張善虎

山東省聊城市莘縣人民醫(yī)院檢驗(yàn)科,山東聊城 252400

原發(fā)傳染性單核細(xì)胞增多癥(IM)是一種由于EB病毒(EBV)感染所致的以急性、亞急性單核-巨噬細(xì)胞增多為主要特征的全身免疫異常性疾病,多發(fā)于學(xué)齡前兒童,患兒可出現(xiàn)發(fā)熱、咽峽炎、淋巴結(jié)腫大、肝脾腫大等臨床癥狀,血液中常出現(xiàn)異常淋巴細(xì)胞升高[1]。由于該病臨床癥狀缺乏特異性,加上較多患兒僅有上呼吸道感染癥狀,因此,極易被誤診。臨床上,通常通過檢測(cè)EBV相關(guān)抗體對(duì)該病進(jìn)行診斷,由于兒童自身機(jī)體免疫系統(tǒng)尚未發(fā)育完全,難以誘導(dǎo)免疫系統(tǒng)產(chǎn)生抗體,再加上異嗜性抗體的干擾等因素,均可導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)假陽性[2-3]。EBV-DNA作為EBV存在的直接證據(jù),近年來也有學(xué)者發(fā)現(xiàn)其在早期診斷IM中具有重要意義[4]。血漿人類白細(xì)胞抗原G(HLA-G)、可溶性白細(xì)胞抗原G(sHLA-G)作為機(jī)體重要的免疫抑制分子,在遭受到病毒感染后,可在血漿中發(fā)生持續(xù)表達(dá),對(duì)病毒逃逸宿主免疫系統(tǒng)具有重要的監(jiān)視作用,和免疫反應(yīng)之間有復(fù)性調(diào)節(jié)作用[5]。但目前關(guān)于HLA-G、sHLA-G 、EBV-DNA載量用于IM患兒的診斷價(jià)值報(bào)道較少,本研究擬探討這3項(xiàng)指標(biāo)與IM之間的關(guān)系,為臨床診斷IM提供參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2015年11月至2017年11月本院確診的60例IM患兒作為觀察組,納入標(biāo)準(zhǔn):(1)符合IM診斷標(biāo)準(zhǔn)[6],并通過臨床癥狀、血常規(guī)、異型淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)等檢查確診,(2)年齡3個(gè)月至3歲；(3)近半年無病毒感染史；(4)患兒家屬對(duì)本研究知情同意。選取同期本院收治的非IM發(fā)熱患兒60例作為對(duì)照組,所有研究對(duì)象的監(jiān)護(hù)人均知情同意。所有研究對(duì)象排除標(biāo)準(zhǔn):(1)先天性畸形者；(2)臟器功能嚴(yán)重障礙者；(3)惡性腫瘤者；(4)入組前接受過相關(guān)治療；(5)無法配合本研究所涉及檢查者；(6)資料不全者。研究組中男35例、女25例,平均(1.97±0.34)歲,對(duì)照組中男28例、女32例,平均(2.04±0.31)歲,兩組患兒性別、年齡比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。

1.2方法

1.2.1標(biāo)本采集 于治療前采集患兒靜脈血5 mL,乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)抗凝,混勻后靜置30 min,室溫下以相對(duì)離心力2 600×g離心10 min,分離血漿,置于冷凍箱內(nèi)保存。

1.2.2血漿HLA-G、sHLA-G、EBV-DNA載量檢測(cè) 采用ELISA檢測(cè)血漿HLA-G、sHLA-G水平,試劑盒均購于武漢默沙克生物科技有限公司。EBV-DNA載量檢測(cè)使用實(shí)時(shí)熒光定量PCR,試劑盒購于中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司。所有操作嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。

2 結(jié) 果

2.1兩組血漿HLA-G、sHLA-G、EBV-DNA載量比較 觀察組血漿HLA-G、sHLA-G、EBV-DNA載量均明顯高于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見表1。

表1 兩組血漿HLA-G、sHLA-G、EBV-DNA載量比較

2.2血漿HLA-G、sHLA-G、EBV-DNA載量對(duì)IM的診斷價(jià)值 ROC曲線分析顯示,血漿HLA-G、sHLA-G、EBV-DNA載量聯(lián)合檢測(cè)診斷兒童IM的曲線下面積(AUC)(0.958)大于HLA-G(0.886)、sHLA-G(0.789)和EBV-DNA載量(0.904)。見表2、圖1。

