任凌雁，靳 倩，廖 喆，袁 露，令狐克燕，李安潔，駱姝琳

(貴州省人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，貴陽 550002)

原發(fā)性高血壓是一種多基因遺傳疾病，由環(huán)境因素和遺傳因素共同決定，其中遺傳因素對個(gè)體血壓變化的影響占所有影響因素的30%～50%。目前，臨床常用的降壓藥物包括利尿劑、β腎上腺素受體阻滯劑、鈣拮抗劑、血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑(ACE)、血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑和α腎上腺素受體阻滯劑。其中，利尿劑、β腎上腺素受體阻滯劑、ACE抑制劑和血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑的使用受原發(fā)性高血壓患者的遺傳因素影響較大，與基因多態(tài)性有關(guān)[1]。近年來，貴州地區(qū)原發(fā)性高血壓患者發(fā)病呈上升趨勢，用藥效果個(gè)體差異較大，究其原因可能與抗藥物基因多態(tài)性有關(guān)。貴州是一個(gè)多民族聚集地，多民族的基因交流使得貴州地區(qū)人群遺傳基因分布具有復(fù)雜性，因此本文分析159例貴州地區(qū)原發(fā)性高血壓患者抗高血壓藥物基因，旨在獲得貴州原發(fā)性高血壓人群抗高血壓藥物基因分布特點(diǎn)。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2015年12月至2016年12月在本院就診的原發(fā)性高血壓患者159例，男99例，女60例。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)年齡大于18歲，性別不限；(2)根據(jù)中國高血壓防治指南(2018 年修訂版)中血壓的測量方法，連續(xù)3次非同日坐位收縮壓(SBP)≥ 140 mm Hg和(或)舒張壓(DBP)≥90 mm Hg。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)繼發(fā)性高血壓；(2)急性心腦血管事件發(fā)生3個(gè)月內(nèi)；(3)合并嚴(yán)重心肌病、風(fēng)濕性心臟病、先天性心臟病和嚴(yán)重肝腎疾病。

1.2方法

1.2.1基因組DNA提取 抽取高血壓患者靜脈血2 mL，利用廈門至善全自動(dòng)DNA提取儀提取基因組DNA。

1.2.2基因檢測 使用無錫瑞奇AGTR1、CYP2D6*10、ACE(I/D)、CYP2D6*10、ADRB1檢測試劑盒(PCR- 熔解曲線法)，無錫瑞奇CYP2C19基因檢測試劑盒(PCR- 熔解曲線法)對AGTR1、CYP2D6*10、ACE(I/D)、CYP2D6*10、ADRB1、CYP2C19*2、CYP2C19*3基因進(jìn)行檢測。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料以例數(shù)或百分比表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1各基因位點(diǎn)檢測結(jié)果 檢測的159例貴州原發(fā)性高血壓患者抗高血壓藥物相關(guān)的7個(gè)基因多態(tài)性位點(diǎn)分布頻率見表1。

表1 貴州原發(fā)性高血壓患者抗高血壓藥物相關(guān)的 7個(gè)基因多態(tài)性位點(diǎn)分布頻率[n(%)]

2.2各基因位點(diǎn)等位基因頻率在不同性別中的分布 159例貴州原發(fā)性高血壓患者中，男性和女性抗高血壓藥物相關(guān)的7個(gè)基因多態(tài)性位點(diǎn)等位基因分布頻率見表2。其中，CYP2D6*10、ACE(I/D)、CYP2D6*10、ADRB1、CYP2C19*2、CYP2C19*等位基因頻率在男女間分布比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；AGTR1等位基因頻率在男性和女性患者間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，見表2。

表2 不同性別患者抗高血壓藥物相關(guān)的7個(gè)基因 多態(tài)性位點(diǎn)分布頻率比較[n(%)]

a：P<0.01，與男性比較

2.3貴州地區(qū)高血壓患者相關(guān)藥物基因頻率與中國健康人群比較 將159例貴州原發(fā)性高血壓患者抗高血壓藥物相關(guān)的7個(gè)基因多態(tài)性位點(diǎn)等位基因分布頻率與中國健康人群[2- 3]比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表3。

表3 貴州地區(qū)高血壓患者與中國健康人群抗高血壓 藥物相關(guān)基因分布頻率比較(%)

3 討 論

在高血壓治療過程中抗高血壓藥物療效和不良反應(yīng)的個(gè)體差異是目前的普遍現(xiàn)象。造成個(gè)體藥物反應(yīng)差異的主要原因是藥物代謝酶、轉(zhuǎn)運(yùn)體和受體(藥物作用靶點(diǎn))的遺傳變異。根據(jù)個(gè)體與藥物治療相關(guān)的代謝酶、轉(zhuǎn)運(yùn)體和受體的遺傳變異制訂不同的治療方案，實(shí)現(xiàn)藥物治療個(gè)體化不僅可以減輕不良反應(yīng)，而且可以達(dá)到較好的降壓效果，具有十分重要的臨床意義及社會(huì)價(jià)值。

