樣，對(duì)于黏液型銅綠假單胞菌的藥敏方法多項(xiàng)研究證實(shí)K-B法比MIC法更可靠[2-5]。同時(shí)藥敏孵育時(shí)間應(yīng)延長(zhǎng)至48 h后結(jié)果更為合理[6-10]。從本研究可見，用K-B法對(duì)黏液型銅綠假單細(xì)胞的藥物敏感性進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，因其生長(zhǎng)的速度比較慢，所以24 h檢測(cè)敏感率要比48 h檢測(cè)敏感率高，除了妥布霉素、慶大霉素、阿米卡星和美洛培南外，其他8種藥物差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，當(dāng)細(xì)菌培養(yǎng)時(shí)間至72 h時(shí)藥敏結(jié)果與48 h藥敏結(jié)果比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，因此黏液型銅綠假單胞菌培養(yǎng)的時(shí)間應(yīng)在48 h后讀取，以提高藥敏結(jié)果的精準(zhǔn)度，與孫敬等報(bào)道的結(jié)果[11]相符。通過(guò)48 h藥敏檢測(cè)結(jié)果證實(shí)，黏液型銅綠對(duì)美洛培南與氨基糖苷類抗生素的敏感率比較高，對(duì)其他藥物的敏感性略差，因此在臨床用藥時(shí)應(yīng)根據(jù)患者的情況使用，此外對(duì)哌拉西林、頭孢吡肟及左氧氟沙星的敏感性比較差，耐藥率均高于30%，因此應(yīng)慎重使用。

表1 不同時(shí)間藥物敏感性檢測(cè)結(jié)果的比較[例(%)]

綜上所述，黏液型銅綠假單胞菌生長(zhǎng)比較慢，培養(yǎng)的時(shí)間應(yīng)適當(dāng)延長(zhǎng)，藥敏試驗(yàn)結(jié)果的判讀則應(yīng)延長(zhǎng)至48 h后。