丁菁蕓，郭翰翔，雒 靜，許建華，邵 萌，吳 芳

結(jié)核病流行的最新數(shù)據(jù)顯示，結(jié)核病仍然是最致命的傳染病，也是最大的單一感染性病原體致死原因。2018年，全球有700萬(wàn)新發(fā)結(jié)核病，感染人數(shù)約為17億。其中57%的男性，32%的女性和11%的兒童(年齡<15歲)。所有國(guó)家和年齡組都有病例，但總體上89%是成年人(年齡≥15歲)[1]。Bacillus Calmette-Guérin(BCG)是目前唯一獲得世界各國(guó)許可預(yù)防結(jié)核病的疫苗，在預(yù)防嬰幼兒結(jié)核病方面具有中等效力，但在青少年和成年人中預(yù)防結(jié)核病方面并不可靠。目前正在進(jìn)行臨床Ⅱb期試驗(yàn)的卡介苗再接種雖然對(duì)印度的成年人有一定的保護(hù)作用 ，但是在不同年齡組和不同地區(qū)結(jié)核病的發(fā)病率不一致，使得卡介苗再接種對(duì)結(jié)核病的防護(hù)水平也不一致[3]。結(jié)核病的致病機(jī)制相對(duì)復(fù)雜，目前，中國(guó)也是全球9個(gè)結(jié)核病高負(fù)擔(dān)國(guó)家之一。所以深入探究結(jié)核病疫苗的抗結(jié)核免疫機(jī)制對(duì)我們未來(lái)生產(chǎn)更高效，毒性作用更小，預(yù)防作用更好的結(jié)核病疫苗有著重要的作用。本文將對(duì)目前正在進(jìn)行臨床試驗(yàn)的疫苗和一些新的抗結(jié)核研究機(jī)制進(jìn)行綜述。

1 減毒活疫苗

VPM1002是將單核細(xì)胞李斯特菌hly整合至BCG[4]的重組卡介苗(rBCG)。它可以通過(guò)誘導(dǎo)體液免疫和細(xì)胞免疫應(yīng)答使機(jī)體產(chǎn)生強(qiáng)烈的抗結(jié)核免疫效果。與普通BCG相比較，重組卡介苗產(chǎn)生的免疫更為持久，因此，重組卡介苗可以在胎兒分娩后的任何時(shí)間進(jìn)行接種。VPM1002即使在SCID(重癥聯(lián)合免疫缺陷)小鼠中也具有較高的安全性，并提供了顯著增強(qiáng)針對(duì)結(jié)核分枝桿菌的保護(hù)[5]。首先，VPM1002疫苗可以促進(jìn)細(xì)胞凋亡和自噬，并促進(jìn)分枝桿菌抗原釋放到細(xì)胞質(zhì)中，增加細(xì)胞質(zhì)中抗原的負(fù)載以增強(qiáng)引發(fā)MHC I限制性CD8+T細(xì)胞的表達(dá)，CD8+T細(xì)胞通過(guò)該途徑識(shí)別、吸附吞噬細(xì)胞的結(jié)核桿菌抗原[6-7]。其次，其誘導(dǎo)高于卡介苗的抗原特異性記憶CD4+T細(xì)胞的數(shù)量和比例，具有CXCR5和CCR7表型[8]。VPM1002疫苗接種后顯著增加抗原特異性CD4+T細(xì)胞和IL-2的產(chǎn)生，肺和脾細(xì)胞中的IL-17(在抗結(jié)核免疫中具有重要作用)，IFN-γ和粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)產(chǎn)量提高。其中分泌細(xì)胞因子IL-17的細(xì)胞中，γδT細(xì)胞所占比例最高。在分泌IFN-γ的細(xì)胞中，自然殺傷細(xì)胞(natural killer cell，NK)所占比例最高。因此，VPM1002免疫誘發(fā)并加強(qiáng)Th1和Th17細(xì)胞因子反應(yīng),并在肺和脾臟中持續(xù)存在長(zhǎng)時(shí)間[9]。雖然 VPM1002疫苗和BCG均可誘導(dǎo)IL-17應(yīng)答。但是，在接種的第16周和第6個(gè)月的時(shí)間點(diǎn)上，接種VPM1002疫苗導(dǎo)致IL-17CD8+T細(xì)胞增加[10]。此外，受到VPM1002感染的巨噬細(xì)胞中的囊泡通過(guò)骨髓來(lái)源的樹(shù)突狀細(xì)胞(Dendritic Cells,DC)亞群誘導(dǎo)更多Th17極化細(xì)胞因子IL-6和IL-23以及免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞因子IL-10的產(chǎn)生[7]。VPM1002感染與黑色素瘤2 (AIM2)炎癥小體缺失強(qiáng)化激活、半胱天冬酶激活增強(qiáng)、IL-1β和IL-18的產(chǎn)生以及AIM2依賴性和干擾素基因刺激因子(STING)依賴性自噬的誘導(dǎo)有關(guān)[11]。

