徐德志， 盧浩誠， 劉善齋， 李柏旭， 張運(yùn)海,4, 劉洪瑜,4*

(1.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，合肥 230036；2.肉牛牦牛產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系亳州綜合試驗(yàn)站，安徽 亳州 236822；3.鳳陽縣大明農(nóng)牧科技發(fā)展有限公司，安徽 鳳陽 233124；4.安徽地方畜禽遺傳資源保護(hù)與生物育種省級實(shí)驗(yàn)室，合肥 230036)

種公牛精液品質(zhì)的優(yōu)劣能夠直接影響到母牛的受胎率、犢牛的生產(chǎn)性能以及牛場的效益。安徽省地方黃牛種質(zhì)資源豐富，皖南牛、大別山牛、皖東牛是我國寶貴的畜禽遺傳資源，在優(yōu)質(zhì)肉牛生產(chǎn)中具有較高的開發(fā)利用價(jià)值。皖南牛主產(chǎn)于安徽省長江以南的地區(qū)[1]，大別山牛產(chǎn)于湖北省大別山西部和安徽省大別山東部[2]，皖東牛主產(chǎn)于安徽江淮分水嶺地區(qū)[3],以這3種牛作為試驗(yàn)材料進(jìn)行種牛精液品質(zhì)的測定，在2017年10月—2018年4月采集種牛精液數(shù)據(jù)。對3種種牛的精液各項(xiàng)數(shù)據(jù)分析，選擇優(yōu)良的種公牛，同時(shí)通過凍精技術(shù)，為實(shí)現(xiàn)高效生產(chǎn)滿足市場需求，并為珍貴畜禽遺傳資源保護(hù)提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

試驗(yàn)選用安徽天達(dá)集團(tuán)正常采精的青壯年皖東牛、大別山牛、皖南牛各3頭，共計(jì)9頭。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)采用單因素試驗(yàn)方案，公牛飼養(yǎng)環(huán)境條件相同。參試公牛的飼喂精料配方：玉米62%，豆粕14%，菜籽粕8%，麥麩12%，4%種牛預(yù)混料4%。按照公牛每日每100 kg體重飼喂青干草1.2 kg，混合精料0.5 kg。試驗(yàn)期共90 d，公牛每周二和周五采精。

1.3 試驗(yàn)試劑與設(shè)備

牛用假陰道、集精杯(假陰道及集精杯等器材，在采精前必須充分洗滌，玻璃器材應(yīng)高溫干燥消毒，采精時(shí)調(diào)節(jié)假陰道內(nèi)壁的溫度至39 ℃左右)、假臺牛、恒溫水浴加熱箱、離心機(jī)、比色卡、精子質(zhì)量分析儀、天平以及AndroMed精液冷凍稀釋液、精液冷凍儀、細(xì)管自動(dòng)灌裝和封裝機(jī)、卵黃、液氮、液氮罐等制作凍精和冷凍冷藏的試劑與設(shè)備。

1.4 精液冷凍

將采集到的合格原精，測定其精液稀釋量，用冷凍稀釋液進(jìn)行稀釋，并置于5 ℃平衡3 h，在細(xì)管自動(dòng)灌裝和封裝機(jī)中用細(xì)管分裝，用精液冷凍儀冷凍后檢測精子活力，活力達(dá)標(biāo)的細(xì)管進(jìn)行加工包裝。

1.5 測定內(nèi)容與方法

分別利用刻度集精杯測定射精量；通過比色卡測定原精顏色；利用精子質(zhì)量分析儀測定精子的活力、冷凍精子的活力，以及凍精出庫后測定精子直線運(yùn)動(dòng)的數(shù)量和精子的畸形率。

1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

數(shù)據(jù)分析使用SPSS 18.0 for Windows統(tǒng)計(jì)軟件包(Statistical Product and Service Solutions，Inc.，USA)進(jìn)行。單因素方差分析用one-way ANOVA程序進(jìn)行，多重比較用Duncan氏法，以P<0.05作為差異顯著性判斷的標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同品種公牛原精質(zhì)量比較

由表1可知，大別山牛射精量最低，與皖東牛和皖南牛差異顯著(P<0.05)，皖南牛射精量高于皖東牛，但差異不顯著(P>0.05)。原精活力相對最高的是皖南牛,其次是皖東牛，最后為大別山牛，但差異都不顯著(P>0.05)。3種種牛的精液顏色都為乳白色。

表1 不同品種公牛原精質(zhì)量比較

注：同列數(shù)據(jù)相同小寫字母表示差異不顯著(P>0．05)，不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)。下同。

