吳碧濤,任艷,蔣文強
綿陽市中心醫(yī)院檢驗科,四川 綿陽 621000
流感是由流感病毒感染引起的急性呼吸道疾病,是人類面臨的主要公共衛(wèi)生健康問題之一,可引起暴發(fā)流行。流感具有高度的傳染性,19~20世紀(jì)曾造成致命的流行病,并導(dǎo)致全球數(shù)百人死亡[1]。盡管所有年齡段都可能因流感發(fā)生嚴重疾病,但兒童不成比例地承擔(dān)著流感病毒感染的高風(fēng)險,兒童的流感感染率始終最高[2-3]。全球每年約有87 000名5歲以下兒童因流感住院[4]。NAIR等[5]的薈萃分析估計,每年有28 000~111 500例5歲以下兒童的死亡可歸因于流感相關(guān)原因。研究發(fā)現(xiàn),維生素D除參與鈣磷代謝、維持骨礦鹽平衡外,還具有廣泛的骨骼外效應(yīng),尤其是其對免疫系統(tǒng)的作用越來越受到重視。維生素D可通過促進抗菌肽的表達,影響細胞因子分泌等調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)的功能[6],通過對免疫系統(tǒng)的調(diào)節(jié)進而對感染性疾病產(chǎn)生影響。本文擬探討0~12歲兒童流感病毒感染與其血清25(OH)D水平之間的關(guān)系。
1.1 樣本來源 回顧性分析2019年1月1日至3月31日于綿陽市中心醫(yī)院門診和住院診治的741例兒童(≤12歲)的臨床及實驗室檢查資料。所有患兒均行流感病毒抗原篩查,并于篩查前后一周內(nèi)做血清25(OH)D水平檢測。
1.2 試劑和儀器 甲型/乙型流感病毒抗原檢測試劑盒(膠體金法)由Princeton Biomeditech Corporation提供;25(OH)D檢測試劑盒由山東濟南英盛生物技術(shù)有限公司提供,檢測儀器為API3200 MDTMLC/MS/MSSystem。
1.3 檢測方法
1.3.1 流感病毒抗原檢測 通過化學(xué)試劑提取樣本中病毒抗原,再用固相免疫層析法檢測甲型和/乙型流感病毒抗原。收集的鼻咽拭子樣本放置于裝有提取液的提取孔中1 min,裂解病毒并釋放出抗原,將測試板豎直并輕拍,再平放測試板,使提取液孔中的提取液與染料墊上膠體金標(biāo)記的凍干抗體結(jié)合,并在虹吸作用下沿著檢測膜移動,10~15 min內(nèi)讀取結(jié)果,在第15 min確認陰性結(jié)果。
1.3.2 血清25(OH)D檢測 按照現(xiàn)行靜脈血采集方法空腹采血2 mL,將血液注入促凝管中,3 000 r/min離心15 min,取上清800μL~1.5 mL離心管中,并加入8μL保護劑,充分混勻后冷凍(-20℃或以下)保存,由專業(yè)人員采用高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法集中檢測血清25(OH)D,嚴格按照試劑說明書及儀器SOP操作。參照2018年中華醫(yī)學(xué)會骨質(zhì)疏松和骨礦鹽疾病分會《維生素D及其類似物的臨床應(yīng)用共識》[7],血清25(OH)D<20 ng/mL定義為缺乏,20~30 ng/mL定義為不足,≥30 ng/mL定義為適宜。
1.4 實驗分組 按年齡將患兒分為0~1歲組、1~3歲組、3~6歲組及6~12歲組;按性別不同劃分為男性組與女性組;按患兒血清25(OH)D水平不同分為25(OH)D缺乏組、不足組、適宜組;按流感病毒抗原檢測結(jié)果分為陽性與陰性組。
1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS19.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)處理。經(jīng)Q-Q概率圖分析顯示,計量資料呈正態(tài)分布,以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x-±s)表示,兩組均數(shù)比較采用student t檢驗;計數(shù)資料以百分率(%)表示,率的比較采用χ2檢驗。兒童流感病毒感染與其血清25(OH)D水平的相關(guān)性采用Spearman相關(guān)檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
2.1不同性別及年齡兒童流感病毒感染情況 共計檢測咽拭子樣本741份,其中,流感病毒感染陽性樣本263例(包括Flu A陽性197例及Flu B陽性66例),陽性率為35.49%。男性患兒共408例,其中陽性樣本154例,陽性率為37.75%;女性患兒共333例,其中陽性樣本109例,陽性率為32.73%。經(jīng)χ2檢驗,男性與女性患兒流感病毒感染陽性率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=2.01,P=0.16)。對年齡進行分層分析后發(fā)現(xiàn):0~1歲組312例患兒,流感病毒感染陽性84例,陽性率為26.92%;1~3歲組230例患兒,流感病毒感染陽性90例,陽性率為39.13%;>3~6歲組128例患兒,流感病毒感染陽性59例,陽性率為46.09%;>6~12歲組71例患兒,流感病毒感染陽性30例,陽性率為42.25%。經(jīng)χ2檢驗,各年齡組患兒流感病毒感染陽性率比較差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=19.04,P<0.01),其中,3~6歲組患兒流感病毒感染陽性率最高,而0~1歲組患兒流感病毒感染陽性率最低。