與VPM1002疫苗思路相同，但是CysVac2是由早期分泌抗原CysD和Ag85B融合而成。Counoupas等人構(gòu)建的過(guò)表達(dá)CysVac2的重組BCG菌株(rBCG:CysVac2)與親代BCG相比較，rBCG:CysVac2皮內(nèi)接種導(dǎo)致機(jī)體內(nèi)的單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞召募增加，抗原特異性CD4+T細(xì)胞啟動(dòng)增強(qiáng)，進(jìn)而產(chǎn)生更強(qiáng)的誘導(dǎo)特異性IFN-γ分泌細(xì)胞的作用，而且用CysVac2融合蛋白加強(qiáng)BCG的保護(hù)效果也得到類似的改善[12]。另有研究表明，加入適當(dāng)佐劑可以提高特異性多功能(IFN-γ+TNF-α+IL-2+)CD4+T細(xì)胞數(shù)目并提前啟動(dòng)特異性多功能CD4+T細(xì)胞[13-14]。

MTBVAC疫苗是第1個(gè)也是目前唯一一個(gè)基于MTB的減毒活疫苗候選疫苗[15]。疫苗誘導(dǎo)強(qiáng)大的中樞記憶CD4+T細(xì)胞反應(yīng)并能長(zhǎng)期維持CD4+T細(xì)胞記憶，進(jìn)而促進(jìn)機(jī)體表達(dá)高水平的IFN-γ,可以有效控制結(jié)核桿菌感染[16-18]。這表明MTBVAC疫苗免疫反應(yīng)比BCG的免疫反應(yīng)持續(xù)時(shí)間更為長(zhǎng)久。更為有效地誘導(dǎo)針對(duì)結(jié)核分枝桿菌引起人類結(jié)核病的特異性免疫[19]。

2 蛋白質(zhì)/佐劑疫苗

H4∶IC31疫苗，其中H4融合蛋白由兩種免疫原性分枝桿菌抗原Ag85 B和TB10.4組成，佐劑為IC31。IC31已被證明能誘導(dǎo)對(duì)多種多肽和抗原的有效和持續(xù)的細(xì)胞和體液反應(yīng)并且在TB的動(dòng)物模型中有效,可誘導(dǎo)強(qiáng)效細(xì)胞反應(yīng)[20]。其中，H4∶IC31可以有效促進(jìn)BCG誘導(dǎo)的免疫反應(yīng)，即誘導(dǎo)、促進(jìn)、維持、保護(hù)機(jī)體內(nèi)具有記憶和效應(yīng)表型的多功能CD4+T細(xì)胞，進(jìn)而增強(qiáng)和延長(zhǎng)產(chǎn)生多種細(xì)胞因子的T細(xì)胞反應(yīng)，從而進(jìn)一步增強(qiáng)和延長(zhǎng)免疫應(yīng)答。因此，H4∶IC31作為BCG加強(qiáng)疫苗使用時(shí)，可以在感染期間顯示出誘導(dǎo)和維持對(duì)含有H4疫苗抗原的強(qiáng)烈反應(yīng)的最高能力。此外，這種針對(duì)疫苗抗原的應(yīng)答，尤其以具有多功能中樞記憶樣表型的T細(xì)胞所支配。發(fā)生感染后，這類T細(xì)胞將會(huì)被募集到感染部位發(fā)揮作用[21]。H4∶IC31還誘導(dǎo)了較為持久的Th1反應(yīng)，并且抗原Ag85B和TB10.4特異性應(yīng)答主要由多功能(IFN-γ+IL-2+TNF-α+)和雙功能(IL-2+TNF-α+)CD4+T細(xì)胞亞群產(chǎn)生，其中占主導(dǎo)地位的是抗原Ag85B產(chǎn)生的特異性T細(xì)胞(IFN-γ+IL-2+TNF-α+)[22]。Hennie Geldenhuys[22]等人，Sepideh Aboutorabian[23]等人和Maria Norrby[24]等人都表明低劑量的H4抗原和高劑量的IC31佐劑能夠有效的誘導(dǎo)最佳CD4+T細(xì)胞免疫反應(yīng)，使H4∶IC31最具免疫原性和保護(hù)性。另外Nemes E.等人證明卡介苗提供45.4%的疫苗功效(95%置信區(qū)間 6.4～68.1)，而 H4∶IC31 提供 30.5%的疫苗功效(80%置信區(qū)間 3.0～50.2)，在 95%的置信區(qū)間水平上無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。這表明沒(méi)有 MTB相關(guān)抗原，可能降低持續(xù)QFT-GIT轉(zhuǎn)化率，這可能反映了持續(xù)的結(jié)核分枝桿菌感染，這一發(fā)現(xiàn)為新疫苗提供新的思路[25]。

