劉滿宇 付 璐 張文慧 張林波

(吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,長春 130118)

外泌體作為一種功能廣泛的胞內(nèi)囊泡，與免疫細(xì)胞的多種功能有著密切聯(lián)系。但外泌體在免疫細(xì)胞間及免疫細(xì)胞與其他細(xì)胞間如何發(fā)揮作用，以及外泌體的作用與機(jī)體免疫應(yīng)答之間存在何種聯(lián)系，目前尚未完全闡明。探究外泌體對免疫細(xì)胞的影響及在免疫過程中的作用，對于進(jìn)一步揭示免疫系統(tǒng)功能及其運(yùn)作方式具有重要意義。

1 外泌體的形成機(jī)制及主要作用

外泌體(Exosome)是一種由磷脂雙分子膜與包裹在膜中的蛋白質(zhì)、核酸、脂類、糖類等物質(zhì)構(gòu)成的囊泡樣結(jié)構(gòu)，直徑在30～100 nm之間。20世紀(jì)80年代首次被發(fā)現(xiàn)于羊網(wǎng)織紅細(xì)胞的培養(yǎng)液中。一般認(rèn)為，外泌體起源于細(xì)胞內(nèi)的多囊體(Multivesicular body，MVB)，在ESCRT復(fù)合物、脂質(zhì)和四跨膜蛋白超家族等多種分子的參與下成熟，并在RAB蛋白家族的參與下與質(zhì)膜融合，進(jìn)而釋放到細(xì)胞外環(huán)境中(圖1)，這一融合過程也可能與SNAREs蛋白有關(guān)。

圖1 細(xì)胞內(nèi)外泌體產(chǎn)生和分泌的機(jī)制[1]Fig.1 Mechanism of production and secretion of cell internal and external secretory bodies[1]Note:ESCRT.Endosomal sorting complex required for transport；SNAREs.Soluble NSF-attachment protein receptor.

近年來的研究表明，免疫細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞、干細(xì)胞、上皮細(xì)胞等細(xì)胞均能夠產(chǎn)生外泌體。這些外泌體能對巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞(Dendritic cell，DC)、T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞(Natural killer cell，NK cell)等免疫細(xì)胞進(jìn)行調(diào)控。同時免疫細(xì)胞也能產(chǎn)生外泌體參與免疫應(yīng)答(圖2)，發(fā)揮抗原遞呈、免疫激活、細(xì)胞殺傷及調(diào)節(jié)代謝等眾多作用。

圖2 外泌體與DC的相互作用[2,3]Fig.2 Interaction between exosome and DC[2,3]Note:A.The stimulatory effect of tumor-derived exosomes to DC；B.The mechanism of DC regulating immune response through exosomes.

2 不同來源外泌體對免疫細(xì)胞的作用

目前的研究表明，來自腫瘤細(xì)胞、干細(xì)胞以及一些受到外源刺激的免疫細(xì)胞和組織細(xì)胞分泌的外泌體能夠靶向刺激免疫細(xì)胞， 對免疫系統(tǒng)的功能進(jìn)行調(diào)控。同時，不同免疫細(xì)胞之間也會通過外泌體來協(xié)調(diào)免疫過程，這些外泌體對免疫細(xì)胞所引發(fā)的免疫調(diào)控機(jī)制也是免疫應(yīng)答中的重要組成部分。

