劉道利,邱芳華,周偉青,龍華婧,劉燕娣,高東華,梁 涯

廣州市中醫(yī)醫(yī)院：1.檢驗(yàn)科；2.院感科；3.病理科,廣東廣州 510130

近幾年來,隨著人口老齡化的發(fā)展,環(huán)境污染日益嚴(yán)重,惡性腫瘤成為阻礙人類健康、社會(huì)發(fā)展的嚴(yán)重危險(xiǎn)因素。全國腫瘤登記中心最新數(shù)據(jù)顯示,2013年全國腫瘤新發(fā)病例368.2萬例,死亡病例為222.9萬例,其中發(fā)病例數(shù)排首位的為肺癌,其新發(fā)病例為73.3萬例,死亡病例數(shù)居首位的也是肺癌,為32.4萬例[1]。因傳統(tǒng)的影像學(xué)檢查靈敏度低,病理組織活檢易造成患者創(chuàng)傷,且難以發(fā)現(xiàn)微小的組織病灶,故尋找靈敏度和特異度高的生物標(biāo)志物用于輔助診斷肺癌尤為重要。近年來,胃泌素釋放肽前體(ProGRP)用于輔助診斷肺癌越來越受到關(guān)注[2-4],而越來越多的研究也證實(shí)了胱抑素C(CysC)與惡性腫瘤相關(guān)[5-6]。本研究旨在分析聯(lián)合檢測ProGRP、細(xì)胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)和胱抑素C(CysC)對診斷肺癌的靈敏度、特異度。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2018年1-12月廣州市中醫(yī)醫(yī)院肺病科收治的81例經(jīng)病理組織細(xì)胞學(xué)檢查診斷為肺癌,同時(shí)排除有腎臟疾病的患者納入肺癌組,男40例,女41例,年齡35～78歲,其中腺癌組24例,鱗癌組28例,小細(xì)胞肺癌組29例。收集同期59例肺良性病變患者納入肺良性病變組,其中男32例,女27例,年齡40～80歲,包括慢性阻塞性肺疾病、感染性肺炎、肺氣腫、支氣管擴(kuò)張等疾病患者,排除腎臟疾病患者。同期60例本院健康體檢者納入健康對照組,無心臟、肝臟、腎臟等疾病,無腫瘤家族史,其中男33例,女27例,年齡38～82歲。5組研究對象一般資料比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。

1.2儀器與試劑 儀器使用羅氏Cobas e601化學(xué)發(fā)光儀、日立7180全自動(dòng)生化儀；ProGRP、CYFRA21-1檢測均采用羅氏原裝試劑、質(zhì)控品和校準(zhǔn)品。CysC檢測試劑由寧波美康生物有限公司提供。所有操作均嚴(yán)格按照說明書操作,質(zhì)控在控。

1.3檢測方法 采集所有研究對象清晨空腹靜脈血標(biāo)本,3 500 r/min離心10 min分離血清后,2 h內(nèi)完成檢測。本實(shí)驗(yàn)室陽性閾值:CYFRA21-1>3.3 ng/mL,ProGRP>77.80 pg/mL,CysC>1.25 mg/L,超臨界值則為陽性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用Excel 2007軟件、SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計(jì)分析。非正態(tài)定量資料采用中位數(shù)(四分位數(shù))[M(P25,P75)]表示,組間比較采用Kruskal-Wallis秩和檢驗(yàn)；非雙變量正態(tài)分布資料采用Spearman法進(jìn)行相關(guān)性分析；診斷效果評價(jià)采用受試者工作特征(ROC)曲線分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.15組的CYFRA21-1、ProGRP、CysC水平比較 腺癌組、鱗癌組和小細(xì)胞肺癌組的CYFRA21-1水平高于肺良性病變組和健康對照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。小細(xì)胞肺癌組的ProGRP水平高于肺良性病變組、腺癌組、鱗癌組和健康對照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。鱗癌組和小細(xì)胞肺癌組的CysC水平高于肺良性病變組、腺癌組和健康對照組,腺癌組的CysC水平高于健康對照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表15組的CYFRA21-1、ProGRP、CysC水平比較[M(P25,P75)]

