徐寧偉,李方品,吳學(xué)謙,于秀敏,劉玉艷,高一梅

（1. 河北科技師范學(xué)院，河北 秦皇島066600；2. 河北農(nóng)業(yè)大學(xué)，河北 保定071001；3. 騰沖市住房和城鄉(xiāng)建設(shè)局城市綠化管理所，云南 騰沖679100；4. 杭州植物園，浙江 杭州310013）

植物抑菌作用的研究目前主要集中在植物景觀、食品保鮮、醫(yī)療保健等領(lǐng)域[1-3]，如蒲公英、風(fēng)毛菊分別可以用于醫(yī)療美容及植物源殺菌劑的開發(fā)[4，5]。許多園林植物具有抑菌作用，其抑菌效果因植物種類及配置類型的不同而存在一定差異[6]。有關(guān)植物花浸提液的抑菌效果還鮮有報(bào)道，本試驗(yàn)選用河北科技師范學(xué)院校園內(nèi)薔薇科4 種木本植物為材料，比較其花的浸提液的抑菌效果, 旨在為綠化樹種的合理配置提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試植物

供試植物為河北科技師范學(xué)院昌黎校區(qū)的4種薔薇科木本植物[7]，它們是毛櫻桃Cerasus tomentosa (Thunb.) Wall、粉花重瓣麥李Cerasus glandulosa (Thunb.) Lois. f. sinensis、貼梗海棠Chaenameles speciose (Sweet) Nakai、秋子梨Pyrus ussuriensis Maxim.(表1)。

1.1.2 供試菌種

供試菌種為河北科技師范學(xué)院農(nóng)學(xué)與生物科技學(xué)院微生物實(shí)驗(yàn)室提供的大腸桿菌（Escherichia coli）、枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）和金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）3 種具有代表性的空氣微生物。

表1 供試植物及其花特征

1.1.3 儀器與試劑

GZX-9240MBE 型電熱鼓風(fēng)干燥箱、DNP-9082-1A 型電熱恒溫培養(yǎng)箱、PRX-450A 型智能人工氣候箱、YXQ-SG41-280 型手提式壓力蒸氣滅菌器、SW -CJ-1B(U)型單人單面凈化工作臺(tái)、752 型分光光度計(jì)、培養(yǎng)皿、涂布棒、接種環(huán)等。培養(yǎng)基為牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基，試劑有75%酒精、75%丙酮、蒸餾水等。

1.2 方法

1.2.1 菌種活化與菌懸液配制

將大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌分別接種在3 個(gè)牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基平板上，在恒溫培養(yǎng)箱37℃溫度下培養(yǎng)24 h[8]。用接種環(huán)分別挑取少量的3 種菌種分裝于盛有無菌生理鹽水的錐形瓶中，震蕩均勻，并做好標(biāo)記。將標(biāo)準(zhǔn)菌液培養(yǎng)至OD600=0.3，并稀釋至105mL-1，即為供試菌懸液。

1.2.2 花的采集與浸提液制備

采集盛花期新鮮健康的花朵，去掉花柄，用蒸餾水沖洗2～3 次，晾干表面水分后剪碎，分別稱量20 g 于研缽研磨后倒入3 個(gè)100 mL 錐形瓶中，再分別倒入50 mL 的75%丙酮、75%酒精、蒸餾水，浸提并做好標(biāo)記，將制備的浸提液放在紫外燈下進(jìn)行滅菌0.5 h[9]后備用。

1.2.3 抑菌試驗(yàn)

在經(jīng)過紫外燈殺菌以及酒精擦拭過的超凈工作臺(tái)內(nèi)進(jìn)行，使用移液槍分別吸取0.1 mL 不同浸提液于培養(yǎng)基上，并用三角涂布棒均勻涂布，等待吸收后，再使用移液槍分別吸取0.1 mL 金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和枯草芽孢桿菌的菌懸液并涂布，設(shè)置3 個(gè)平行，一組對(duì)照，做好標(biāo)記。放入恒溫培養(yǎng)箱，在37℃下培養(yǎng)24 h[8]。

1.2.4 數(shù)據(jù)記錄

記錄處理組及對(duì)照組菌落數(shù)量，如果菌落數(shù)量較少的，采用直接數(shù)取的方式；如果菌落密度大，則采用平板畫線法計(jì)數(shù)，即將平板平均分為8 個(gè)區(qū)域，選擇一個(gè)區(qū)域進(jìn)行計(jì)數(shù)，最后總數(shù)乘以8 即可。通過記錄各培養(yǎng)皿處理組與對(duì)照組菌落數(shù)量，將所有菌落數(shù)據(jù)進(jìn)行分類匯總，用Excel 制成表格，計(jì)算抑菌率。