圖1血漿HLA-G、sHLA-G、EBV-DNA載量單獨(dú)檢測(cè)和聯(lián)合檢測(cè)診斷IM的ROC曲線

表23項(xiàng)指標(biāo)單獨(dú)檢測(cè)和聯(lián)合檢測(cè)對(duì)IM的診斷價(jià)值

注:-表示無數(shù)據(jù)。

3 討 論

EBV屬于人皰疹病毒4型,是導(dǎo)致IM的重要病原體,有數(shù)據(jù)顯示,全國(guó)感染EBV的人群超過90%,而我國(guó)EBV所引發(fā)的IM主要集中于青少年或兒童[7]。在原發(fā)感染EBV后,多數(shù)患兒僅有發(fā)熱表現(xiàn),而造成患兒發(fā)熱的因素較多,包括細(xì)菌、病毒感染等,極少部分患兒有咽峽炎、淋巴結(jié)腫大、肝脾大等典型表現(xiàn),由于該病的臨床癥狀復(fù)雜多樣,常會(huì)累及多個(gè)組織器官,臨床上漏診率、誤診率均較高,極易導(dǎo)致患兒錯(cuò)過最佳治療時(shí)間,因此,早期確診該病,并及時(shí)采取治療措施對(duì)提高預(yù)后十分重要。

目前,對(duì)于該病的實(shí)驗(yàn)室診斷仍以EBV抗體為主,雖然可動(dòng)態(tài)反映EBV感染后的抗體水平,但EBV感染后血清學(xué)反應(yīng)表現(xiàn)形式復(fù)雜,部分病例抗VCA-IgA可出現(xiàn)延遲,難以準(zhǔn)確地反映EBV感染的實(shí)時(shí)情況。由于EBV在感染初期可進(jìn)行DNA復(fù)制,因此,有學(xué)者提出通過熒光定量PCR技術(shù)對(duì)病毒核酸進(jìn)行檢測(cè),以更有效地反映是否感染EBV和病毒復(fù)制情況[8-9]。但隨著研究不斷深入,學(xué)者們發(fā)現(xiàn),在部分病例中,EBV-DNA載量和EB VCA-IgA的診斷結(jié)果存在一定差異,并指出單一檢測(cè)EBV-DNA載量在診斷IM中準(zhǔn)確度、特異度較低,而選擇特異度較高的指標(biāo)與其聯(lián)合檢測(cè)對(duì)診斷準(zhǔn)確度的提高具有積極意義[10]。

近年來,有報(bào)道證實(shí)HLA-G和T細(xì)胞上的抑制性受體、NK細(xì)胞對(duì)免疫細(xì)胞的殺傷活性具有抑制作用,可促進(jìn)長(zhǎng)期的免疫耐受和逃避,而病毒誘導(dǎo)機(jī)體所產(chǎn)生的HLA-G被認(rèn)為是其逃逸免疫系統(tǒng)殺傷的一種重要機(jī)制[11-12]。隨著研究的不斷深入,VALL等[13]報(bào)道指出,HLA-G胞質(zhì)尾部可抵抗Nef所誘導(dǎo)的下調(diào)和胞內(nèi)聚集,在人類免疫缺陷病毒感染中發(fā)生著重要作用。ESKANDARI等[14]研究也發(fā)現(xiàn),人類免疫缺陷病毒感染者體內(nèi)HLA-G可存在于CD4+T、CD8+T細(xì)胞及單核細(xì)胞之中,且在長(zhǎng)期處于活動(dòng)期患者的血漿中HLA-G表達(dá)明顯升高,而長(zhǎng)期處于穩(wěn)定的血漿中并無HLA-G的表達(dá)。

本研究發(fā)現(xiàn)IM患兒的血漿HLA-G及sHLA-G表達(dá)明顯高于其余單純發(fā)熱的患兒。謝付靜等[15]的研究也顯示,在IM患兒中,血漿HLA-G明顯升高,且在輔助診斷疾病中具有積極意義,和本研究具有一定相似性。機(jī)體在受到EBV感染后,病毒進(jìn)入細(xì)胞,通過自身特定抗原的表達(dá),干擾著機(jī)體的正常免疫機(jī)制,而HLA-G及sHLA-G也對(duì)T細(xì)胞具有抑制作用,可減少T細(xì)胞的增殖,影響細(xì)胞免疫功能,三者可通過相互協(xié)同作用,導(dǎo)致IM的發(fā)生。

本研究結(jié)果顯示,血漿HLA-G、sHLA-G、EBV-DNA載量對(duì)兒童IM具有較好的診斷價(jià)值(AUC分別為0.886、0.789、0.904),且三者聯(lián)合檢測(cè)的診斷價(jià)值更高(AUC為0.958)。綜上所述,血漿HLA-G、sHLA-G 和EBV-DNA載量在IM患兒中明顯升高,且聯(lián)合檢測(cè)有助于提高診斷特異度、準(zhǔn)確度,本研究也為今后早期診治IM提供了新思路。