周媛媛，宋紅娟，李 健，郭 爽，王 瑩，高蕙蕊，劉 艷，劉雨新，張曉娟，付起鳳

（1.黑龍江中醫(yī)藥大學藥學院，黑龍江 哈爾濱 150040；2.哈爾濱市中醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150599；3.黑龍江中醫(yī)藥大學學術(shù)理論研究部，黑龍江 哈爾濱 150040；4.黑龍江中醫(yī)藥大學實驗中心，黑龍江哈爾濱 150040）

青龍衣為胡桃科胡桃屬植物核桃楸Juglans mαndshuricaMaxim 的未成熟外果皮。我國現(xiàn)有的胡桃屬植物主要有8 種［1］，其中藥用品種主要為核桃、核桃楸2 種。藥材的枝、葉、樹 皮、根 皮、堅果內(nèi)隔、外果皮等部位均可入藥［2］。其不僅具有補氣益血、調(diào)燥化痰、益智健腦等保健功能，還具有治療皮膚病、子宮脫垂、高血壓、糖尿病等多種臨床病癥的作用［3-5］，尤其是該屬植物顯著的抗腫瘤作用已經(jīng)成為醫(yī)藥領(lǐng)域的研究熱點。目前研究報道表明青龍衣抗腫瘤作用尤為顯著，且該資源每年以廢物形式大量丟棄不僅污染環(huán)境，也不利于藥用資源合理利用。本實驗對青龍衣開展系統(tǒng)成分研究，從中分離得到14 個化合物，其中化合物1～5、7～8、10、12～14 為首次從青龍衣中分離得到。

1 材料

NE-1101 型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（日本東京理化株式會社）；AV-400 型超導核磁共振儀（美國Bruker 公司）；Q-TOF（ESI）高分辨質(zhì)譜儀（美國Waters公司））；Sephadex LH-20（瑞 士Pharmacia 公司）；Anton Paar-MCP 600 旋光儀（奧地利Anton Paar 公司）；柱色譜硅膠（200～300 目）和薄層色譜硅膠（青島海洋化工廠）；515-2414 半制備型高效液相色譜（美國Waters 公司）。用于半制備液相的試劑為色譜純；其余均為分析純。

青龍衣藥材于2017 年7 月采自吉林省長白山地區(qū)，經(jīng)黑龍江中醫(yī)藥大學藥學院王振月教授鑒定為胡桃科植物核桃楸Juglαns mαndshuricαMaxim 的未成熟外果皮，標本（20170715）保存于黑龍江中醫(yī)藥大學中藥化學教研室。

2 提取與分離

將陰干的青龍衣藥材（10.0 kg）適當粉碎，以8 倍量95%乙醇溶液室溫浸泡7 d，收集濾液，上述操作重復3 次，減壓濃縮得到浸膏（695.5 g）。浸膏加適量蒸餾水分散后，二氯甲烷、乙酸乙酯及水飽和的正丁醇多次萃取，得到二氯甲烷萃取部位浸膏（270.2 g）、乙酸乙 酯萃取 部位浸 膏（180.6 g）。

取二氯甲烷組分，采用硅膠柱層析法以石油醚-乙酸乙酯（100∶0～0∶100）梯度洗脫，每一流份經(jīng)薄層檢識后相近者合并，共得到Fr.1～Fr.7。Fr.1 經(jīng)硅膠柱色 譜，石油 醚-乙酸乙酯（100∶0～20∶1）系統(tǒng)進行梯度洗脫，重結(jié)晶，分離得化合物14（14.2 mg）、13（10.5 mg）。Fr.3經(jīng)硅膠柱色譜，石油醚-乙酸乙酯（50∶0～10∶1）梯度洗脫，分離得化合物11（5.8 mg）、10（13.6 mg）。Fr.5 經(jīng)硅膠 柱色譜，石油醚-乙酸乙 酯（20∶1～0∶1）梯度洗脫，Sephadex LH-20（甲醇-水=80∶20），分離得化合物4（12.6 mg）。

取乙酸乙酯組分，通過硅膠柱層析法以二氯甲烷-甲醇（100∶0～0∶100）梯度洗脫，每一流份經(jīng)薄層檢識后相近者合并，共得到Fr.1～Fr.5。Fr.1 經(jīng)硅膠柱色譜，二氯甲烷-甲醇（50∶1～15∶1）梯度洗脫，分離得化合物12（13.1 mg）、9（8.9 mg）、8（10.2 mg）、7（6.7 mg）。Fr.2 經(jīng)硅膠柱色譜，二氯甲烷-甲醇（30∶1～20∶1）梯度洗脫，Sephadex LH-20（甲醇），分離得化合物6（14.3 mg）、5（13.2 mg）。Fr.4 經(jīng)硅膠柱色譜，二氯甲烷-甲醇（20∶1～5∶1）梯度洗脫，分離得化合物3（8.2 mg）、2（9.5 mg）。Fr.5 經(jīng)硅膠柱色譜，二氯甲烷-甲醇（15∶1～0∶1）梯度洗脫，結(jié)合反相ODS 柱色譜（甲醇-水=60∶40）和半制備型HPLC（甲醇-水=50∶50）分離得化合物1（4.5 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物9：淡黃色油狀物質(zhì)。HR-ESI-MSm/z：327.157 8 ［M+H］+，分子式 C20H22O4。IH-NMR（CDCl3，400 MHz）δ：7.08（2H，d，J=8.6 Hz，H-2′，H-6′），6.81（1H，d，J=8.0 Hz，H-5″），6.78（1H，d，J=16.6 Hz，H-5），6.71（2H，d，J=8.6 Hz，H-3′，H-5′），6.64（1H，brs，H-2″），6.63（1H，brd，J=8.0 Hz，H-6″），6.06（1H，d，J=16.6 Hz，H-4），5.82（1H，brs，4′-OH），5.57（1H，brs，4″-OH），3.82（3H，s，3-OCH3），2.83（2H，t，J=7.2 Hz，H-1），2.82（2H，t，J=7.2 Hz，H-2），2.66（2H，m，H-7），2.50（2H，m，H-6）；13C-NMR（CDCl3，100 MHz）δ：200.3（C-3），153.6（C-4′），146.8（C-5），146.3（C-3″），143.4（C-4″），132.6（C-1′），132.6（C-1″），130.8（C-4），129.3（C-2′，C-6′），120.7（C-6″），115.5（C-3′，C-5′），114.2（C-5″），110.7（C-2″），56.1（3″-OCH3），42.1（C-2），34.8（C-6），34.2（C-7），29.6（C-1）。以上數(shù)據(jù)與文獻［13］基本一致，故鑒定為1-（4′-羥基苯 基）-7-（3″-甲基苯 基-4″-羥基苯基）-4-烯-3-庚酮。

4 討論

二芳基庚烷類化合物是2 個不同程度氧化或取代的芳香環(huán)，被一具有7 個碳原子的氧化脂肪鏈通過1，7-位連接形成的一類化合物的總稱。由于其特殊的結(jié)構(gòu)特征和抗腫瘤的藥理活性較為顯著，近年來受到國內(nèi)外學者的廣泛關(guān)注［17-18］。目前為止，課題組在青龍衣中發(fā)現(xiàn)的二芳基庚烷類多為環(huán)醚型（化合物1、4、10～11），除此之外還有直線型（化合物5～7、9、12）和大環(huán)聯(lián)苯型（化合物8、12），以期為進一步開展構(gòu)效關(guān)系以及抗腫瘤藥理活性研究奠定了藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。