林啟凰,張 娜,葉廷秀,陳仲巍,張 崗
(廈門(mén)醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系,福建 廈門(mén) 361000)
天胡荽Hydrocotyle sibthorpioidesLam.[H.rotundifoliaRoxb.]為傘形科天胡荽屬植物,廣泛分布于安徽、福建、臺(tái)灣、云南、貴州、廣東、廣西等地,其全草入藥,具有清熱利濕、解毒消腫等功效[1],是主流品種之一[2],臨床上常用于治療膽囊炎、肝炎病毒感染、帶狀皰疹、牛皮癬等疾?。?]?,F(xiàn)代研究表明,天胡荽含有揮發(fā)油[3]、三萜皂苷[4-5]、黃酮[6]及其他酚類化合物[7],提取物具有 抗HBsAg[8]、抗腫瘤[9]、免疫調(diào)節(jié)[9]、抗菌[10]等作用。為了繼續(xù)挖掘該植物的潛在價(jià)值,課題組對(duì)其進(jìn)行了系統(tǒng)的化學(xué)成分研究,從水提物中分離、純化并鑒定得到7 種化合物,其中,化合物7 首次從傘形科植物中分離得到,化合物5 首次從天胡荽屬植物中分離得到,化合物1~2 首次從該植物中分離得到。
Advance AV-600 核磁共振波譜儀(瑞士Bruker 公司);Agilent 1260 高效液相色譜儀(美國(guó)Agilent 公司);UV-1800 紫外分光光度計(jì)(日本島津公司);Nexera UHPLC LC-30A 超高效液相色譜儀、LC-MS 8050 三重四極桿質(zhì)譜儀聯(lián)用系統(tǒng)(日本島津公司);超純水機(jī)(美國(guó)Thermo 公司)。
Sephadex LH-20 填料(美國(guó)GE 公司);反相ODS 色譜填料、Semi-HPLC 色譜柱(日本YMC 公司);AB-8 大孔吸附樹(shù)脂(陜西博暉生化科技有限公司);柱色譜用硅膠(200~300 目)、硅膠GF254薄層板(青島海洋化工廠);柱色譜用聚酰胺(30~60 目)、薄層層析用聚酰胺薄膜(浙江臺(tái)州市陸橋四甲生化塑料)。色譜用甲醇、乙腈(美國(guó)Thermo Fisher 公司)。
藥材于2016 年6 月采自福建廈門(mén),經(jīng)廈門(mén)醫(yī)學(xué)院鮑紅娟副教授鑒定為傘形科植物天胡荽Hydrocotyle sibthorpioidesLam.[H.rotundifoliaRoxb.],標(biāo)本保存于廈門(mén)醫(yī)學(xué)院藥物分析教研室,編號(hào)為T(mén)HS-201606。
將天胡荽(2 kg)于60 ℃下干燥后粉碎,分別用8 倍量純化水加熱回流提取2 次,濾過(guò),合并濾液,使之緩緩?fù)ㄟ^(guò)AB-8 大孔樹(shù)脂,待化合物完全吸附后,先用2 倍柱體積的純化水洗柱,棄去水洗脫液,再用3 倍柱體積的75%乙醇洗脫,洗脫液于40 ℃下減壓濃縮,將濃縮液上樣于裝有30~60目聚酰胺(500 g)的色譜柱中,以乙醇-水系統(tǒng)梯度洗脫,聚酰胺薄層色譜檢視,合并相同組分,回收溶劑,將樣品分為6 個(gè)洗脫組分F1~F6。其中F6(1.2 g)組分通過(guò)硅膠柱和Sephadex LH-20 凝膠柱,得化合物6(7 mg);通過(guò)反復(fù)硅膠柱和Sephadex LH-20 凝膠柱純化F5(6.5 g)組分,得化合物3(3.7 mg)、4(3.5 mg);F4(18.2 g)組分上樣于反相ODS 柱后,由甲醇-水系統(tǒng)梯度洗脫,聚酰胺薄層檢視,合并相同組分,回收溶劑,又將樣品分為6 個(gè)洗脫組分(F4-1~F4-6),通過(guò)Sephadex LH-20 凝膠柱純化F4-3 組分,最后經(jīng)Semi-HPLC 制備,得化合物5(3.5 mg);F4-4 經(jīng)Semi-HPLC 制備,得化合物7(4.2 mg);經(jīng)反復(fù)硅膠柱和Sephadex LH-20 凝膠柱純化F3(1.5 g)組分,得化合物2(2.4 mg);經(jīng)反復(fù)Sephadex LH-20 凝膠柱純化F2(8.5 g)組分,得化合物1(2.5 mg)。