與H4∶IC31佐劑相同的另一種疫苗H56∶IC31，其中H56含有Ag85B和ESAT-6(這是在感染急性期分泌的兩種結(jié)核分枝桿菌抗原)和營(yíng)養(yǎng)脅迫誘導(dǎo)的抗原Rv2660c。研究表明在潛伏期/亞臨床期感染的H56 / IC31對(duì)所有這3種疫苗抗原均具有疫苗促進(jìn)和召回反應(yīng)，對(duì)ESAT-6和Rv2660c的應(yīng)答非常明顯(感染后1～3周)，與在H56刺激后對(duì)ESAT-6，Rv2660c和Ag85B產(chǎn)生了攻擊前的IFN-γ反應(yīng)有關(guān)[26]。炎癥標(biāo)記物(ESR)的極低水平和對(duì)CFP10的低感染驅(qū)動(dòng)反應(yīng)，阻止了抗腫瘤壞死因子(TNF)誘導(dǎo)的MTB的再激活，可有效抑制潛在感染和控制細(xì)菌復(fù)制[26]。研究證明即使用不同劑量的疫苗，Ag85B和ESAT-6特異性CD4+T細(xì)胞的功能和多功能評(píng)分也沒(méi)有差異。但是較低劑量的H56∶IC31誘導(dǎo)抗原特異性Th1細(xì)胞頻率更為持久，多功能Th1細(xì)胞數(shù)量更多，這些細(xì)胞共同表達(dá)IFN-γ、TNF-α和(或)IL-2[27-28]。遺憾的是表達(dá)細(xì)胞因子的細(xì)胞皆為特異性CD4+T細(xì)胞沒(méi)有特異性CD8+T細(xì)胞[27-28]。在H4∶IC31和H56∶IC31接種組中，疫苗誘導(dǎo)的CD4+T細(xì)胞應(yīng)答率最高的是那些識(shí)別Ag85B的人群，接種疫苗后，H56∶IC31組對(duì)ESAT-6的應(yīng)答和H4∶IC31組對(duì)TB10.4的應(yīng)答也顯著增加。二者均誘導(dǎo)血清IgG的CD4+T細(xì)胞反應(yīng)[29]。

M72/AS01E疫苗可以誘導(dǎo)多功能、持續(xù)的M72(Mtb32A和Mtb39A)特異性CD4+T細(xì)胞反應(yīng)和強(qiáng)烈的體液反應(yīng)，促進(jìn)機(jī)體產(chǎn)生IFN-γ、TNF-α、IL-2和IL-17以控制分枝桿菌感染[30-31]。但是在受試者中，觀察到CD4+T細(xì)胞多功能性水平較低和CD4+T細(xì)胞表達(dá)的IL-17水平非常低，且?guī)缀鯖](méi)有檢測(cè)到IL-13[30]。如果使用2劑M72/AS01E疫苗，可以誘導(dǎo)產(chǎn)生較高數(shù)量的M72特異性抗體和Th1細(xì)胞因子，提供的CD4+T細(xì)胞反應(yīng)可長(zhǎng)達(dá)一年[32]。