注:與肺良性病變組比較,aP<0.05；與腺癌組比較,bP<0.05；與鱗癌組比較,cP<0.05； 與小細(xì)胞肺癌組比較,dP<0.05。

2.2CYFRA21-1、ProGRP、CysC及聯(lián)合檢測診斷肺癌的效果 CYFRA21-1、ProGRP、CysC及3項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測診斷肺癌的AUC(95%CI)分別為0.848(0.778～0.903)、0.670(0.585～0.747)、0.920(0.862～0.959)和0.964(0.918～0.988),聯(lián)合檢測的AUC最大。見表2及圖1。

表2CYFRA21-1、ProGRP、CysC及聯(lián)合檢測診斷肺癌的效果

圖1CYFRA21-1、ProGRP、CysC及聯(lián)合檢測診斷肺癌的ROC曲線

2.3CysC與CYFRA21-1、ProGRP相關(guān)性分析 小細(xì)胞肺癌組中,ProGRP與CysC呈顯著正相關(guān)(r=0.641,P<0.05)。見圖2及表3。

圖2 小細(xì)胞肺癌組中ProGRP與CysC的散點(diǎn)圖表3CysC與ProGRP及CYFRA21-1相關(guān)性分析

組別參數(shù)CYFRA21-1+ProGRPCYFRA21-1+CysCProGRP+CysC腺癌組r0.2170.0920.164P0.3070.6680.445鱗癌組r0.169-0.071-0.036P0.3890.7190.857小細(xì)胞肺癌組r-0.1640.1180.641P0.3970.5420.000

2.43項(xiàng)指標(biāo)在4個(gè)病例組中的陽性率 CYFRA21-1在鱗癌組中陽性率最高，為82.14%；ProGRP在小細(xì)胞肺癌組中陽性率最高，為89.66%,見表4。

表43項(xiàng)指標(biāo)在4個(gè)病例組中的陽性情況[n(%)]

3 討 論

肺癌是我國發(fā)病率和病死率最高的癌癥,由于其起病隱匿,易轉(zhuǎn)移,臨床上患者被確診時(shí)往往是中晚期,目前臨床上診斷肺癌主要依據(jù)影像學(xué)、病理學(xué)檢查,以及傳統(tǒng)的腫瘤標(biāo)志物如癌胚抗原、神經(jīng)元特異性醇化酶、鱗狀細(xì)胞癌相關(guān)抗原等,它們都存在靈敏度和特異度不高,或是取材不佳導(dǎo)致假陰性太高的問題,且有創(chuàng)檢查患者難以接受。因此,迫切需要尋找更高臨床價(jià)值的生物學(xué)標(biāo)志物,便于及早診斷,改善預(yù)后,提高患者生存率。

ProGRP是一種新的激素類腫瘤標(biāo)志物,其在哺乳動(dòng)物胃的神經(jīng)纖維及肺的神經(jīng)內(nèi)分泌組織中分布廣泛,由于半衰期長,近年來,被廣泛用于肺癌的診斷及病情監(jiān)測,是一種新的神經(jīng)內(nèi)分泌源腫瘤標(biāo)志物,是目前小細(xì)胞肺癌早期診斷的首選敏感腫瘤標(biāo)志物[4]。有研究表明,ProGRP對小細(xì)胞肺癌的診斷具有較高的靈敏度和特異度,可用于其他疾病與非小細(xì)胞肺癌的鑒別診斷[7-8]。馬大威等[9]研究顯示,ProGRP對小細(xì)胞肺癌診斷的靈敏度為97.56%,特異度為98.04%,陽性率為100.00%。本文研究同樣顯示,不同組的ProGRP水平比較,小細(xì)胞肺癌組高于其他4組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),且ProGRP在小細(xì)胞肺癌組中陽性率最高，為89.66%。沈雋霏等[10]通過對ProGRP診斷的性能評價(jià)及臨床應(yīng)用評估,發(fā)現(xiàn)ProGRP診斷小細(xì)胞肺癌性能的AUC為0.963(95%CI0.868～0.931),陽性預(yù)測值為71.68%,陰性預(yù)測值為96.83%。本研究通過ProGRP對肺癌組診斷的性能評價(jià),結(jié)果顯示AUC(95%CI)為0.670(0.585～0.747),陽性預(yù)測值為74.6%,陰性預(yù)測值為57.5%,再次證明ProGRP可用于肺癌病理分型,特別是對小細(xì)胞肺癌的診斷價(jià)值優(yōu)于其他肺癌。以上結(jié)果表明,ProGRP可作為肺癌病理分型的一項(xiàng)理想指標(biāo)。

