顏雪珍,屈強強,黃麗萍,楊 崢

陜西省中醫(yī)醫(yī)院針灸科(西安 710003)

痤瘡是臨床上常見的一種發(fā)生于皮脂腺、毛囊等部位的慢性炎癥性皮膚病，常分布在面部、上胸背部等皮脂腺分泌旺盛的部位，尤其好發(fā)于青春期男女[1]。臨床癥狀常以面部粉刺、炎性丘疹、膿皰、結(jié)節(jié)、囊腫、瘢痕及色素沉著等多形性皮損為主[2]。有研究顯示，痤瘡的發(fā)病率高達85%，盡管不會危及生命，但給患者心理和生活帶來極大的影響[3]。因此痤瘡的發(fā)病機制以及治療已經(jīng)成為當今社會研究的一大熱門。筆者采用自血穴位注射治療尋常型痤瘡患者30例，并選取20例健康志愿者作為對照。同時對健康志愿者及患者治療前后血清白細胞介素-8(IL-8)和腫瘤壞死因子(TNF-α)水平進行觀察，以探究其作用機制。

資料與方法

1 一般資料 選擇2018年8月至2018年12月在陜西省中醫(yī)醫(yī)院針灸科就診的30例尋常型痤瘡患者做為治療組，同期在本院招募健康志愿者20例作為對照組，治療組患者中男性5例，女性25例，年齡20～45歲，平均年齡為(26.40±5.76)歲；對照組男性4例，女性16例，年齡20～32歲，平均年齡為(25.85±4.22)歲。兩組一般資料的比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。本實驗經(jīng)陜西省中醫(yī)院倫理委員會審核通過[倫理批件號：(2017)倫理第(9)號]，研究對象均簽署知情同意書。

診斷標準：參照中醫(yī)藥科技出版社《中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則》與趙辨著《中國臨床皮膚病學(xué)》中關(guān)于痤瘡的診斷及分級標準[4-5]。尋常痤瘡診斷標準：好發(fā)于青少年，皮損主要位于顏面部，其次是胸背部，多對稱分布，皮損多表現(xiàn)為炎癥性丘疹、黑頭、白頭粉刺、膿皰等特點，嚴重者可出現(xiàn)結(jié)節(jié)、囊腫和瘢痕，常伴皮脂溢出。痤瘡的嚴重程度分級以Pillsbury四級改良分級法為依據(jù)。輕度(Ⅰ級):粉刺為主要皮損,可有少量丘疹和膿皰,總病灶數(shù)少于30個。中度(Ⅱ級):有粉刺,并有中等數(shù)量的丘疹和膿皰,總病灶數(shù)在31～50之間。中重度(Ⅲ級):大量丘疹和膿皰,偶見大的炎性皮損,分布廣泛,總病灶數(shù)在51～100之間,結(jié)節(jié)小于3個。重度(Ⅳ級):結(jié)節(jié)/囊腫性或聚合性痤瘡,多數(shù)有疼痛并形成囊腫,病灶數(shù)在100個以上；結(jié)節(jié)/囊腫在3個以上。

病例納入標準：①符合尋常痤瘡的臨床診斷標準，選擇Pillsbury分級中屬Ⅱ級、Ⅲ級、Ⅳ級的患者；②不伴其他各系統(tǒng)的嚴重疾病或精神?。虎勰挲g18～45歲；④簽署知情同意者。排除標準：①孕婦及哺乳期的婦女；②壞死型痤瘡、職業(yè)型痤瘡、及聚合型痤瘡；③就診前1個月系統(tǒng)使用過激素類、或其他影響免疫因素的藥物；④合并其他系統(tǒng)嚴重疾病，精神病患者；⑤有肝炎、艾滋病等傳染病史者；⑥不符合納入標準的其它病例。

2 治療方法

2.1 對照組：不予任何干預(yù)措施。

2.2 治療組：采用自血穴位注射療法。選穴：雙側(cè)曲池、血海、足三里。定位：參照中華人民共和國國家標準GB/T 12346-2006《腧穴名稱與定位》。

操作方法：患者在Ⅲ級醫(yī)療環(huán)境中(清潔治療室)接受治療，取仰臥位或坐位，暴露施術(shù)部位，肘正中靜脈所在部位消毒后，使用一次性10 ml無菌注射器抽取血液約6 ml，雙側(cè)曲池、血海、足三里嚴格消毒，注射針頭刺入穴位約0.5～0.8寸,得氣后，每個穴位注射1 ml，出針后輕微按壓片刻。2次/周，共治療4周。

