張 靜，孫敬蒙，張煒煜

（1.長春中醫(yī)藥大學，長春130117；2.吉林大學白求恩第一醫(yī)院藥學部，長春130021）

“哈蟆油滴丸”的主要原料為哈蟆油。哈蟆油為中國林蛙（Rana temporaria chensinensis David）雌蛙的干燥輸卵管，味甘、咸，性平，具有補腎益精、養(yǎng)陰潤肺的作用，收載于2015年版《中國藥典》一部。哈蟆油主產(chǎn)于吉林省長白山地區(qū)，具有很高的藥用和食用價值，是一種營養(yǎng)價值極高的滋補品，也是我國馳名中外的名貴食療性中藥；又稱為林蛙油、田雞油、哈什蟆油、蛤蟆油、蛤螞油、雪蛤油或雪蛤膏。近年來，哈蟆油在國內(nèi)外消費量迅猛增加，逐漸受到了更為廣泛的關(guān)注。哈蟆油具有提高機體免疫功能與應激性能作用、抗氧化與抗衰老作用、調(diào)節(jié)血脂作用、對生長發(fā)育和性功能的影響、耐缺氧抗焦慮作用、抗疲勞作用及鎮(zhèn)咳祛痰作用等[1～3]。哈蟆油傳統(tǒng)的使用方法是取干哈蟆油，冷水洗干凈后浸泡20小時，把膨脹的哈蟆油隔水用文火燉，30分鐘后服用，此方法費時，而且具有腥味，難以吞咽。將其采用固體分散體技術(shù)，制備成滴丸制劑，具有口感好，服用方便，生產(chǎn)工藝簡單，質(zhì)量穩(wěn)定，便于攜帶，貯存等優(yōu)點。本文旨在對“哈蟆油滴丸”的成型工藝進行研究，并獲得相關(guān)工藝參數(shù)[4～5]。

1 實驗材料

電子分析天平（上海精科天美，型號：FA1204B）；萬能粉碎機（上海宇硯機械設備，型號：30B型）；多功能滴丸實驗機（煙臺百藥泰中藥科技有限公司，型號：DWJ-2000S-DP）；甲基硅油（100mm2/s）（江西阿爾法高科藥業(yè)有限公司）；輕質(zhì)液狀石蠟（西安泰華醫(yī)藥科技有限公司）；聚乙二醇 （湖南爾康制藥股份有限公司）、聚維酮（西安天正藥用輔料有限公司）、硬脂酸鈉（湖南九典制藥股份有限公司）、明膠（陜西圣瑞醫(yī)藥科技有限公司）；哈蟆油（安徽易元堂中藥飲片科技有限公司）。

2 實驗方法與結(jié)果

2.1 粉碎工藝研究

經(jīng)過凈制的哈蟆油呈顆粒狀，為了便于制劑，需將哈蟆油粉碎。由于哈蟆油原料較昂貴，所以從經(jīng)濟及成本方面考慮，將哈蟆油粉碎為細粉，既能保證出粉率，節(jié)約成本，又能避免因粉碎不完全，粉末中摻有哈蟆油纖維狀組織而導致的丸劑成型性不好的問題。

干燥后哈蟆油粉碎成細粉，計算出粉率；重復三次操作，結(jié)果見表1。

表1 哈蟆油粉碎的出粉率

結(jié)果表明，三批平均出粉率為98.2%，RSD為0.10%，粉碎工藝合理。產(chǎn)品生產(chǎn)處方以極細粉足量投料。

2.2 輻照方法及劑量的確定

為了保證哈蟆油微生物限度指標合格，并且保證哈蟆油的成分不被破壞，我們首先采用低溫間歇滅菌法滅菌，但不能保證哈蟆油細粉微生物限度合格，故采用60Co滅菌。研究方法如下。

2.2.1 低溫間歇滅菌法

2.2.1.1 實驗分組

3天組：分別取3組哈蟆油細粉，每組1g，組號3-1、3-2、3-3， 每組每天分別滅菌 1小時、1.5小時、2小時，連續(xù)低溫間歇滅菌3天。

4天組：分別取3組哈蟆油細粉，每組1g，組號4-1、4-2、4-3， 每組每天分別滅菌 1小時、1.5小時、2小時，連續(xù)低溫間歇滅菌4天。

5天組：分別取3組哈蟆油細粉，每組1g，組號5-1、5-2、5-3， 每組每天分別滅菌 1小時、1.5小時、2小時，連續(xù)低溫間歇滅菌5天。

表2 哈蟆油滅菌時間表

2.2.1.2 實驗方法

按照表2分組，分別取哈蟆油細粉1g，置已滅菌的稱量瓶中，密封，采用熱風循環(huán)烘箱進行滅菌，溫度控制為60℃，按編號分別滅菌連續(xù)3天、4天、5天，每天分別滅菌1小時、1.5小時、2小時，殺滅微生物繁殖體，在室溫條件下放置24小時，測定微生物限度，結(jié)果見表3。

2.2.1.3 實驗結(jié)果

表3 微生物測定結(jié)果

結(jié)果表明，低溫間歇滅菌法對于殺滅大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌等有效，而對于霉菌沒有作用，故低溫間歇滅菌法不能保證哈蟆油細粉微生物限度合格。