本次研究中所檢測的AGTR1、CYP2C9*3、ACE(I/D)、CYP2D6*10、ADRB1、CYP2C19*2、CYP2C19*3是4類常用降壓藥：利尿劑、β腎上腺素受體阻滯劑、ACE抑制劑和血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑的相關(guān)基因位點(diǎn)，基因位點(diǎn)多態(tài)性可能會(huì)影響患者降壓療效。其中，血管緊張素Ⅱ的1型受體(AGTR1)主要介導(dǎo)腎素- 血管緊張素系統(tǒng)，A1166C位點(diǎn)在高血壓的藥物治療中具有重要意義。研究表明，使用氯沙坦治療后，AA基因型個(gè)體的有效率明顯高于AC和CC基因型個(gè)體[4]。在本次研究中，AGTR1(A/C)野生型純合子頻率為80.50%，突變雜合子頻率為18.87%，突變純合子頻率為0.63%，與中國健康人群相比，AGTR1(A/C)野生型等位基因頻率接近，但是突變型等位基因頻率高于中國健康人群。此外，本研究中AGTR1(A/C)在男女分布上也有不同，男性突變型等位基因頻率為4.04%，而女性突變型等位基因頻率為20.00%，二者比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。推測AGTR1(A/C)的突變可能與女性發(fā)病相關(guān)，與許景峰等[5]研究相符。

CYP2C9是細(xì)胞色素P450家族中的重要成員，可催化約12%的臨床常用藥物，ACE就是其中之一。CYP2C9基因多態(tài)性主要為CYP2C9*1(Arg144/Ile359)、CYP2C9*2(Cys144/Ile359)、CYP2C9*3(Arg144/Leu359)。在中國漢族人群中CYP2C9基因型主要以CYP2C9*3為主。CYP2C9*3可表現(xiàn)為酶活性降低，從而影響ACE的藥效發(fā)揮。本次研究中沒有檢測到CYP2C9*3(A/C)純合突變，雜合突變頻率也較低，僅為7.55%，而云南漢族人群[6]CYP2C9*3的雜合突變頻率為7.4%，純合突變率為1.0%；皖南漢族人群[7]的雜合突變和純合突變頻率分別為5.19%、0.74%，與本研究相似。

ACE(I/D)基因編碼血管緊張素轉(zhuǎn)換酶，為腎素- 血管緊張素系統(tǒng)的關(guān)鍵酶，ACE基因存在多種遺傳多態(tài)性，其中第16內(nèi)含子中存在的287 bp的Alu插入片段(I)和缺失片段(D)的多態(tài)性與高血壓藥物治療相關(guān)。研究表明，DD純合型個(gè)體使用貝那普利和福辛普利的療效顯著，Ⅱ純合型個(gè)體使用依那普利和咪達(dá)普利的療效顯著，ID雜合型個(gè)體使用血管緊張素抑制劑類藥物治療，均有效[8]。本研究中，ACEⅡ型、ID型、DD型分布頻率分別為41.51%、47.17%、11.32%，與貴州漢族、布依族高血壓人群的基因型分布大體一致[9]，但是DD型分布頻率略高于貴州漢族、布依族高血壓人群，為后期DD型患者高血壓用藥提供臨床依據(jù)。

經(jīng)CYP2D6催化代謝的藥物多達(dá)80多種，如β腎上腺素受體阻滯劑。不同個(gè)體CYP2D6的活性相差較大，在中國人群中最常見的多態(tài)性為CYP2D6*10，約51.6%的中國人攜帶此遺傳變異。該多態(tài)性導(dǎo)致CYP2D6的酶活性降低，且極不穩(wěn)定，從而影響藥物代謝[10]。本次檢測的CYP2D6*10(C/T)在男性與女性患者的分布頻率上無明顯差異，等位基因頻率與中國健康人群接近，有57.55%的高血壓患者攜帶突變，提示可以為后期研究貴州地區(qū)高血壓患者個(gè)體化使用β腎上腺素受體阻滯劑奠定研究基礎(chǔ)。

ADRB1(G/C)基因可編碼β1腎上腺素受體，該基因存在多態(tài)性。ADRB1(G/C)基因多態(tài)性與高血壓藥物治療相關(guān)，野生型純合子對該藥不敏感，而突變致該類藥與ADRB1結(jié)合能力增強(qiáng)故對該類藥敏感。本研究檢測到約80%的高血壓患者攜帶該突變，略高于中國漢族高血壓人群及中國健康人群[2，5]。但是仍檢測到近20%的高血壓患者未發(fā)生突變，該部分患者與β1腎上腺素受體類降壓藥的療效相關(guān)性值得進(jìn)一步研究。

利尿劑類藥物(如吲達(dá)帕胺)主要經(jīng)CYP2C19參與肝臟代謝，CYP2C19存在基因多態(tài)性，其中檢測*2、*3兩個(gè)位點(diǎn)可覆蓋中國大部分人群[11]。本次檢測中未發(fā)現(xiàn)CYP2C19*3純合突變型，推測可能與樣本量較小有關(guān)。此外，貴州高血壓患者等位基因頻率的分布與中國健康人群一致，但是沒有更多文獻(xiàn)對CYP2C19與抗高血壓藥物相關(guān)性進(jìn)行報(bào)道，因此在后期用藥研究中將持續(xù)關(guān)注。

貴州是多民族匯聚地，多個(gè)民族的基因交流可能使得貴州人群基因有著獨(dú)特的分布特點(diǎn)。本次研究對199例貴州地區(qū)行4大類降壓藥療效相關(guān)基因行檢測，分析貴州地區(qū)抗高血壓藥物相關(guān)基因在原發(fā)性高血壓人群中多態(tài)性分布。雖然結(jié)果顯示貴州原發(fā)性高血壓人群在抗高血壓藥物基因分布上與中國健康人群接近，推測可能與標(biāo)本量較小有關(guān)，后期需增加樣本量為建立貴州原發(fā)性高血壓患者基因庫打下基礎(chǔ)，從而為貴州地區(qū)高血壓患者用藥情況作出合理評價(jià)，最終提供個(gè)性化用藥指南。