化合物1:白色粉末,三氯化鐵反應(yīng)顯陽(yáng)性,易溶于甲醇。分子式C7H6O4,ESI-MSm/z:153.0[M-H]-。1H-NMR(CD3OD,600 MHz)δ:7.45(1H,dd,J=8.0,1.8 Hz,H-6);7.21(1H,d,J=1.8 Hz,H-2),6.76(1H,d,J=8.0 Hz,H-5);13C-NMR(CD3OD,125 MHz)δ:122.5(C-1),117.2(C-2),142.7(C-3),151.8(C-4),114.0(C-5),122.7(C-6),167.7(C-7)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]基本一致,故鑒定為原兒茶酸。
化合物2:淡黃色粉末,三氯化鐵反應(yīng)顯陽(yáng)性,易溶于甲醇。分子式C9H8O3,ESI-MSm/z:163.1[M-H]-。1H-NMR(600 MHz,DMSO-d6)δ:7.52(1H,d,J=16.0 Hz,H-7),7.46(2H,d,J=8.0 Hz,H-2,6),6.79(2H,d,J=8.0 Hz,H-3,5),6.30(1H,d,J=16.0 Hz,H-8);13C-NMR(125 MHz,DMSO-d6)δ:127.7(C-1),130.5(C-2,6),116.1(C-3,5),159.9(C-4),146.3(C-7),115.5(C-8),174.5(C-9)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12]基本一致,故鑒定為對(duì)羥基桂皮酸。
化合物3:黃色粉末,鹽酸-鎂粉反應(yīng)顯陽(yáng)性。分子式C15H10O5,UVλmax(nm)為269,334,ESI-MSm/z:269.1[M-H]-。1H-NMR(600 MHz,DMSO-d6)δ:7.85(2H,d,J=7.8 Hz,H-2′,6′),6.90(2H,d,J=7.8 Hz,H-3′,5′),6.18(1H,d,J=1.8 Hz,H-6),6.55(1H,d,J=1.8 Hz,H-8),6.75(1H,s,H-3);13C-NMR(DMSO-d6,125 MHz)δ:94.2(C-8),99.0(C-6),102.2(C-3),103.4(C-10),115.8(C-3′,5′),120.5(C-1′),128.1(C-2′,6′),157.0(C-9),161.2(C-4′),161.7(C-5),163.5(C-7),163.9(C-2),178.1(C-4)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[13]基本一致,故鑒定為芹菜素。
化合物4:黃色針晶,鹽酸-鎂粉反應(yīng)顯陽(yáng)性。分子式C15H10O6,UVλmax(nm)為268,364,ESI-MSm/z:285.1[M-H]-。1H-NMR(600 MHz,DMSO-d6)δ:6.19(1H,d,J=1.8 Hz,H-6),6.40(1H,d,J=1.8 Hz,H-8),8.06(2H,d,J=8 Hz,H-2′,6′),6.92(2H,d,J=8 Hz,H-3′,5′-H);13C-NMR(DMSO-d6,125 MHz)δ:148.4(C-2),137.1(C-3),177.5(C-4),161.7(C-5),99.4(C-6),165.2(C-7),94.5(C-8),156.7(C-9),104.6(C-10),122.3(C-1′),130.8(C-2′,6′),115.8(C-3′,5′),160.6(C-4′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[14]基本一致,故鑒定為山柰酚。
化合物5:黃色粉末,鹽酸-鎂粉反應(yīng)顯陽(yáng)性。分子式C27H30O14,UVλmax(nm)為265,345,ESI-MSm/z:577.3[M-H]-。1H-NMR(600 MHz,CD3OD)δ:0.93(3H,d,J=7.2 Hz,3-O-rha-CH3),1.26(3H,d,J=7.2 Hz,7-O-rha-CH3),5.40(1H,3-O-rha-1-H),5.56(1H,7-O-rha-1-H),6.45(1H,d,J=1.8 Hz,H-6),6.71(1H,d,J=2.0 Hz,H-8),6.94(2H,d,J=8.4 Hz,H-3′,H-5′),7.79(2H,d,J=8.4 Hz,H-2′,H-6′);13C-NMR(125 MHz,CD3OD)δ:157.9(C-2),136.3(C-3),179.6(C-4),161.6(C-5),99.6(C-6),163.3(C-7),95.4(C-8),159.6(C-9),107.3(C-10),122.2(C-1′),131.8(C-2′),116.4(C-3′),161.6(C-4′),116.4(C-5′),131.8(C-6′),100.3(3-O-rha-C-1),103.3(7-O-rha-C-1),72.9~71.1(8 個(gè)碳信號(hào),3-O-rha-C-2~C-5,7-O-rha-C-2~C-5),17.4(3-O-rha-C-6),17.8(7-O-rha-C-6)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[15]基本一致,故鑒定為山柰苷。