抑菌率/%=[(對(duì)照菌落數(shù)-處理菌落數(shù))/對(duì)照菌落數(shù)]×100%[8]

2 結(jié)果與分析

2.1 供試植物對(duì)大腸桿菌的抑制作用

4 種薔薇科木本植物花的不同浸提液對(duì)大腸桿菌生長(zhǎng)的抑制作用見表2，除毛櫻桃花75%酒精浸提液外，其余浸提液均對(duì)大腸桿菌的生長(zhǎng)有抑制作用，75%丙酮、75%酒精和蒸餾水3 種花浸提液對(duì)大腸桿菌生長(zhǎng)的抑制作用最好的是粉花重瓣麥李，抑菌率分別為87.02%、91.43%和83.06%； 在每種植物3 種花浸提液對(duì)大腸桿菌生長(zhǎng)的抑制效果，除毛櫻桃為蒸餾水浸提液最好外，其余3 種均為蒸餾水浸提液效果最差；綜合每種植物3 種浸提液抑菌效果，大小排序分別是粉花重瓣麥李＞秋子梨＞貼梗海棠>毛櫻桃。

表2 4 種薔薇科木本植物花的不同浸提液對(duì)大腸桿菌的抑制作用

2.2 供試植物對(duì)枯草芽孢桿菌的抑制作用

表3 顯示了4 種薔薇科木本植物花的不同浸提液對(duì)枯草芽孢桿菌的抑制作用，除粉花重瓣麥李花蒸餾水浸提液外，其余浸提液均對(duì)大腸桿菌的生長(zhǎng)有抑制作用，75%丙酮、75%酒精和蒸餾水3 種花浸提液對(duì)枯草芽孢桿菌生長(zhǎng)的抑制作用最好的是毛櫻桃，抑菌率分別為92.21%、92.91%和89.06%；在每種植物3 種花浸提液對(duì)枯草芽孢桿菌生長(zhǎng)的抑制效果，均為蒸餾水浸提液的效果最差；綜合每種植物3 種浸提液對(duì)枯草芽孢桿菌的抑菌效果，大小排序分別是毛櫻桃>貼梗海棠＞秋子梨>粉花重瓣麥李。

表3 4 種薔薇科木本植物花的不同浸提液對(duì)枯草芽孢桿菌的抑制作用

2.3 供試植物對(duì)金黃色葡萄球菌的抑制作用

4 種薔薇科木本植物花的不同浸提液對(duì)金黃色葡萄球菌的抑制作用見表4，總體顯示抑菌效果很差，毛櫻桃、粉花重瓣麥李、貼梗海棠花的蒸餾水浸提液以及粉花重瓣麥李花的75%丙酮浸提液對(duì)金黃色葡萄球菌均無抑制作用，比較而言，毛櫻桃花75%酒精浸提液和貼梗海棠花75%丙酮浸提液對(duì)金黃色葡萄球菌的抑制作用較好，抑菌率分別為47.13%和32.70%，而秋子梨花的3 種浸提液雖然對(duì)金黃色葡萄球菌均有抑制作用，但抑菌率均低于20%。

3 結(jié)論

毛櫻桃、粉花重瓣麥李、貼梗海棠、秋子梨4 種薔薇科木本植物花的浸提液均對(duì)細(xì)菌有抑制作用，但同一種植物的不同浸提液以及同一種植物的同一浸提液對(duì)不同細(xì)菌的抑菌效應(yīng)不同，不同植物的相同浸提液對(duì)同種細(xì)菌的抑菌效應(yīng)也有所差異；不同植物不同浸提液的抑菌差異，是花的次生代謝產(chǎn)物成分差異、不同浸提方法浸提的次生代謝產(chǎn)物不同成分含量差異綜合作用的結(jié)果。

表4 4 種薔薇科木本植物花的不同浸提液對(duì)金黃色葡萄球菌的抑制作用

總體來看，粉花重瓣麥李對(duì)大腸桿菌的抑菌效果最好，毛櫻桃和貼梗海棠對(duì)枯草芽孢桿菌的抑菌效果最佳，毛櫻桃對(duì)金黃色葡萄球菌的抑菌效果較好。