2.1外泌體影響巨噬細(xì)胞的極化 巨噬細(xì)胞作為非特異性免疫的重要組成部分，既是非特異性免疫的執(zhí)行者，也是免疫信號的重要傳遞者。一般認(rèn)為，在不同細(xì)胞因子的刺激下，組織內(nèi)巨噬細(xì)胞可極化為M1和M2兩種亞群，分別起到介導(dǎo)炎癥反應(yīng)和抑制炎癥的作用。隨著研究的深入，人們發(fā)現(xiàn)外泌體對巨噬細(xì)胞的功能調(diào)控主要通過控制其極化來實(shí)現(xiàn)。而let-7b/tLR 4通路可能是外泌體誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞極化的重要方式[4]。體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，來自抗原遞呈細(xì)胞的外泌體通過攜帶的脂多糖等抗原物質(zhì)誘導(dǎo)極化[5]；腫瘤細(xì)胞釋放的外泌體中則攜帶有血小板反應(yīng)素1，能夠激活巨噬細(xì)胞并使其向M1型極化[6]。小鼠的背根神經(jīng)節(jié)感覺神經(jīng)元在外周軸突損傷后，會釋放miR-21-5p過表達(dá)的外泌體，來促進(jìn)巨噬細(xì)胞的M1極化[7]。能夠促進(jìn)巨噬細(xì)胞M2極化的外泌體也有許多。人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(Mesenchymal stem cells，MSC)能通過外泌體作用于體外培養(yǎng)的骨髓來源巨噬細(xì)胞，誘導(dǎo)其從M1型極化到M2型并下調(diào)炎癥因子的釋放，以利于脊髓損傷后的修復(fù)[8]；受到脂多糖刺激的MSC分泌的外泌體對大鼠巨噬細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用更為明顯，能夠促進(jìn)大鼠的創(chuàng)傷愈合[4]。在小鼠體內(nèi)腫瘤細(xì)胞的上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)換過程中會釋放含有miR-21的外泌體，誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞的M2極化[9]。此外腫瘤細(xì)胞也可以通過GP130/STAT3[10]、PTEN/PI3Kγ[11]等信號通路來促進(jìn)極化。另外的一些研究表明，小鼠的脂肪干細(xì)胞可能通過miR-30D-5P在體內(nèi)刺激巨噬細(xì)胞的M2極化作用[12]。在體外實(shí)驗(yàn)中，來自氧化低密度脂蛋白誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞中的外泌體可利用攜帶的轉(zhuǎn)移相關(guān)肺腺癌轉(zhuǎn)錄本1促進(jìn)M2巨噬細(xì)胞極化，這可能與動脈粥樣硬化發(fā)生有關(guān)[13]；暴露在酒精中的單核細(xì)胞釋放的外泌體利用攜帶的miR-27a與初始單核細(xì)胞溝通，誘導(dǎo)其極化為M2型巨噬細(xì)胞[14]。

這些研究表明，促進(jìn)巨噬細(xì)胞向M1型極化的外泌體主要來源于抗原遞呈細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞和神經(jīng)元細(xì)胞等。而誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞向M2方向極化的外泌體可來自MSC、腫瘤細(xì)胞、脂肪干細(xì)胞、上皮細(xì)胞和酒精處理過的單核細(xì)胞等。這些外泌體促進(jìn)極化的作用與其攜帶的miRNA有著密切的關(guān)系。

2.2外泌體對T細(xì)胞分化與功能調(diào)控的影響 T細(xì)胞作為免疫系統(tǒng)的重要組成部分，一方面是免疫信息傳遞的重要環(huán)節(jié)，另一方面也能直接發(fā)揮免疫殺傷效應(yīng)。T細(xì)胞包括眾多亞群，如細(xì)胞毒性T細(xì)胞(Cytotoxic T-lymphocyte，CTL)、抑制性T細(xì)胞(Suppressor T cell，Ts)、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Regulatory T cell，Treg)和輔助性T細(xì)胞(Helper T cell，Th)等。這些亞群分化自T原細(xì)胞，其可在外泌體的刺激下分化成相應(yīng)的功能性T細(xì)胞。

研究表明，小鼠體內(nèi)MSC來源的外泌體能誘導(dǎo)T原細(xì)胞向Treg的分化，這一過程依賴抗原呈遞細(xì)胞的存在[15]；DC來源的外泌體能夠刺激T原細(xì)胞PI3K/mTOR軸影響其分化，進(jìn)而控制Treg和Th17細(xì)胞的平衡[16]；受到致病菌刺激的上皮細(xì)胞也能夠通過外泌體促進(jìn)Th17的增殖，進(jìn)而促進(jìn)結(jié)腸腫瘤生長[17]。從小鼠肥大細(xì)胞培養(yǎng)液中提取的外泌體可增強(qiáng)CD4+T細(xì)胞向Th2細(xì)胞分化[18]。在癌癥患者體內(nèi)提取的腫瘤細(xì)胞中衍生的外泌體能夠體外調(diào)節(jié)T細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子，并下調(diào)活化T細(xì)胞中CD3ζ與JAK3的表達(dá)，通過Fas/FasL(Fas配體)誘導(dǎo)活化的CD8+T細(xì)胞凋亡[19]；也可通過影響Th1和Th17的分化與促進(jìn)Treg產(chǎn)生來損傷T細(xì)胞功能[20]。