化合物6:黃色粉末,鹽酸-鎂粉反應(yīng)顯陽(yáng)性。分子式C15H10O7,UVλmax(nm)為249,372;ESI-MSm/z:301.1[M-H]-。1H-NMR(600 MHz,DMSO-d6)δ:7.70(1H,d,J=1.8 Hz,H-6′),7.60(1H,dd,J=8.0,1.8 Hz,H-2′),6.85(1H,d,J=8.0 Hz,H-5′),6.35(1H,d,J=1.8 Hz,H-8),6.15(1H,d,J=1.8 Hz,H-6);13CNMR(DMSO-d6,125 MHz)δ:147.8(C-2),137.0(C-3),177.1(C-4),162.3(C-5),99.0(C-6),165.4(C-7),94.2(C-8),58.0(C-9),104.5(C-10),123.9(C-1′),115.5(C-2′),145.6(C-3′),148.6(C-4′),116.0(C-5′),120.8(C-6′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[14]基本一致,故鑒定為槲皮素。
化合物7:黃色粉末,聚酰胺薄膜上噴三氯化鋁試劑后紫外下顯黃綠色熒光。分子式C20H18O8,UVλmax(nm)為235,390[sh],326,ESI-MSm/z:385.2[M-H]-。1H-NMR(DMSO-d6,600 MHz)δ:7.47(1H,d,J=15.6 Hz,H-7),7.39(1H,d,J=1.8 Hz,H-2),7.21(1H,s,H-7′),7.09(1H,dd,J=1.8,7.8 Hz,H-6),6.65(1H,d,J=7.8 Hz,H-5),6.47(1H,d,J=15.6 Hz,H-8),7.34(1H,d,J=1.8 Hz,H-2′),6.72(1H,d,J=7.8 Hz,H-5′),7.05(1H,dd,J=1.8,7.8 Hz,H-6′);13C-NMR(DMSO-d6,125 MHz)δ:128.1(C-1),111.2(C-2),148.5(C-3),143.7(C-4),113.3(C-5),122.0(C-6),147.9(C-7),117.4(C-8),168.0(C-9),55.8(3-OCH3),124.5(C-1′),112.8(C-2′),147.3(C-3′),140.1(C-4′),115.4(C-5′),123.9(C-6′),147.8(C-7′),140.2(C-8′),164.8(C-9),55.8(3′-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[16]基本一致,故鑒定為8-O-4-dehydrodiferulic acid。
本研究從采自福建廈門(mén)的天胡荽水提物中分離得到7 個(gè)化合物,包括4 個(gè)黃酮類(3~6)、2 個(gè)苯丙素類(2、7)、1 個(gè)小分子酚酸類(1)?;衔? 為首次從傘形科植物中分離得到,化合物5 為首次從該屬植物中分離得到,化合物1~2 為首次從該植物中分離得到。
大量研究表明,本實(shí)驗(yàn)所得化合物具有多種生理活性。原兒茶酸(1)具有較好的抗氧化作用,對(duì)MPP+誘導(dǎo)的中腦多巴胺能神經(jīng)元損傷具有保護(hù)作用[17],對(duì)阪崎克羅諾腸桿菌有抑制效果[18];對(duì)羥基桂皮酸(2)具有一定的抗菌[19]、抗炎[20]活性;芹菜素(3)、山柰酚(4)、槲皮素(6)為常見(jiàn)的黃酮類化合物,均具有不同程度的抗腫瘤、抗炎、抗菌、抗氧化、心腦血管保護(hù)等作用[21-23];山柰苷(5)具有較好的降血糖活性[24],也顯示了抗炎[25]作用,對(duì)于揭示天胡荽清熱利濕、解毒消腫等功效的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)具有一定意義。同時(shí),上述結(jié)果為天胡荽的臨床應(yīng)用提供依據(jù)。