2.2.2 輻射滅菌法的60Co滅菌法

依據(jù)江月仙[6]等在《60Co-γ射線輻照對哈蟆油營養(yǎng)成分的影響研究》中結(jié)論，在5～15kGy劑量范圍內(nèi)，5kGy輻照前后維生素D、E含量變化均無顯著性差異（P>0.05），而10～15kGy輻照以及加速實驗均使哈蟆油中維生素A、E含量顯著降低（P<0.01），維生素D受照射影響較??；脂肪酸在5～15 kGy輻照后變化不明顯，但加速實驗發(fā)現(xiàn)15 kGy使脂肪酸含量顯著提高；經(jīng)SDS-PAGE分析其分子量為20 KD的蛋白區(qū)帶隨輻照劑量增加而變深。證明60Co照射動物性高蛋白、低脂肪、低維生素固體樣品，在高輻照劑量下加速實驗均有不同程度影響，但5 kGy劑量輻照還是安全的。最終確定60Co照射滅菌法，劑量5 kGy。

2.3 賦形劑的選擇

為了保證丸劑的溶散時限合格，采用水溶性賦形劑。常見的有聚乙二醇（PEG）類、聚維酮（PVP）、硬脂酸鈉、泊洛沙姆、明膠等。聚乙二醇主要以聚乙二醇4000、聚乙二醇6000較為常用，先后采用聚乙二醇4000、聚乙二醇6000、聚維酮（PVP）、硬脂酸鈉、明膠為賦形劑，根據(jù)圓整度、外觀對丸劑進行評價，結(jié)果見表4。

表4 基質(zhì)的選擇

結(jié)果表明，當以聚乙二醇4000為賦形劑時，丸劑成型性較好，所以確定采用聚乙二醇4000作為“哈蟆油滴丸”的賦形劑。

2.4 藥物與賦形劑比例的確定

以藥物在賦形劑中分散狀態(tài)、成丸狀態(tài)為考察指標，對藥物與賦形劑的比例進行考察，結(jié)果見表5。

表5 藥物與賦形劑比例的確定

結(jié)果表明，當藥物與賦形劑的比為1∶3時，藥物在賦形劑中的分散狀態(tài)較好，制備的丸劑狀態(tài)較好，所以最終確定藥物與聚乙二醇4000的比為1∶3。

2.5 冷凝液的選擇

常用的冷凝劑包括甲基硅油、液狀石蠟。以圓整度、成丸狀態(tài)為考察指標，對不同的冷凝劑進行考察，結(jié)果見表6。

表6 冷凝液的選擇

結(jié)果表明，采用液狀石蠟作為冷卻劑，由于沉降速度過快，容易拖尾，且丸劑表面未完全冷凝，成型效果不好。當冷凝劑為甲基硅油及甲基硅油（100mm2/s）∶輕質(zhì)液狀石蠟（1∶1）時，滴丸狀態(tài)較好，綜合考慮滴丸狀態(tài)及生產(chǎn)成本，最后確定甲基硅油（100mm2/s）：輕質(zhì)液狀石蠟（1∶1）為冷凝液。

2.5 混合溫度的確定

聚乙二醇的結(jié)晶點為50℃～55℃，為了避免聚乙二醇結(jié)晶，以圓整度、成丸為考察指標，對不同混合溫度進行考察，結(jié)果見表7。

表7 混合溫度的確定

結(jié)果表明，當熔融溫度為70℃時，丸劑的成型性較好，同時為了保證哈蟆油中蛋白質(zhì)的成分不被破壞，所以確定藥物與賦形劑熔融溫度為70℃。

3 小結(jié)與討論

通過對哈蟆油滴丸粉碎工藝、賦形劑的選擇、藥物與賦形劑比例的研究，冷凝液的研究及混合溫度等方面的研究，確定了哈蟆油滴丸的最終成型工藝為：哈蟆油粉碎為細粉、聚乙二醇4000作為“哈蟆油滴丸”的賦形劑、藥物與聚乙二醇 4000的比為1∶3、甲基硅油（100mm2/s）∶輕質(zhì)液狀石蠟（1∶1）為冷凝液、藥物與賦形劑熔融溫度為70℃，哈蟆油細粉的滅菌方法為60Co照射滅菌法，劑量5 kGy。經(jīng)過反復驗證及中試生產(chǎn)實驗，證明該工藝穩(wěn)定可行。

本產(chǎn)品旨在提高人們的健康水平，從中藥資源中開發(fā)出具有增強免疫力功能的保健食品。根據(jù)中醫(yī)理論選用哈蟆油為原料，用現(xiàn)代的固體分散體制備技術(shù)，經(jīng)過原料的檢驗、粉碎、過篩、滅菌、混合、滴制、冷卻、除油、分劑量、內(nèi)包裝、外包裝、成品檢驗、入庫等工藝制成。產(chǎn)品的功效成份穩(wěn)定可控，產(chǎn)品的安全性、穩(wěn)定性及衛(wèi)生學方面均符合國家關(guān)于保健食品評價和規(guī)范要求。