CYFRA21-1是細(xì)胞角蛋白19的可溶性片段,在上皮細(xì)胞及上皮細(xì)胞來源的惡性腫瘤細(xì)胞內(nèi)有表達(dá),當(dāng)上皮細(xì)胞癌變時(shí),經(jīng)蛋白酶降解或細(xì)胞凋亡后，CYFRA21-1碎片釋放入血,對肺癌的診斷有較大的臨床意義[11]。本研究中血清CYFRA21-1水平在鱗癌患者中的表達(dá)水平及陽性率較高,對診斷肺癌的靈敏度和特異度分別為75.3%、93.2%,與蘆珂[8]的研究結(jié)果一致。雖與王文洋等[11]報(bào)道中的靈敏度有些不符,可能與本研究的非小細(xì)胞肺癌病例數(shù)較少相關(guān),需進(jìn)一步加大病例數(shù)驗(yàn)證。

CysC過去一直被用來作為反映腎臟濾過功能的指標(biāo),監(jiān)測腎臟功能。近幾年來,CysC在肺癌方面的研究越來越受到重視,其高表達(dá)對指導(dǎo)臨床肺癌診斷、評估預(yù)后有重要意義[6]。曹晉峰等[12]研究表明肺癌患者血清CysC水平明顯升高,且術(shù)前與術(shù)后相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),其機(jī)制可能是由于CysC分泌與抑制的不平衡,從而促進(jìn)了腫瘤細(xì)胞的生長、侵襲和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。機(jī)體的應(yīng)激反應(yīng)使CysC相應(yīng)增高,以抑制胞外胱氨酶的水解活性。本研究中,鱗癌組和小細(xì)胞肺癌組的CysC水平高于肺良性病變組、腺癌組及健康對照組,腺癌組高于健康對照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),其對診斷肺癌的靈敏度和特異度分別為85.2%、91.5%,與丁湘彧等[13]研究結(jié)果一致。此外,賀洪軍等[5]的研究顯示,CysC區(qū)分癌癥組與非癌組的靈敏度和特異度分別為85.8%、74.5%,通過回歸分析校正后,發(fā)現(xiàn)高CysC水平是肺癌發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。本研究還通過Spearman法分析CysC與ProGRP、CYFRA21-1的關(guān)系,得出小細(xì)胞肺癌組中,CysC與ProGRP呈正相關(guān)(r=0.641),這可能與本研究中小細(xì)胞肺癌組的病理分型構(gòu)成比及轉(zhuǎn)移器官數(shù)相關(guān),CysC水平隨著TNM分期的增加,會(huì)逐漸增高[14]。

本研究旨在探討聯(lián)合檢測ProGRP與CysC、CYFRA21-1對肺癌診斷的靈敏度和特異度,3項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測診斷的AUC最大，為0.964(0.918～0.988),陰性預(yù)測值與陽性預(yù)測值分別為95.9%、84.9%,3項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測比ProGRP與CysC、CYFRA21-1各單項(xiàng)及兩兩聯(lián)合檢測的靈敏度和特異度更高,大大提高了肺癌的診斷率。多項(xiàng)生物學(xué)標(biāo)志物聯(lián)合檢測是提高血清標(biāo)志物診斷肺癌靈敏度和特異度的重要途徑,為臨床診斷提供了新的手段。

綜上所述,血清ProGRP、CFRA21-1和CysC檢測對肺癌病理分型、鑒別診斷有一定的參考價(jià)值,三者聯(lián)合檢測是靈敏度、特異度較高的臨床診斷肺癌的手段。