外泌體除參與T細(xì)胞分化外，也與T細(xì)胞功能調(diào)控有關(guān)。腫瘤細(xì)胞與DC來源的外泌體能夠介導(dǎo)抗原特異性T細(xì)胞活化和免疫活性改變[21]。被腫瘤細(xì)胞激活的DC產(chǎn)生的外泌體，能在小鼠體內(nèi)以MHCⅠ依賴的方式促進(jìn)CTL活化，使CD8+T細(xì)胞分化為CTL效應(yīng)細(xì)胞，產(chǎn)生T細(xì)胞依賴性抗腫瘤免疫[22，23]；卵清白蛋白(OVA)特異性T細(xì)胞分泌的外泌體能夠抑制小鼠體內(nèi)OVA激活的樹突狀細(xì)胞，刺激CD8+CTL反應(yīng)，進(jìn)而抑制抗腫瘤免疫[24]。在一些體外實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，腫瘤細(xì)胞來源外泌體還會導(dǎo)致Treg強(qiáng)烈和持續(xù)地生成肌苷[25]，并通過調(diào)控TGF-β和IL-10表達(dá)，來提高Treg的增殖能力，從而增加其對細(xì)胞凋亡的抗性[26,27]。Treg能將miRNA轉(zhuǎn)移到Th1中，抑制Th1增殖和細(xì)胞因子分泌[28]。此外，腫瘤來源外泌體還能夠改變CD4+或CD8+T細(xì)胞的炎性因子表達(dá)[20]。

從這些研究中我們可以看出，T細(xì)胞的分化可受到來自MSC、DC、腫瘤細(xì)胞、肥大細(xì)胞、上皮細(xì)胞等多種來源外泌體的影響。同時，來自腫瘤細(xì)胞、DC、Treg和被激活的T細(xì)胞能夠調(diào)控受體T細(xì)胞的狀態(tài)，包括調(diào)節(jié)細(xì)胞活性、CTL反應(yīng)及改變細(xì)胞因子表達(dá)等。

2.3外泌體對B細(xì)胞狀態(tài)與功能的影響 作為機(jī)體免疫中重要的效應(yīng)細(xì)胞，B細(xì)胞的細(xì)胞膜表面帶有多種類型的受體，在體液免疫過程中，B細(xì)胞能夠分化為漿細(xì)胞，并分泌特異性抗體。有研究顯示，外泌體能通過淋巴管迅速地從周邊傳輸?shù)搅馨徒Y(jié)，而淋巴結(jié)中的B細(xì)胞則是外泌體的主要攝取者之一[29]。

在體外共培養(yǎng)條件下，MSC細(xì)胞衍生的外泌體能夠抑制B細(xì)胞的炎癥作用，并影響B(tài)細(xì)胞的分化[30]；骨髓基質(zhì)細(xì)胞來源外泌體也可抑制慢性淋巴細(xì)胞白血病B細(xì)胞的自發(fā)凋亡，并增強(qiáng)其耐藥性和遷移能力[31]；而DC來源的外泌體也能夠通過補(bǔ)體激活和抗原穿梭的方式參與介導(dǎo)T細(xì)胞和B細(xì)胞的激活，誘導(dǎo)抗腫瘤免疫[32]。腫瘤細(xì)胞來源的外泌體能夠通過脂質(zhì)筏/膽固醇內(nèi)吞途徑來刺激人B細(xì)胞[33]，并增強(qiáng)B細(xì)胞的增殖與向漿細(xì)胞的分化[34]。

而當(dāng)B細(xì)胞受到病毒的侵染時，外泌體還會作為載體，調(diào)控B細(xì)胞的狀態(tài)并參與物質(zhì)運(yùn)輸。如EB病毒感染的B細(xì)胞能夠被人口腔上皮細(xì)胞分泌的富含miR-200家族成員的外泌體觸發(fā)激活，并促進(jìn)B細(xì)胞與口腔上皮細(xì)胞間的病毒交換[35]。

通過這些研究可知，來自MSC、DC、腫瘤細(xì)胞、上皮細(xì)胞等細(xì)胞的外泌體能夠改變B細(xì)胞的分化、激活、增殖和凋亡，并影響其耐藥性和遷移能力。

2.4外泌體對樹突狀細(xì)胞調(diào)控和表達(dá)的影響 樹突狀細(xì)胞(DC)分為髓樣DC和淋巴樣DC，是一種功能強(qiáng)大的抗原遞呈細(xì)胞，與腫瘤的產(chǎn)生和發(fā)展有著緊密聯(lián)系。在這一過程中，外泌體的作用也不容忽視。