3 觀察指標

3.1 臨床癥狀評分：根據(jù)皮損積分為標準，皮損積分,即皮膚出油情況、皮損程度、數(shù)量、顏色、腫痛5項積分之和。計分標準：皮膚出油情況：干性(0分)，中性(2分)，混合性(4分)，油性(6分)；痤瘡皮損程度：正常(0分)：治療前無或治療后消失，輕度(2分)：粉刺為主，少量丘疹和膿皰，中度(4分)：粉刺，中等數(shù)量丘疹和膿皰，偶見結(jié)節(jié)，重度(6分)粉刺、丘疹、膿皰并見，可有結(jié)節(jié)和囊腫；痤瘡皮損數(shù)量:正常：治療前無或治療后消失(0分)，輕度(2分)：總病灶數(shù)少于30個，中度(4分)：總病灶數(shù)31～50個，重度(6分)：總病灶數(shù)51～100個，結(jié)節(jié)/囊腫小于3個；痤瘡皮損顏色:正常(0分)：治療前無或治療后消失，輕度(2分)：粉刺尖端色白或黑，中度(4分)：粉刺尖端色黑，丘疹色微紅，重度(6分)：丘疹色紅掀熱，膿皰黃綠色；痤瘡皮損腫痛:正常：治療前無或治療后消失(0分)，輕度(2分)：輕微腫脹疼痛，中度(4分)：局部腫脹疼痛較明顯，無或略有破損，重度(6分)：腫硬疼痛明顯，明顯破潰，流血性膿液。

3.2 血清白細胞介素-8(IL-8)和腫瘤壞死因子(TNF-α)含量檢測：抽取治療組患者干預(yù)前及干預(yù)4周后、對照組靜脈血各3 ml置于干燥管中，低速離心機離心5min(1500轉(zhuǎn)/min)，吸取上層血清置于消毒試管，保存在-20℃冰箱中備用。主要儀器為美國BioTek的SYNERGY2多功能酶標儀、湖南湘儀實驗室儀器開發(fā)有限公司的TDZ5-WS低速多管離心機、上海利聞科學(xué)儀器有限公司的渦旋震蕩儀，達優(yōu)IL-8 ELISA試劑盒及TNF-α ELISA試劑盒均購自于深圳達科為生物工程有限公司。主要檢測步驟：①從冰箱中取出ELISA試劑盒及收集的痤瘡患者血清樣本，室溫解凍后充分混勻；②配制Biotinylated antibody工作液；③配制標準品溶液；④加樣；⑤加檢測抗體；⑥配制洗滌液；⑦配制Streptavidin-HRP工作液；⑧洗板；⑨加酶：每孔加入Streptavidin-HRP工作液100 ul/well。蓋上封板膜，室溫(18℃～25℃)孵育20min。⑩洗板：同步驟⑧。顯色：每孔加入TMB 100 ul，在18～25℃的室溫中避光孵育20min左右，孔內(nèi)顏色變?yōu)樯钏{色為止。終止反應(yīng)：迅速加入Stop solution 100 ul/well，各孔由藍色立即轉(zhuǎn)為黃色。讀板：終止反應(yīng)10 min內(nèi)，立即將檢測樣品酶標板放入BioTek酶標儀中，用檢測波長450 nm讀取各孔樣本OD值。根據(jù)以上步驟分別用IL-8、TNF-α ELISA試劑盒檢測IL-8、TNF-α的OD值。結(jié)果計算根據(jù)實驗配制標準品濃度梯度及檢測的相應(yīng)OD值，以標準品的血清濃度水平為橫坐標，以相應(yīng)標準品OD值為縱坐標，在Curve Expert 1.4上畫出標準曲線，根據(jù)樣本血清OD值，在標準曲線上計算出相應(yīng)血清IL-8和TNF-α的濃度值。

4 療效評定標準 根據(jù)治療前后臨床皮膚損害消退率來評定[3]。臨床痊愈：皮損消退，或僅遺留有色素沉著，癥狀消失，積分值減少≥95%；顯效：皮損大部分消退，癥狀明顯減輕，95%>積分值減少≥70%；有效：皮損部分消退，癥狀改善，70%>積分值減少≥30%；無效；皮損消退不明顯，或臨床癥狀反見加重，積分值減少<30%。痊愈率=痊愈例數(shù)/病例總數(shù)×100%，有效率=(痊愈例數(shù)+顯效例數(shù)+有效例數(shù))/病例總數(shù)×100%。皮膚損害消退率=[(療前皮損積分-療后皮損積分)/療前皮損積分]×100%。

5 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 19.0統(tǒng)計學(xué)軟件。計數(shù)資料結(jié)果采用卡方檢驗。計量資料結(jié)果以均值±標準差表示，數(shù)據(jù)均采用正態(tài)性和方差齊性檢驗，若符合正態(tài)分布或近似正態(tài)分布，采用t檢驗，不符合采用秩和檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié) 果