除上述疫苗主要產(chǎn)生特異性CD4+T細(xì)胞免疫反應(yīng)外，有研究證明ID93/GLA-SE免疫可刺激機(jī)體產(chǎn)生大量CD8+T細(xì)胞，這有助于提高感染者的保護(hù)作用[33]。ID93+GLA-SE是一種與Toll樣受體激動(dòng)劑佐劑GLA-SE結(jié)合的融合蛋白，作為一種新型的抗結(jié)核疫苗候選株[34]。用ID93+GLA-SE疫苗可誘導(dǎo)高滴度的ID93(Rv3619-Rv1813-Rv3620-Rv2608)特異性抗體，產(chǎn)生大量IgG1和IgG3亞類并增強(qiáng)Fc介導(dǎo)的巨噬細(xì)胞吞噬功能[35]。接種過(guò)ID93/GLA-SE的機(jī)體再接觸病菌時(shí)，肺和脾中會(huì)產(chǎn)生大量IFN-γ，來(lái)對(duì)抗結(jié)核桿菌感染[36]。

3 全細(xì)胞或提取物疫苗

母牛分枝桿菌(M.vaccae)來(lái)源于非結(jié)核分枝桿菌的熱滅活疫苗，可作為免疫調(diào)節(jié)劑用于增強(qiáng)細(xì)胞免疫并抵抗患者體內(nèi)的抗結(jié)核分枝桿菌感染，目前正在進(jìn)行Ⅲ期臨床試驗(yàn)[37-38]。與M. indicus pranii(MIP)和RUTI是目前已知進(jìn)入臨床試驗(yàn)僅有的三種治療性疫苗，這些結(jié)核病疫苗主要針對(duì)于耐多藥結(jié)核病(MDR-TB)和多菌性麻風(fēng)病(multibacillary leprosy)[39]。M.vaccae的作用機(jī)制與細(xì)胞壁的肽聚糖部分有關(guān)，肽聚糖遇到巨噬細(xì)胞和樹(shù)突細(xì)胞后可以導(dǎo)致Th1細(xì)胞進(jìn)一步活化，并釋放出大量標(biāo)志性的保護(hù)性細(xì)胞因子IFN-γ，TNF-α和IL-2[40]。另外，M.vaccae也可以誘導(dǎo)產(chǎn)生調(diào)節(jié)性T細(xì)胞并產(chǎn)生IL-10，增強(qiáng)CD4+T細(xì)胞的記憶，引起持續(xù)性小幅度的IL-10反應(yīng)增加，通過(guò)促進(jìn)結(jié)核早期免疫應(yīng)答，進(jìn)而有效預(yù)防結(jié)核分枝桿菌的潛伏性感染和復(fù)發(fā)[41]。

印度支原體(M.indicuspranii，MIP)是由印度開(kāi)發(fā)的一種非致病性細(xì)菌，已獲得印度藥物監(jiān)管機(jī)構(gòu)、中央藥物標(biāo)準(zhǔn)控制組織和美國(guó)食品藥品管理局批準(zhǔn)[42]。目前正在進(jìn)行Ⅲ期臨床試驗(yàn)。結(jié)核分枝桿菌與MIP有大量相同的B細(xì)胞和T細(xì)胞表位[43]。 結(jié)核分枝桿菌感染后，MIP可協(xié)同刺激APC細(xì)胞和T細(xì)胞活化，產(chǎn)生大量IL-2和IFN-γ，提高Th1的保護(hù)性反應(yīng)并降低體內(nèi)結(jié)核桿菌生長(zhǎng)[44-45]。機(jī)體CD4+T和CD8+T細(xì)胞亞群均產(chǎn)生標(biāo)志性的保護(hù)性細(xì)胞因子IFN-γ、TNF-α和IL-2。這種蛋白質(zhì)還增強(qiáng)了CD4+T細(xì)胞的記憶，在感染過(guò)程中可以作為第一道防線[46]。接種疫苗后，MIP誘導(dǎo)的Th1型細(xì)胞能有效地將保護(hù)性免疫轉(zhuǎn)移到被結(jié)核分枝桿菌感染的患者肺部周圍，增強(qiáng)了肺局部記憶反應(yīng)能力，此舉可以有效減輕肺部感染的程度[47-48]。MIP誘導(dǎo)脾細(xì)胞和淋巴結(jié)細(xì)胞中TNF-α、IL-12和IFN-γ的分泌顯著增加。激活了處于免疫抑制狀態(tài)的巨噬細(xì)胞和樹(shù)突狀細(xì)胞[49]。MIP作為巨噬細(xì)胞一種有效的自噬誘導(dǎo)因子,通過(guò)誘導(dǎo)MTB感染巨噬細(xì)胞自噬促進(jìn)巨噬細(xì)胞吞噬溶酶體融合，從而增強(qiáng)了感染巨噬細(xì)胞對(duì)結(jié)核分枝桿菌的清除，隨后，MIP通過(guò)自噬促進(jìn)含結(jié)核分枝桿菌吞噬體的成熟，進(jìn)一步增強(qiáng)了機(jī)體內(nèi)對(duì)感染巨噬細(xì)胞的清除作用以對(duì)抗感染。值得注意的是，在這過(guò)程中，MIP感染的巨噬細(xì)胞維持總自噬通量[50-51]。在免疫治療早期，MIP組中的CD8+T細(xì)胞更多，并且可以觀察到較高比例的活化T細(xì)胞，此外，肉芽腫細(xì)胞內(nèi)可以發(fā)現(xiàn)更高比例的CD4+T細(xì)胞，這可以形成大的中央壞死核心[43]。后期，MIP主動(dòng)殺死細(xì)菌的作用導(dǎo)致TNF-α和IL-12表達(dá)水平增加，再次給予MIP后IL-2的高表達(dá)可能是CCL5表達(dá)增加的原因，并且CCL5高表達(dá)可能增強(qiáng)感染部位的T細(xì)胞募集[47]。