小鼠體內(nèi)的腫瘤細(xì)胞能夠分泌攜帶腫瘤抗原、LAMP1、OVA和pMHCⅠ等分子的外泌體，并轉(zhuǎn)移到DC中，引發(fā)DC的抗腫瘤免疫[22，36]。而DC的抗腫瘤免疫過程也是通過外泌體實(shí)現(xiàn)的。胰腺癌細(xì)胞株的體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞外泌體能夠?qū)iRNA轉(zhuǎn)移到DC中，改變DC的miRNA表達(dá)并抑制調(diào)節(jié)因子X相關(guān)蛋白(rFXAP)產(chǎn)生，這可能是導(dǎo)致MHCⅡ分子抑制和免疫耐受的原因[37]；同來源的外泌體也能下調(diào)DC中的TLR4和下游細(xì)胞因子[38]。

此外，DC也可以接受來自B細(xì)胞的外泌體并調(diào)控T細(xì)胞的分化；T細(xì)胞能夠利用攜帶含有基因組或線粒體DNA的外泌體，通過cGAS/STING胞質(zhì)DNA傳感通路與IRF3依賴性干擾素調(diào)節(jié)基因的表達(dá)，誘導(dǎo)DC的抗病毒反應(yīng)[39]。

以上研究表明，DC能夠被來自腫瘤細(xì)胞和其他免疫細(xì)胞的外泌體調(diào)控。這些外泌體能通過傳遞抗原、miRNA等多種物質(zhì)，影響DC的增殖、活化以及細(xì)胞因子和miRNA的表達(dá)。

2.5外泌體對NK細(xì)胞腫瘤殺傷作用的影響 自然殺傷細(xì)胞(Natural killer cell，NK)是先天免疫細(xì)胞，其在機(jī)體防御的第一線尤其是腫瘤殺傷過程中起關(guān)鍵作用。而外泌體可顯著影響NK細(xì)胞殺傷作用。

眾多體外實(shí)驗(yàn)表明，腫瘤細(xì)胞來源外泌體可通過攜帶的IL-15、IL-18等細(xì)胞因子以及4-1BBL蛋白類似物，促進(jìn)NK細(xì)胞的活化與增殖，增強(qiáng)其敏感性與抗腫瘤效力[40，41]；也可攜帶NF-κB-α激活激酶相關(guān)蛋白1(NAP-1)，通過增加NK細(xì)胞中干擾素調(diào)節(jié)因子3(IRF-3)的表達(dá)及其磷酸化，來提升Ⅰ型干擾素基因和趨化因子配體基因的表達(dá)，促進(jìn)NK細(xì)胞的功能[42]。而這些外泌體攜帶的TGFβ1，能夠下調(diào)NK細(xì)胞NKG2D受體表達(dá)，誘導(dǎo)NK細(xì)胞中Smad磷酸化[19]；或利用miR210和miR-23α等miRNA，直接影響NK細(xì)胞中CD107a和IFNg的表達(dá)，降低其細(xì)胞毒性與抗腫瘤活性[43]；腫瘤來源外泌體還能抑制NK細(xì)胞活化受體表達(dá)，來降低NK細(xì)胞的腫瘤殺傷作用[40]。DC則通過分泌表達(dá)白細(xì)胞介素-15Ra和NKG2D配體的外泌體，直接參與IL-15Ra與NKG2D依賴的NK細(xì)胞增殖和活化，促進(jìn)分泌IFNc[44]。

由此可見，NK細(xì)胞能夠受到腫瘤細(xì)胞和DC來源的外泌體調(diào)控。其中腫瘤細(xì)胞來源的外泌體能起到雙向調(diào)控的作用。一方面，這些外泌體能夠激活NK細(xì)胞，促進(jìn)其增殖，并提高對腫瘤細(xì)胞的殺傷；另一方面，也可通過抑制細(xì)胞毒性而逃避免疫監(jiān)視。而DC來源的外泌體主要對NK細(xì)胞起到激活作用，并促進(jìn)NK細(xì)胞的增殖。

