黃安群 李新正 韓占兵

油乳劑滅活疫苗具有安全、穩(wěn)定、易于保存、便于運輸和免疫期長等優(yōu)點，廣泛應(yīng)用于雞傳染病的控制。但油乳劑滅活疫苗吸收較慢，通常在注射免疫后1周內(nèi)會引起局部組織輕微水腫，完全吸收需要3～4周。在實際生產(chǎn)中，由于免疫接種人員操作不規(guī)范或疫苗質(zhì)量問題會導(dǎo)致疫苗注射部位出現(xiàn)局部組織壞死、增生等不良反應(yīng)，嚴(yán)重時導(dǎo)致雞只死亡。本文對鄭州正德牧業(yè)禽病醫(yī)院20172018兩年內(nèi)收集到的56例因注射油乳劑滅活疫苗引起不良反應(yīng)病例剖檢記錄進(jìn)行調(diào)查、數(shù)據(jù)分類和整理，分析不良反應(yīng)產(chǎn)生的原因，并提出有效預(yù)防措施。

一、病例來源

對鄭州正德牧業(yè)禽病醫(yī)院2017-2018兩年內(nèi)臨床上確診為因注射油乳劑滅活疫苗出現(xiàn)不良反應(yīng)就診病例進(jìn)行登記，統(tǒng)計注射疫苗種類、注射部位、注射方法、注射劑量、注射前疫苗是否預(yù)溫、注射疫苗后出現(xiàn)反應(yīng)的比例和死亡率等情況，并進(jìn)行跟蹤調(diào)查。

二、臨床癥狀

注射油乳劑滅活疫苗出現(xiàn)不良反應(yīng)的雞只，在注射疫苗7天后表現(xiàn)出精神沉郁、羽毛松亂、縮頸閉眼、食欲減退或廢絕、排黃白色稀便等癥狀，病雞出現(xiàn)漸進(jìn)性消瘦。

頸部皮下注射后的不良反應(yīng)主要表現(xiàn)為：雞頭面部、肉髯出現(xiàn)腫脹，眼眶周圍和上額腫脹發(fā)硬，形成典型的“獅子頭”，腫脹部位質(zhì)地堅硬無熱疼感。頸部出現(xiàn)大小不等的結(jié)節(jié)，質(zhì)地稍堅硬、大小不一，小的如黃豆粒、大的如棗樣。

注射部位在腿部時，主要癥狀為局部腫脹，運動障礙及不愿運動。運動時出現(xiàn)明顯的跛行，嚴(yán)重時局部皮膚出現(xiàn)潰爛，流出黃色膿性分泌物。

注射部位在胸部肌肉時，不良反應(yīng)主要表現(xiàn)為胸肌局部形成硬塊狀增生和壞死。

三、病理剖檢變化

1. 局部病變

注射局部出現(xiàn)嚴(yán)重蜂窩織炎、局部組織增生和白細(xì)胞浸潤、局部肌肉壞死和腫瘤樣增生等病理變化。

頸部皮下注射不良反應(yīng)，在頸部皮下疏松結(jié)締組織中形成大小不等的結(jié)節(jié)，大的如棗樣，外觀呈腫瘤樣結(jié)節(jié)，有結(jié)締組織包膜，切開后有乳白色油狀物流出，或混有灰黃色干酪樣壞死;小結(jié)節(jié)如黃豆粒，在外層有薄膜包裹，內(nèi)部為乳白色油狀物或灰黃色干酪樣壞死，在頸部皮下氣管和食道周圍有大量的結(jié)締組織增生，壓迫氣管。頭部和肉髯腫脹的病例，切開頭部和肉髯皮膚，皮下有纖維素性增生，在增生物中有白色油狀物。

腿部肌內(nèi)注射不良反應(yīng)，切開腫脹部位的皮膚，在局部肌肉組織中出現(xiàn)肌肉腫脹，皮下有灰黃色漿液浸潤，切開肌肉呈灰白色熟肉狀壞死，在肌間有灰黃色干酪樣物和乳白色油狀物（圖1）。若油乳劑滅活疫苗注射過深，在坐骨神經(jīng)和血管周圍有白色油狀物和白細(xì)胞浸潤及周圍組織的壞死;若油乳劑滅活疫苗注射過淺，在跗關(guān)節(jié)周圍腫脹，剖開皮膚在皮下有黃色干酪樣物和油狀物。