RUTI疫苗是目前臨床上為數(shù)不多的候選疫苗之一，作為一種治療性結(jié)核病疫苗。正在進(jìn)行IIa期臨床試驗(yàn)。該疫苗由純化的結(jié)核分枝桿菌(MTB)細(xì)胞片段和脂質(zhì)體細(xì)胞片段組成[52]。RUTI增加了IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-10、IL-12p40、一氧化氮合酶(iNOS)和調(diào)節(jié)激活正常T細(xì)胞表達(dá)和分泌細(xì)胞因子(RANTES)的mRNA表達(dá)。同時(shí)，RUTI誘導(dǎo)脾臟特異性CD4+和CD8+效應(yīng)T細(xì)胞和IFN分泌細(xì)胞數(shù)量增加以限制結(jié)核分枝桿菌在肺部的傳播，進(jìn)而控制分枝桿菌的生長(zhǎng)[53]。與單用IFN-γ治療相比，RUTI治療導(dǎo)致小鼠骨髓來(lái)源樹(shù)突狀細(xì)胞(BMDC)上所有激活標(biāo)記物的表達(dá)顯著增加。值得注意的是，RUTI處理的骨髓來(lái)源樹(shù)突狀細(xì)胞表面CCR7表達(dá)增加，表明RUTI疫苗可能增加DC的遷移能力[54]。

除上述表達(dá)3種預(yù)防性疫苗外，還有一種由達(dá)特茅斯學(xué)院研發(fā)的DAR-901。它是一種熱滅活的非結(jié)核分枝桿菌疫苗加強(qiáng)劑[1]。它代表了SRL172的一種新的可擴(kuò)展的制造方法，誘導(dǎo)了大量較為長(zhǎng)期的對(duì)結(jié)核分枝桿菌溶胞產(chǎn)物的IFN-γ反應(yīng)和對(duì)LAM(脂阿拉伯甘露聚糖)的抗體反應(yīng)[55]。其中Th1 應(yīng)答占主導(dǎo)地位，大多數(shù)應(yīng)答細(xì)胞均表現(xiàn)出多功能效應(yīng)記憶表型。DAR-901誘導(dǎo)低頻的抗原特異性(IFN-γ+、TNF-α+、IL-2+)多功能/雙功能CD4+T細(xì)胞，未誘導(dǎo)大量或持續(xù)的 Th17/Th22 細(xì)胞因子反應(yīng)，但對(duì) MTB裂解物的應(yīng)答頻率較高[56]，在引發(fā)IFN-γ反應(yīng)方面比抗體反應(yīng)更有效，且當(dāng)作為 BCG 致敏動(dòng)物的加強(qiáng)疫苗接種時(shí)，與同源 BCG 加強(qiáng)疫苗相比，對(duì)氣溶膠肺結(jié)核的機(jī)體保護(hù)性得到了增強(qiáng)[57]。

