李衛(wèi)娟，成文敏，朱蘭，孟莉，3，李俊喜，4，董正濤，高華峰，邵慶勇*

(1.云南省畜牧獸醫(yī)科學(xué)院，云南 昆明 650224； 2.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)，云南 昆明 650224；3.元陽縣馬街鄉(xiāng)畜牧獸醫(yī)站，云南 元陽 662400； 4.祿豐縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，云南 祿豐 651200；5.云南羊羊好農(nóng)牧發(fā)展有限公司，云南 宜良 651200)

石林圭山山脈一帶是云南奶山羊的主產(chǎn)區(qū)，養(yǎng)羊擠奶，制作奶香飄溢、食之嫩滑爽口的奶豆腐(乳餅)具有300多年的歷史[1]，形成以圭山羊、薩能高代雜交羊、從國外引進(jìn)的吐根堡、阿爾卑斯、努比奶山羊?yàn)榛A(chǔ)的奶山羊生產(chǎn)群體。云南奶山羊品種的多樣性加快了云南奶山羊傳統(tǒng)產(chǎn)業(yè)向現(xiàn)代產(chǎn)業(yè)發(fā)展的步伐，相繼建成投產(chǎn)日處理100t生鮮乳的乳制品加工廠2個(gè)。羊奶產(chǎn)品加工企業(yè)核心競爭力在于奶源，而奶源的基礎(chǔ)是良種，培育適合云南高原氣候、山地放牧或舍飼飼養(yǎng)、奶香味濃的奶山羊品種，對支撐產(chǎn)業(yè)發(fā)展具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。

吐根堡奶山羊(Toggenburg goat)原產(chǎn)于瑞士東北部圣加倫州的吐根堡盆地，對炎熱氣候條件和山地牧場具有較好的適應(yīng)性，因產(chǎn)奶量高被大量引入歐、美、亞、非及大洋洲許多國家進(jìn)行純種繁育或地方品種改良，對世界各地奶山羊業(yè)的發(fā)展起到了重要作用。我國曾于1937年、1982年、1984年先后引入吐根堡奶山羊，在四川、陜西、山西等省區(qū)飼養(yǎng)[2]。云南省于2012年引入純種吐根堡奶山羊凍胚，以圭山山羊?yàn)槭荏w進(jìn)行胚胎移植后開展純種繁殖和雜交改良工作，生產(chǎn)出的后代表現(xiàn)出較強(qiáng)的適應(yīng)性及較高的生產(chǎn)性能。選擇吐根堡作為雜交改良和良種培育的父本，充分利用高效擴(kuò)繁技術(shù)，迅速提高該品種的數(shù)量、質(zhì)量，是解決良種數(shù)量不足的有效途徑。2018年9月，在云南羊羊好農(nóng)牧發(fā)展有限公司開展吐根堡奶山羊超數(shù)排卵、同期發(fā)情、胚胎移植試驗(yàn)。本試驗(yàn)?zāi)康氖沁\(yùn)用超數(shù)排卵的方法探索吐根堡奶山羊胚胎移植效果。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料的選擇

1.1.1供體羊

從引進(jìn)凍胚繁殖的后代中選取純種吐根堡奶山羊經(jīng)產(chǎn)母羊10只作為供體，所選供體羊外貌符合本品種特征，健康狀況優(yōu)良，無繁殖和生理性疾病，發(fā)情周期正常，3～6歲。

1.1.2受體羊

選取本場飼養(yǎng)的云上黑山羊經(jīng)產(chǎn)母羊100只，受體羊發(fā)情周期正常、空懷、健康、2～5歲，營養(yǎng)狀況良好，膘情中等，母性好，產(chǎn)奶量高，無生理性疾病。

1.1.3飼養(yǎng)管理

供、受體羊試驗(yàn)前完成驅(qū)蟲和三聯(lián)四防苗、小反芻獸疫、口蹄疫、羊痘疫苗免疫注射，給予良好的飼養(yǎng)管理?xiàng)l件，不隨意更換飼草料和管理方式。每日飼喂花生秧、蠶豆秸稈糠、玉米青貯，補(bǔ)充維生素A、D和礦物質(zhì)，供給食鹽和清潔飲用水。