胸部肌內(nèi)注射不良反應(yīng)和腿部肌內(nèi)注射不良反應(yīng)病理變化相似（圖2）。

2.全身病變

剖檢病死雞，發(fā)現(xiàn)雞只瘦弱、發(fā)育較差。肝臟腫大、出血，質(zhì)脆易碎如爛泥，在腹腔內(nèi)集有大量不凝固血液;脾臟腫大。

四、診斷

1.細(xì)菌分離培養(yǎng)

對出現(xiàn)疫苗不良反應(yīng)死亡雞進(jìn)行病變局部和肝臟無菌采集病料，用普通營養(yǎng)瓊脂做細(xì)菌分離培養(yǎng)。結(jié)果56例病例中54例為細(xì)菌陰性，2例有細(xì)菌混合感染。

2.組織切片檢查

對瘤樣增生組織做石蠟切片，HE染色進(jìn)行顯微鏡觀察，發(fā)現(xiàn)瘤樣增生病變組織由大量大小不等的結(jié)節(jié)、大小不等的空泡、成纖維細(xì)胞和大量嗜伊紅細(xì)胞組成。增生組織有五層結(jié)構(gòu)，中心為均質(zhì)紅染的壞死物，壞死物周圍是大量的核濃縮、核碎裂壞死細(xì)胞;再向外是一層較薄的上皮樣細(xì)胞帶（內(nèi)有多核巨噬細(xì)胞，可見巨噬細(xì)胞吞噬油苗顆粒，而呈大小不等的圓形空泡狀）;再向外為一層寬大的炎性水腫疏松區(qū)，其中細(xì)胞數(shù)量較少;最外層是成纖維細(xì)胞、淋巴細(xì)胞構(gòu)成的類似包膜的組織。

3.同批次疫苗接種試驗

將注射油乳劑滅活疫苗出現(xiàn)不良反應(yīng)的剩余同批號疫苗，按原接種部位、方法，使用消毒注射器具、疫苗充分預(yù)溫，按生產(chǎn)廠家提供的接種量接種于相近日齡的雞只。每批接種5只健康的雞只，注射后觀察注射部位變化，觀察期為25天。如果7～15天個別雞只出現(xiàn)注射部位輕度腫脹，25天時用手觸摸局部無瘤樣腫塊，剖檢個別雞僅見有小的白色油包，未見組織壞死及潰爛現(xiàn)象，無明顯的組織增生和肉芽腫塊，說明油乳劑滅活疫苗是由正規(guī)廠家生產(chǎn)的合格產(chǎn)品，可安全使用。

五、疫苗不良反應(yīng)情況分析

1.過最注射疫苗

因過量注射油乳劑滅活疫苗而出現(xiàn)疫苗不良反應(yīng)的有47例，占總病例數(shù)的84%。據(jù)統(tǒng)計結(jié)果可知，出現(xiàn)油乳劑滅活疫苗不良反應(yīng)與過量注射疫苗有關(guān)。

2.疫苗病原類型

統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)，細(xì)菌性油乳劑滅活疫苗不良反應(yīng)大于病毒性滅活疫苗。細(xì)菌性滅活疫苗不良反應(yīng)發(fā)生率為24%，病毒性滅活疫苗不良反應(yīng)發(fā)生率為15%。細(xì)菌性滅活疫苗不良反應(yīng)死亡率為4%，病毒性滅活疫苗不良反應(yīng)死亡率為2%。

3.疫苗預(yù)溫

根據(jù)56例油乳劑滅活疫苗出現(xiàn)不良反應(yīng)的統(tǒng)計結(jié)果，有49例注射前未對油乳劑滅活疫苗進(jìn)行充分預(yù)溫。從4℃冰箱中取出后直接注射，其發(fā)病率為16%，死亡率為2%;預(yù)溫不充分發(fā)病率為9%，死亡率為1%;而經(jīng)充分預(yù)溫發(fā)病率為5%，死亡率僅為0.8%。