4 病毒載體疫苗

AdAg85A是一種可以表達(dá)免疫顯性MTB抗原Ag85A與腺病毒的重組疫苗，通過(guò)黏膜免疫增強(qiáng)的保護(hù)作用是黏膜給藥產(chǎn)生MTB抗原特異性T細(xì)胞，足夠的抗原特異性T細(xì)胞募集到氣道腔中。雖然氣道給藥可以將功能強(qiáng)大的T細(xì)胞募集到氣道腔并恢復(fù)免疫保護(hù)，但這些細(xì)胞，特別是CD8+T細(xì)胞及相關(guān)保護(hù)作用只能在有限的時(shí)間內(nèi)持續(xù)存在于氣道管腔內(nèi)。有趣的是，抗原特異性CD4+T細(xì)胞通過(guò)持續(xù)時(shí)間的急性炎癥進(jìn)入氣道腔，與CD8+T細(xì)胞對(duì)應(yīng)物不同，表明氣道腔CD8+T細(xì)胞具有重要的保護(hù)作用，CD4+T和CD8+T細(xì)胞可能具有不同的機(jī)制[58]。Ad5Ag85A是以5型腺病毒(Ad5)為載體與結(jié)核桿菌特異性抗原Ag85A進(jìn)行重組的一種疫苗。在小型動(dòng)物模型中進(jìn)行的研究表明，用Ad5構(gòu)建體加強(qiáng)免疫后，可以將免疫反應(yīng)范圍擴(kuò)大到包括Ag85A以外的分枝桿菌抗原(例如Rv0288)，以增強(qiáng)機(jī)體對(duì)結(jié)核病的抵抗作用[59]。有研究結(jié)果表明，用Ad5-85A增強(qiáng) BCG誘導(dǎo)的保護(hù)作用與Ag85A特異性 CD4+T細(xì)胞的頻率增加有關(guān)，但是沒(méi)有更高的親和力，而且用Ad5-85A增強(qiáng)BCG可使抗原決定簇?cái)U(kuò)散降至最低[60]。另有研究稱加強(qiáng)接種后機(jī)體獲得的 Ag85A 特異性 CD4+T 細(xì)胞系差異并不明顯。然而，與病毒加強(qiáng)之前獲得的 CD4+T 細(xì)胞系相比，加強(qiáng)后機(jī)體獲得的Ag85A 特異性 CD4+T 細(xì)胞系可分泌更多的具有抗炎特性的免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞因子IL-10[61]。但是Ag85A的表達(dá)僅限于感染的早期階段，后期數(shù)量變少[61]。ChAdOx185A-MVA85A疫苗，其中ChAdOx185A是一種猿腺病毒，MVA85A是一種重組痘病毒，它們均表達(dá)Ag85A。牛津大學(xué)的研究表明：黑猩猩身上進(jìn)行鼻內(nèi)接種的ChAdOx185A可以促進(jìn)肺中誘導(dǎo)分泌 IFN-γ的 Ag85A 特異性 CD8+T 細(xì)胞頻率顯著升高，TNF-α和 IL-17 的應(yīng)答率更高，在脾臟中，ChAdOx185A誘導(dǎo)全身性IFN-γ，TNF-α和IL-2的CD8+T細(xì)胞。皮內(nèi)注射MVA85A后，肺和脾臟CD4+T細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子TNF-α和IL-2的分泌水平顯著增高，但不會(huì)增加IFN-γ的應(yīng)答且CD4+T細(xì)胞應(yīng)答不強(qiáng)烈。可在接種 BCG 的健康成人中使用 MVA85A 作為初免-加強(qiáng)治療的方法[62]。IL-2，IL-17，Ag85A特異性IgG反應(yīng)也由ChAdOx185A誘導(dǎo)并由MVA85A增強(qiáng)。據(jù)牛津大學(xué)的另一份研究表明在成人身上進(jìn)行ChAdOx185A和MVA85A疫苗接種后會(huì)產(chǎn)生大量的Ag85A特異性(IFN-γ+、TNF-α+)CD8+T細(xì)胞?？深A(yù)防和降低結(jié)核病的風(fēng)險(xiǎn)[63]。

