(貴州省關(guān)嶺布依族苗族自治縣動物疫病預(yù)防控制中心，貴州 關(guān)嶺 561300)

關(guān)嶺牛是國家重點保護的78個地方畜禽品種之一，主要分布于貴州省安順市和黔南布依族苗族自治州的19個縣，其中關(guān)嶺縣為主產(chǎn)區(qū)并因此得名。血液原蟲是牛最常見的寄生蟲之一，常見的有附紅細胞體(Eperythrozoon)、泰勒蟲(Theileria)、巴貝斯蟲(Babesia)、伊氏錐蟲(Trypanosoma)等[1]。大多數(shù)血液原蟲病通過吸血昆蟲傳播，而關(guān)嶺縣溫潤多雨的氣候特點也增加了牛感染血液原蟲的概率。2017年8—10月，關(guān)嶺縣動物疫病預(yù)防控制中心對轄區(qū)內(nèi)的關(guān)嶺牛進行附紅細胞體感染情況流行病學(xué)調(diào)查，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1抽檢血樣：按7%的存欄比例采集關(guān)嶺縣12個鄉(xiāng)鎮(zhèn)規(guī)?；B(yǎng)牛場的關(guān)嶺牛血液。

1.1.2主要試劑：2×TaqMaster Mix試劑(康為世紀生物科技有限公司)、瓊脂糖(Amresco)、DL 2 000 DNA Marker(TaKaRa)、GoldView核酸染料(Solarbio)、無水乙醇(天津福晨化學(xué)試劑廠)、ddH2O、天根DP318-02血液基因組DNA提取試劑盒(北京諾博萊德科技有限公司)。

1.2 方法

1.2.1牛附紅細胞體基因組DNA提取，引物設(shè)計：根據(jù)天根DP318-02血液基因組DNA提取試劑盒說明書進行牛附紅細胞體基因組DNA提取。根據(jù)NCBI數(shù)據(jù)庫中牛附紅細胞體序列，登錄號為AY946266的16S核糖體RNA基因部分序列設(shè)計引物，目的序列長度為833 bp。

1.2.2PCR擴增：擴增體系采用25 μL反應(yīng)體系，其中2×TaqMaster Mix 13.5 μL，上、下游引物各0.5 μL，DNA模板0.5 μL，ddH2O 10 μL。擴增條件：預(yù)變性95 ℃ 5 min，變性94 ℃ 45 s，退火60 ℃ 1 min，延伸72 ℃ 50 s，35個循環(huán)，再延伸72 ℃ 10 min，4 ℃保存；同時設(shè)立未加DNA模板的等體積陰性對照。取PCR產(chǎn)物6 μL，小心加樣于10 g/L TBE瓊脂糖凝膠點樣孔中，以相同體積的DL 2 000 DNA Marker作對照進行電泳，設(shè)定電泳條件為100 V，電泳時間30 min，凝膠成像系統(tǒng)觀察結(jié)果。

1.2.3數(shù)據(jù)統(tǒng)計：根據(jù)PCR擴增結(jié)果，準確記錄陽性樣品，統(tǒng)計數(shù)據(jù)并計算感染率。感染率(%)=感染樣品數(shù)/采集樣品數(shù)×100%

2 結(jié)果

2.1 牛附紅細胞體PCR擴增結(jié)果由圖1可見：檢測的陽性樣品目的條帶為833 bp。擴增產(chǎn)物送至生工生物工程(上海)股份有限公司測序后得到821 bp的序列片段，擴增后測得的序列經(jīng)過NCBI數(shù)據(jù)庫BLAST比對后顯示與牛附紅細胞體同源性達到99%。說明設(shè)計的引物可以準確鑒定牛附紅細胞體。

2.2 感染情況統(tǒng)計結(jié)果由表1可見：12個鄉(xiāng)鎮(zhèn)中有6個鄉(xiāng)鎮(zhèn)的關(guān)嶺牛感染了附紅細胞體，其中坡貢鎮(zhèn)養(yǎng)殖牛感染率最高為30%，新鋪鎮(zhèn)養(yǎng)殖牛感染率最低為6.67%，總體平均感染率為5.73%。

圖1 牛附紅細胞體PCR擴增結(jié)果M：DL 2 000 DNA Marker；1、3：檢測陽性樣品；2：檢測陰性樣品

表1 關(guān)嶺縣各鄉(xiāng)鎮(zhèn)養(yǎng)殖的關(guān)嶺牛附紅細胞體感染情況統(tǒng)計

3 小結(jié)

調(diào)查結(jié)果顯示，牛附紅細胞體已成為我縣關(guān)嶺牛的1種較為常見的寄生蟲病，有50%的鄉(xiāng)鎮(zhèn)牛場存在附紅細胞體感染，雖然牛群總體平均感染率不高，只有5.73%，但對我縣養(yǎng)牛業(yè)具有潛在的威脅，各地養(yǎng)牛場應(yīng)高度重視并做好防治工作。(1)在蜱、疥螨等外寄生蟲高發(fā)的季節(jié)(7—10月)要進行滅蜱和疥螨工作，減少傳播媒介[2]。(2)飼養(yǎng)圈舍要建設(shè)在通風(fēng)良好的較高地段，保持圈舍干燥。(3)對圈舍要勤打掃，勤消毒，糞便要及時無害化處理。(4)藥物治療：目前常用并且效果較好的抗附紅細胞體藥物是貝尼爾(又名血蟲凈)[3]，可按照5 mg/kg 體重按說明書方法給藥。