2.2 不同品種公牛冷凍精液解凍后質(zhì)量比較

由表2可知，皖東牛的凍精解凍后活率最低，與大別山牛和皖南牛差異顯著(P<0.05)，皖南牛高于大別山牛，但差異不顯著(P>0.05)。通過血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)算出種牛凍精解凍后精子直線運(yùn)動(dòng)的數(shù)量，以皖南牛最高，且與皖東牛和大別山牛差異顯著(P<0.05)，大別山牛高于皖東牛，但差異不顯著(P>0.05)。大別山牛的細(xì)菌數(shù)最高，較皖東牛和皖南牛細(xì)菌數(shù)差異均顯著(P<0.05)，皖東牛細(xì)菌數(shù)高于皖南牛，但差異不顯著(P>0.05)。皖東牛的精子畸形率最低，與大別山牛和皖南牛差異顯著(P<0.05)，皖南牛高于大別山牛，但差異不顯著(P>0.05)。

表2 不同品種公牛冷凍精液解凍后質(zhì)量比較

3 討 論

通過軟件分析種公牛的原精的活力、原精顏色、射精量以及凍精解凍后精子活力、精子直線運(yùn)動(dòng)的數(shù)量、細(xì)菌數(shù)量以及精子畸形率，分析出皖南牛、大別山牛和皖東牛之間的精液品質(zhì)的優(yōu)良程度。大別山射精量較少，與皖東牛和皖南牛差異顯著，說明射精量與品種之間存在相關(guān)性，這一結(jié)果與朱兵山等[4]報(bào)道的一致。消瘦，肥胖，蛋白質(zhì)、維生素、微量元素的缺乏都能導(dǎo)致射精量減少，可適當(dāng)針對大別山牛提高其飼養(yǎng)水平后觀察射精量變化[4-5]。其原精顏色公牛間無顯著差異均呈乳白色,精液愈呈乳白色則說明精子濃度愈高[6]。目前對原精活力要求達(dá)到60%方可留作種用，3個(gè)牛種均達(dá)標(biāo)準(zhǔn)。

凍精解凍與精液冷凍同樣重要，冷凍保存的精液只有用適宜的解凍方法，才能保證冷凍精液的良好復(fù)蘇,避免因操作不當(dāng)影響其凍精質(zhì)量評定。只有活力達(dá)到0.35以上，才能保證得到較好的解凍后活力，精液才具有受胎能力[7]。牛冷凍精液每劑量前進(jìn)運(yùn)動(dòng)精子數(shù)標(biāo)準(zhǔn)不低于800萬，水牛不低于1 000萬[8]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，解凍后活率、精子直線運(yùn)動(dòng)數(shù)均高于標(biāo)準(zhǔn)，皖南牛凍精精子直線運(yùn)動(dòng)數(shù)更是高出標(biāo)準(zhǔn)215萬/支，說明精液品質(zhì)較好，適合生產(chǎn)使用。試驗(yàn)中在精液細(xì)菌數(shù)量測定分析階段發(fā)現(xiàn)大別山牛的細(xì)菌數(shù)量相比較皖東牛和皖南牛高出許多，且差異顯著。筆者查閱前人資料了解到影響牛冷凍精液細(xì)菌數(shù)的因素很多，除了外源性因素，內(nèi)源性因素也存在。外源性因素包括采精設(shè)備消毒不徹底，采精方法不當(dāng)，種牛陰莖衛(wèi)生不好，實(shí)驗(yàn)室環(huán)境消毒不到位等,內(nèi)源性因素可能是牛只本身生殖道感染疾病[9-10]。制作凍精應(yīng)嚴(yán)格管理，須把控好冷凍精液的每步環(huán)節(jié)，才能有效控制冷凍精液細(xì)菌數(shù)，避免發(fā)生不必要的試驗(yàn)誤差影響試驗(yàn)結(jié)果。精子畸形率直接對體外受精、胚胎移植產(chǎn)生影響，接受體外受精、胚胎移植中畸形精子較高的妊娠幾率比較低[11-12]。精子畸形率低不僅僅有利于人工授精，對體外受精以及胚胎移植效果的改善也十分顯著。試驗(yàn)種牛精子畸形率均低于國家標(biāo)準(zhǔn)(畸形率標(biāo)準(zhǔn)為畸形率≤18%)[8]。本次試驗(yàn)的3種地方牛種原精質(zhì)量，凍精質(zhì)量均達(dá)一個(gè)較好水平，可能和采精時(shí)段處于氣溫較低的冬春季節(jié)有關(guān)，避開了夏季高溫?zé)釕?yīng)激對公牛精液品質(zhì)的不利影響，這一結(jié)果與劉曉靜等[13]報(bào)道的一致。

4 結(jié) 論

不同品種的種公牛具有不同的遺傳特性，所以精液品質(zhì)的差異是客觀存在的。在解凍后皖東牛的精子畸形率低，但精子活力較低；皖南牛與大別山牛的精子活力高，但精子的畸形率較高。研究發(fā)現(xiàn)同一冷凍方法對不同品種公牛的精子產(chǎn)生不同的影響，在以后的研究工作中應(yīng)當(dāng)針對不同牛種試驗(yàn)出不同的冷凍方法。