2.2 流感病毒感染陽性與陰性組間血清25(OH)D水平比較 流感病毒感染陰性組血清25(OH)D平均水平為(28.40±10.95)ng/mL,感染陽性組血清25(OH)D平均水平為(27.32±9.01)ng/mL,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(t=1.36,P=0.18)。
2.3 不同25(OH)D水平組間流感病毒感染情況比較 血清25(OH)D水平缺乏組156例患兒,流感病毒感染陽性52例,陽性率為33.33%;25(OH)D不足組295例患兒,流感病毒感染陽性120例,陽性率為40.40%;25(OH)D適宜組288例患兒,流感病毒感染陽性91例,陽性率為31.60%。各組患兒感染陽性率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=5.36,P=0.07)。
2.4 兒童流感病毒感染與其血清25(OH)D水平的相關(guān)性 采用Spearman相關(guān)檢驗,結(jié)果顯示患兒流感病毒感染與其血清25(OH)D水平之間無相關(guān)性(R=0.039,P=0.287)。
兒童是流感的高發(fā)人群及重癥病例的高危人群,是流感流行的前哨[1],對兒童進行流感監(jiān)測顯得尤為重要。流感的確診需要相對特異的病原學(xué)檢測,如病毒培養(yǎng)、免疫熒光檢測、核酸檢測、血清學(xué)檢測和抗原快速檢測等。本研究采用膠體金法對流感病毒抗原進行檢測,該方法簡便快速、適合臨床篩查。在741份樣本中共檢出流感病毒感染陽性樣本263份,陽性率為35.49%,男性組與女性組患兒流感病毒感染陽性率差異無統(tǒng)計學(xué)意義,這與李翠珍等[8]的報道一致。不同年齡組患兒流感病毒感染陽性率差異有統(tǒng)計學(xué)意義,陽性率最高的為3~6歲組,最低的為0~1歲組。其原因可能為:對于3~6歲階段的兒童,其免疫力尚未健全,并且活動范圍廣、共用被病毒污染的用具的機會多[9];而對0~1歲組患兒,大多通過母乳從母體處獲得保護性免疫,且多無群體生活,感染的機會相對減少,故該年齡段嬰幼兒流感病毒感染陽性率最低,這也與彭質(zhì)斌等[10]報道的<6月齡是流感病毒感染的保護性因素的結(jié)論相吻合。
維生素D(VitD)是一種常見的脂溶性類固醇激素。循環(huán)中VitD首先在肝臟被羥化為25-羥基維生素D。因其含量豐富、半衰期長、性質(zhì)穩(wěn)定,25(OH)D常被用作評價體內(nèi)VitD營養(yǎng)狀態(tài)的指標(biāo)。本研究采用的高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法(HPLC-MS/MS),具有較高的特異性及靈敏度,被認為是目前檢測血清25(OH)D的“金標(biāo)準(zhǔn)”方法。維生素D除經(jīng)典的骨骼系統(tǒng)作用外,還與自身免疫性疾病、感染性疾病、心血管疾病、神經(jīng)精神疾病甚至腫瘤等密切相關(guān)[11],并參與多種免疫介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)過程[12]。有研究稱兒童期哮喘、毛細支氣管炎、肺結(jié)核等的發(fā)病均與維生素D相關(guān),妊娠期補充維生素D可減少兒童呼吸道感染的發(fā)生[13]。張曉丹等[6]認為維生素D缺乏的人群更易發(fā)生感染,而補充維生素D具有一定的輔助抗感染作用,主要包括急性呼吸道感染、皮膚軟組織感染及敗血癥、細菌性陰道炎等,維生素D可能通過促進抗菌肽的產(chǎn)生,上調(diào)維生素D受體的mRNA表達,影響免疫調(diào)節(jié),影響細菌細胞膜通透性來發(fā)揮輔助抗感染作用[6]。在本研究中,流感病毒感染陽性組與陰性組患兒血清25(OH)D水平差異并無統(tǒng)計學(xué)意義,同時,血清25(OH)D缺乏組、不足組以及適宜組患兒的流感病毒感染陽性率差異也無統(tǒng)計學(xué)意義,提示兒童流感病毒感染與其血清25(OH)D水平之間可能并無相關(guān)性。回顧文獻后發(fā)現(xiàn),2016年一項囊括了來自高、中、低等收入國家的3 198名5歲內(nèi)兒童的大型臨床試驗表明[14]:未找到補充維生素D后兒童肺炎或腹瀉的感染發(fā)生率有所下降的相關(guān)證據(jù)。在一項動物實驗中,GUI等[15]的研究顯示1,25(OH)2D治療H9N2感染小鼠時對固有免疫產(chǎn)生負性調(diào)控,尤其是在疾病的晚期階段。2017年,AGLIPAY等[16]的研究發(fā)現(xiàn)在1~5歲健康兒童中,每日補充高劑量維生素D與常規(guī)劑量補充相比,并未減少兒童患上呼吸道感染的風(fēng)險,其發(fā)現(xiàn)不支持給予兒童高劑量維生素D補充劑以預(yù)防病毒性上呼吸道感染的觀點。
由此可見,兒童血清維生素D水平與其流感病毒感染的關(guān)系尚存爭議和疑問,基于維生素D作用的廣譜性,不排除維生素D在預(yù)防或治療流感中發(fā)揮積極作用的可能性。我們的研究發(fā)現(xiàn)兒童血清25(OH)D水平與其流感病毒感染無明顯相關(guān)性,其可能原因有:所選樣本的數(shù)量、研究地域、季節(jié)、人種等方面存在局限和偏倚。因此,今后尚需針對更廣泛兒童群體的研究,進一步探討兒童血清維生素D水平與其流感病毒感染之間的關(guān)系。