六、預(yù)防措施

措施一：油乳劑滅活疫苗是將病原微生物用理化方法滅活、添加乳化免疫佐劑加工而來，此類疫苗具有安全、穩(wěn)定、易于保存和運輸、能夠反復(fù)刺激機體產(chǎn)生抗體、抗體持續(xù)時間長等優(yōu)點，在雞的傳染病防控中應(yīng)用較多。但油乳劑滅活疫苗在使用中一定要按廠家提供的劑量、方法使用，若在生產(chǎn)中隨意加大劑量，會導(dǎo)致疫苗中滅活劑、佐劑（白油、乳化劑）、未完全消除的尿囊蛋白超量，直接影響疫苗的正常吸收，引起注射部位出現(xiàn)水腫、肌肉壞死、瘤樣增生及肝臟壞死出血甚至死亡。本次調(diào)查56例疫苗不良反應(yīng)中有84%是因為注射油乳劑滅活苗過量引起，所以養(yǎng)殖戶一定要按說明書中的劑量進(jìn)行免疫，以減少不良反應(yīng)的發(fā)生。

措施二：一般油乳劑滅活疫苗保存在溫度為4～ 8℃冰箱內(nèi)，在注射前應(yīng)進(jìn)行預(yù)溫處理，防止在注射時冷應(yīng)激引起白細(xì)胞浸潤，局部冷刺激還會導(dǎo)致局部毛細(xì)血管收縮、形成局部腫塊。本次調(diào)查中不預(yù)溫或預(yù)溫不充分而出現(xiàn)疫苗不良反應(yīng)的占88%。因此使用油乳劑滅活疫苗時一定要進(jìn)行充分預(yù)溫，方法是：在免疫前的1～2天，將油乳劑滅活疫苗放入雞舍預(yù)溫，或使用前用38℃溫水水浴，盡量使疫苗與雞只體溫相近，從而減少不良反應(yīng)。

措施三：本次調(diào)查有12例是因注射細(xì)菌性油乳劑滅活疫苗引起的不良反應(yīng)，發(fā)生率明顯高于病毒性油乳劑滅活疫苗（細(xì)菌性油乳劑滅活疫苗一般發(fā)病率在10%～40%，嚴(yán)重時達(dá)56%;而病毒性油乳劑滅活疫苗發(fā)病率一般在5%～20%）。這可能是因為細(xì)菌性油乳劑滅活疫苗在滅活過程中只考慮到細(xì)菌本身的滅活，沒有考慮到細(xì)菌產(chǎn)生的毒素滅活，注射后毒素刺激局部組織，從而加大了疫苗反應(yīng)。生產(chǎn)中細(xì)菌性傳染病預(yù)防要謹(jǐn)慎使用疫苗，做好綜合性防控，使用時要確保產(chǎn)品合格，并嚴(yán)格按照說明書或在獸醫(yī)指導(dǎo)下使用，少量雞只試打后確認(rèn)無不良反應(yīng)再在大群中使用。

措施四：家禽體溫較高，一般在注射疫苗時很難引起細(xì)菌感染，本次調(diào)查56例疫苗不良反應(yīng)中細(xì)菌感染僅有2例，其中1例是該群雞有葡萄球菌感染，另1例是使用注射用品未消毒和針頭過粗引起。因此要高度重視針頭選擇（雛雞用7號針頭，成年雞用9號針頭），注射前對注射器、針頭進(jìn)行高溫、高壓消毒。

措施五：油乳劑滅活疫苗不良反應(yīng)的發(fā)生與IV型變態(tài)反應(yīng)有關(guān)，其中免疫佐劑、滅活劑和尿囊蛋白都是引起變態(tài)反應(yīng)的抗原。因此，作為油乳劑滅活疫苗研發(fā)、生產(chǎn)廠家應(yīng)進(jìn)一步研發(fā)效果更佳的佐劑和滅活劑，加強油乳劑滅活疫苗安全性研究和生產(chǎn)管理，提供安全有效的疫苗，更好地服務(wù)于養(yǎng)殖企業(yè)。

（作者聯(lián)系地址：河南牧業(yè)經(jīng)濟學(xué)院動物科技學(xué)院郵編：450046）