1.1.4主要藥品與器械

孕酮硅膠栓(CIDR)，新西蘭Zoetis Australia公司生產(chǎn)，每個(gè)CIDR含孕激素0.3g；垂體促卵泡素(FSH),商品名扶托平(Folltropin-V)，威隆制藥(北美)有限公司生產(chǎn)；孕馬血清促性腺素(PMSG)，寧波第二激素廠生產(chǎn)；胚胎回收液(PBS)，美國BIONICHE公司生產(chǎn)；胚胎培養(yǎng)液(Holding)，美國ICP公司生產(chǎn)。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1供體羊超排處理

用“CIDR+FSH法”進(jìn)行超排處理，處理時(shí)間及方法詳見表1。于發(fā)情周期中的任意一天埋置CIDR硅膠栓并肌注復(fù)合維生素A、D、E(Vade)5 mL，第9天換栓，第15～18天連續(xù)4 d每天上午7:00和晚上19:00用遞減法肌肉注射FSH，總劑量每只羊10.5 mL(367.5IU)。第18天撤栓,同時(shí)注射Vade 5 mL，第19、20天試情，采用人工授精方式進(jìn)行配種，每只供體羊配種3次。

1.2.2受體羊同期發(fā)情

受體羊與供體羊同時(shí)埋植孕酮硅膠栓、同時(shí)撤栓，并肌肉注射PMSG 250 IU。撤栓后用試情公羊進(jìn)行試情，記錄好發(fā)情時(shí)間。

表1 吐根堡奶山羊超數(shù)排卵和同期發(fā)情方法

1.3 胚胎回收和移植

1.3.1胚胎收集

供體母羊于發(fā)情配種后第7天采用手術(shù)法從子宮角回收桑椹胚至囊胚期胚胎。

1.3.2檢胚

根據(jù)受精情況及胚胎形狀將收集到的胚胎分為A、B、C級。

2 結(jié)果

2.1 供體羊超排效果

本試驗(yàn)供體羊超排效果見表2，超排處理10只純種吐根堡奶山羊，回收胚胎和卵子179枚(其中：未受精卵108枚，占60.3%；可用胚胎71枚，占39.7%)，平均每只羊提供可用胚胎7.1枚。

2.2 受體羊同期發(fā)情

同期發(fā)情處理100只云上黑山羊，撤栓后24～36h 發(fā)情85只，同期發(fā)情率85%。隨機(jī)選擇46只受體羊進(jìn)行胚胎移植手術(shù)，36只移植胚胎71枚，發(fā)情母羊利用率78.3%。

2.3 移植產(chǎn)羔效果分析

移植產(chǎn)羔情況見表3?？捎门咛?1枚，移植受體羊36只，產(chǎn)羔母羊23只，產(chǎn)羔40只(死胎1只)，移植產(chǎn)羔率63.89%。按移植胚胎數(shù)計(jì)算產(chǎn)羔率為56.33%，按產(chǎn)羔母羊計(jì)算產(chǎn)羔率為173.91%。

表2 供體羊超排效果統(tǒng)計(jì)表

表3 胚胎移植產(chǎn)羔情況統(tǒng)計(jì)表

3 小結(jié)

國內(nèi)采用“CIDR+FSH法”對供體羊進(jìn)行超數(shù)排卵，常見遞減注射法、等量注射法。不同品種的山羊只均獲得可用胚也不同，龍陵黃山羊7.40枚[3]、波爾山羊8枚[4]、努比山羊20.8枚[5]。本試驗(yàn)采用遞減法對吐根堡奶山羊進(jìn)行超排處理，并在注射FSH的第2天第3針時(shí)繼續(xù)保持較高的劑量未見報(bào)道。本次試驗(yàn)頭均回收胚胎和卵子數(shù)19.7枚，頭均回收胚胎數(shù)7.1枚；造成本次頭均胚胎回收率低的原因是否與人工授精技術(shù)環(huán)節(jié)的實(shí)施有關(guān)，有待進(jìn)一步驗(yàn)證。選擇云上黑山羊作為受體，同期發(fā)情率為85%，發(fā)情母羊利用率78.3%，產(chǎn)羔率173.9%，只均獲純種羊1.7只，具有較好的利用效益。