以上3種腺病毒只能較為有效的表達(dá)一種特異性T細(xì)胞免疫，目前有一種正在進(jìn)行對(duì)于潛伏性肺結(jié)核患者Ⅱa期臨床試驗(yàn)[1，64]弱復(fù)制缺陷型流感病毒載體的黏膜載體疫苗，可有效表達(dá)兩種特異性T細(xì)胞免疫。TB/FLU-04L作為嬰兒、青少年的預(yù)防性增強(qiáng)疫苗,表達(dá)抗原Ag85A和ESAT-6。Ag85A參與脂質(zhì)的積累和儲(chǔ)存，在MTB休眠中具有潛在的重要作用[65]。注射疫苗后，病毒載體會(huì)引導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生強(qiáng)烈的Th1型細(xì)胞免疫應(yīng)答，從而使(IFN-γ+、IL-17+)CD4+和(IFN-γ+、IL-17+)CD8+T細(xì)胞數(shù)量明顯升高，進(jìn)而增強(qiáng)機(jī)體的抗結(jié)核能力[66]。

5 探索新的免疫機(jī)制

通過(guò)漿細(xì)胞樣樹(shù)突狀細(xì)胞中的toll樣受體9(TLR-9)信號(hào)，合成的CpG寡聚體Oligo-B可以誘導(dǎo)產(chǎn)生Th17細(xì)胞因子，已知其在細(xì)胞因子中起重要作用。這些研究表明，CpG寡聚體是IFN-γ和IL-17的良好誘導(dǎo)物并且可以重新激活機(jī)體產(chǎn)生獲得性免疫。因此，Oligo-B可以通過(guò)IFN-γ和IL-17來(lái)促進(jìn)產(chǎn)生記憶T細(xì)胞。表明Oligo-B加強(qiáng)可以恢復(fù)CD4+中TCM的數(shù)量，并重新激活以前接種BCG的免疫衰老狀態(tài)小鼠中對(duì)MTB感染的保護(hù)性免疫，但I(xiàn)FN-γ的產(chǎn)生需要超老齡小鼠中Oligo-B的3次增強(qiáng)才能重新激活[67]。

納米粒子(NPs)通過(guò)遞送多種增強(qiáng)免疫調(diào)節(jié)化合物(IMC)的作用，使細(xì)胞靶向，改善抗原轉(zhuǎn)染，增強(qiáng)復(fù)合性和提供協(xié)同作用的機(jī)會(huì)[68]。表明基于NP的免疫治療，對(duì)于新的治療和疫苗接種系統(tǒng)具有很大的前景。

IL-12和IL-10，前者是一種關(guān)鍵的Th1極化細(xì)胞因子，后者是Th1免疫中有效的免疫調(diào)節(jié)分子[69-70]。有報(bào)道稱，發(fā)現(xiàn)人IL-18的產(chǎn)生顯著增強(qiáng)了BCG誘導(dǎo)DC產(chǎn)生IL-10的能力，這意味著人IL-18可能促進(jìn)了DC與Th1細(xì)胞群之間的相關(guān)性[71]。rBCGhIL-18不能通過(guò)DC誘導(dǎo)IL-12，但是能誘導(dǎo)顯著更多的IL-10(與非重組BCG或PPD相比)。IL-10的主要來(lái)源是同屬常規(guī)樹(shù)突狀細(xì)胞(conventional dendritic cells，cDCs)亞群,CD103+cDCs與CD11b+cDCs。在結(jié)核分枝桿菌感染后，CD103+cDCs通過(guò)產(chǎn)生免疫抑制性細(xì)胞因子IL-10直接調(diào)節(jié)非常需要CD11b+cDCs介導(dǎo)的Th1免疫激活反應(yīng)。由此提供一種新的免疫抑制機(jī)制，該機(jī)制由特定的cDCs亞群介導(dǎo)，并且在引流淋巴結(jié)(dLN)中起作用，這對(duì)于肺結(jié)核分枝桿菌感染后肺部整體延遲的Th1免疫有極大幫助[72]。

CD26又稱二肽酶Ⅳ，是在大鼠腎臟上皮細(xì)胞內(nèi)發(fā)現(xiàn)的一種高度糖基化的Ⅱ型跨膜糖蛋白，CD26可通過(guò)顆粒酶B(granzyme B)、TNF-α以及IFN-γ介導(dǎo)人類CD8+T細(xì)胞活化，發(fā)揮CD8+T細(xì)胞毒性作用。此外，CD26介導(dǎo)的CD8+T細(xì)胞共刺激作用比CD28介導(dǎo)的CD8+T細(xì)胞共刺激作用更為強(qiáng)烈[73]。DPP4(CD26)可以負(fù)調(diào)節(jié)CXCR3介導(dǎo)的Th1細(xì)胞歸巢，使其到達(dá)結(jié)核分枝桿菌感染部位，為宿主導(dǎo)向治療提供了一個(gè)潛在的新機(jī)會(huì)[74]。