1 治療組治療前后癥狀評分比較 治療后皮膚出油，皮損程度、數(shù)量、顏色、腫痛及皮損總積分均較治療前減低(P<0.05)，見表1。

表1 治療組治療前后皮損積分比較

注：與干預(yù)前比較，*P<0.05

2 兩組治療前后患者血清IL-8、TNF-α含量比較 治療組干預(yù)前外周血IL-8表達明顯高于對照組(P<0.05)，治療后外周血IL-8的表達較治療前降低(P<0.05)，治療后IL-8 的表達高于對照組(P<0.05)；治療組干預(yù)前外周血TNF-α表達明顯高于對照組(t=-136.86，P=0.000)，治療后外周血TNF-α的表達較治療前降低(P<0.05)，治療后TNF-α的表達高于對照組(P<0.05)。 見表2。

表2 兩組治療前后患者外周血IL-8、TNF-α含量比較(pg/ml)

3 治療組臨床療效 痤瘡患者經(jīng)自血療法治療后，痊愈2例，顯效2例，有效21例，無效5例，總有效率為83.3%。

討 論

痤瘡是臨床上常見的炎癥性皮膚病，無法根治，嚴重影響患者的身心健康[6]。我國人群中痤瘡的發(fā)病率為70%～87%，痤瘡的流行病學(xué)在全球范圍內(nèi)是一致的，據(jù)估計痤瘡會影響全球9.4%的人群，使其成為全球第八大疾病[7]。

大量研究顯示[8]炎癥是痤瘡發(fā)病機制的核心，貫穿于痤瘡發(fā)病的始終。多種因素及多種細胞因子參與了痤瘡的炎癥反應(yīng)，痤瘡丙酸桿菌是引起炎癥反應(yīng)的首要因素[9]。多年來,對痤瘡丙酸桿菌誘導(dǎo)炎癥機制進行了大量研究，Beylot 等[10]發(fā)現(xiàn)，痤瘡丙酸桿菌可被TLR2識別，并通過下游的髓樣分化因子MyD88、IRAK、TRAF6 等信號通路激活TLR2依賴的核因子-κB(Nuclear factor κB，NF-κB)途徑，從而激活單核細胞，釋放TNF-α、IL-1、IL-8、IL-12等炎癥細胞因子，激發(fā)級聯(lián)效應(yīng)，啟動痤瘡免疫炎癥反應(yīng)。研究顯示[11]IL-8為前炎癥細胞因子，對中性粒細胞、嗜堿性粒細胞、T細胞均具有明顯的趨化作用，可釋放溶酶體酶及活性氧，啟動抗菌炎癥反應(yīng)。TNF-α為機體炎癥、免疫反應(yīng)的重要調(diào)節(jié)因子，可使炎癥細胞聚集，激活有絲分裂原活化蛋白激酶，降解膠原纖維[12]。上述炎癥因子主要通過趨化激活中性粒細胞，促進中性粒細胞溶酶體酶活性及吞噬作用，使痤瘡炎癥部位的延性細胞得到補充，從而增加局部炎癥反應(yīng)[13]。

自血療法是一種非特異性刺激的自然療法，是指抽取患者少量肘靜脈血(不加抗凝劑及任何藥物)，立即注入選定穴位的中醫(yī)特色療法。該法已成為皮膚科常用治療手段，痤瘡病更是成為其優(yōu)勢病種[14]。本次研究顯示：痤瘡患者血清中TNF-α、IL-8水平高于健康人，說明炎癥反應(yīng)是痤瘡發(fā)病機制的核心，炎癥反應(yīng)貫穿痤瘡發(fā)病的始終；痤瘡患者經(jīng)自血療法治療后皮損積分較治療前明顯下降，表明自血療法能夠有效改善痤瘡患者的皮損，臨床療效確切；自血療法治療后痤瘡患者血清中TNF-α、IL-8水平較治療前明顯下降并接近健康人水平；證明自血療法能夠有效減輕痤瘡患者的炎癥反應(yīng)，從而使得面部炎癥反應(yīng)得到控制，改善痤瘡皮損狀態(tài)。這與吳瀟雅等[15]人研究的結(jié)果一致。

綜上所述，炎癥是痤瘡發(fā)病機制中重要的組成部分，目前控制痤瘡的炎癥反應(yīng)已經(jīng)成為治療痤瘡的研究熱點。本研究顯示自血療法能夠有效下調(diào)痤瘡患者血清中TNF-α、IL-8水平，提示自血穴位注射療法治療痤瘡的機制之一可能與控制炎癥反應(yīng)有關(guān)，這就為痤瘡患者炎癥反應(yīng)的控制提供一種安全有效的手段。