一種通常在飲用水中的物種，被發(fā)現(xiàn)后經(jīng)過(guò)分離測(cè)序，它被認(rèn)為是一種新種，稱為非致病性定殖曼氏梭狀芽胞桿菌(M.manresensis)[75]?？诜委熌軌蛘T導(dǎo)結(jié)核菌素純蛋白衍化物(PPD)特異性適應(yīng)性調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Tregs)反應(yīng)(包括記憶細(xì)胞)[76],并在治療兩周產(chǎn)生IL-10以及與弱于PPD特異性整體免疫應(yīng)答刺激相聯(lián)系起來(lái)，從而增加了IL-6 ，TNF和IFN-γ的產(chǎn)生。但在肺部，這種治療主要減少促炎細(xì)胞因子TNF，IFN-γ，IL-6和IL-17的產(chǎn)生，從而降低了細(xì)菌負(fù)荷和肉芽腫浸潤(rùn)，以達(dá)到降低人類從潛在感染發(fā)展為結(jié)核病的風(fēng)險(xiǎn)[77]。最新數(shù)據(jù)顯示2015 / EU熱滅活的曼氏分支桿菌作為新型食品(NF)在建議的使用條件下是安全的[78]。

6 結(jié) 語(yǔ)

近年來(lái)候選疫苗抗結(jié)核免疫機(jī)制的研究重點(diǎn)多在于如何提高IFN-γ，如何提高CD4+T細(xì)胞數(shù)量。但是有研究結(jié)果表明，刺激誘導(dǎo)更高水平的CD4+T細(xì)胞因子可能并不是候選抗結(jié)核疫苗加強(qiáng)劑的關(guān)鍵或先決條件[56]，外周血中疫苗特異性IFN-γ應(yīng)答的強(qiáng)度與保護(hù)之間并沒(méi)有相關(guān)性[79]。但是對(duì)于其他的免疫機(jī)制我們還所知甚少，需要我們進(jìn)行不斷的探索。美國(guó)俄勒岡健康與科學(xué)大學(xué)的 David Lewinsohn提出無(wú)限制供體T細(xì)胞(DURT)具有幾乎全種分布不變的T細(xì)胞抗原受體(TCR)，可以產(chǎn)生非常規(guī)的免疫反應(yīng)。這種免疫表達(dá)可以消除人體差異，也可避免病原體通過(guò)改變抗原而逃逸[80]。目前已有研究證明此方案具有一定的保護(hù)作用[81]。Sara Suliman等人證明了先天性炎性細(xì)胞因子激活血液粘膜相關(guān)不變T細(xì)胞(MAIT)是針對(duì)結(jié)核的全細(xì)胞疫苗或分枝桿菌體外刺激對(duì)疫苗反應(yīng)的主要機(jī)制。MAIT細(xì)胞是MHC相關(guān)蛋白1(MR1)限制的T細(xì)胞，對(duì)結(jié)核分枝桿菌有反應(yīng)，而且尚未被開(kāi)發(fā)為潛在的結(jié)核疫苗靶標(biāo)[82]。據(jù)Perdomo C.等人的研究表明粘膜BCG接種可以誘導(dǎo)肺中產(chǎn)生TRM為肺結(jié)核提供保護(hù)[83]，另外Bull NC等人發(fā)現(xiàn)這與BCG誘導(dǎo)的肺組織駐留CD4+T細(xì)胞的新型種群相關(guān)[84]。也有學(xué)者稱免疫機(jī)制也可不局限在T細(xì)胞上。Maziar Divangahi(加拿大麥吉爾大學(xué))討論了如何通過(guò)BCG誘導(dǎo)的造血干細(xì)胞(HSC)重新編程的“免疫訓(xùn)練”來(lái)達(dá)到對(duì)結(jié)核病疫苗的先天免疫[85]。希望通過(guò)本篇綜述了解現(xiàn)在正在進(jìn)行臨床試驗(yàn)疫苗的抗結(jié)核免疫機(jī)制，熟悉一些疫苗設(shè)計(jì)的新思路，供其參考。

利益沖突：無(wú)