3 免疫細(xì)胞來源外泌體對其他細(xì)胞的功能

外泌體除了能調(diào)控免疫細(xì)胞功能外，還是免疫細(xì)胞功能調(diào)控的執(zhí)行者。免疫細(xì)胞來源的外泌體能夠調(diào)控包括免疫細(xì)胞、上皮細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞等多種受體細(xì)胞并改變微環(huán)境。進(jìn)而對整個免疫應(yīng)答造成影響。

3.1巨噬細(xì)胞來源外泌體在機(jī)體免疫應(yīng)答及調(diào)控過程中的作用 作為非特異性免疫的重要效應(yīng)細(xì)胞和抗原呈遞細(xì)胞，巨噬細(xì)胞也可利用外泌體釋放信號。這些信號隨著其所在微環(huán)境和受到刺激的不同而改變，當(dāng)受到結(jié)核分枝桿菌、沙門氏菌、弓形蟲、艾滋病毒等病原體的感染和一些外來抗原的刺激時，巨噬細(xì)胞釋放的外泌體能攜帶病原體相關(guān)的分子模式受體(PAMPs)[45]，同時會導(dǎo)致外泌體中miRNA的種類與含量發(fā)生變化[46]。

一些體外實(shí)驗(yàn)表明，從鼠傷寒沙門氏菌感染的巨噬細(xì)胞中分泌的促炎外泌體能觸發(fā)幼稚巨噬細(xì)胞和DC Toll樣受體4依賴性的TNF-α釋放，以及其他多種細(xì)胞因子的分泌，這可能與外泌體中包含的LPS有關(guān)[47]；而LPS對巨噬細(xì)胞的激活也能通過影響其釋放的外泌體中miRNA與蛋白表達(dá)，引起脂肪細(xì)胞基因表達(dá)的改變。這些變化與補(bǔ)體活化、活性氧種類調(diào)節(jié)、白細(xì)胞遷移與活化、單核細(xì)胞趨化等炎癥反應(yīng)有關(guān)，也對碳水化合物的分解代謝和細(xì)胞活化產(chǎn)生影響[48]。同時在利用病原菌感染小鼠的研究中發(fā)現(xiàn)，有的病原菌如結(jié)核分枝桿菌,其感染的巨噬細(xì)胞能夠通過外泌體的途徑呈遞抗原，并能協(xié)同ATP促進(jìn)MHC-Ⅱ的釋放，通過外泌體向T細(xì)胞表達(dá)抗原肽，這在促進(jìn)T細(xì)胞免疫的過程中起重要作用[49，50]；而在病原體的刺激下，巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的外泌體能夠促進(jìn)TNF-α和IL-12的產(chǎn)生以及中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的募集，這可能是免疫激活的一部分[45]。

關(guān)于巨噬細(xì)胞來源外泌體對上皮細(xì)胞的影響，體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，巨噬細(xì)胞釋放的外泌體能夠刺激內(nèi)皮細(xì)胞中的整合素向溶酶體轉(zhuǎn)運(yùn)，誘導(dǎo)整合素蛋白降解，進(jìn)而對內(nèi)皮細(xì)胞的遷移起到負(fù)調(diào)節(jié)作用[51]；在LPS誘導(dǎo)的膿毒性肺損傷小鼠模型中，被LPS激活的巨噬細(xì)胞釋放的外泌體中，促炎性miRNA(miRNA-155、miRNA-146a)表達(dá)上調(diào)，使上皮細(xì)胞中的促炎介質(zhì)TNF-α與IL-6表達(dá)增加，進(jìn)而破壞支氣管上皮細(xì)胞緊密連接蛋白的表達(dá)，對肺部的結(jié)構(gòu)屏障造成破壞[52]。有研究者嘗試在體外將巨噬細(xì)胞來源的外泌體作為載體承載miRNA抑制劑，發(fā)現(xiàn)其能夠調(diào)控腫瘤細(xì)胞中的miRNA表達(dá)水平[53]。這可能會成為腫瘤治療的一種新方式。

以上結(jié)果表明，巨噬細(xì)胞來源的外泌體能作用于其他免疫細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、上皮細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞，發(fā)揮著抗原呈遞、免疫調(diào)節(jié)及代謝調(diào)控等作用。

3.2T細(xì)胞來源外泌體的腫瘤殺傷及免疫激活作用 在T細(xì)胞中，外泌體的釋放受到二酰基甘油和二?；视图っ?Diacylglycerol kinase α，DGKα)的調(diào)節(jié)，DGKα能夠調(diào)控PKD1/2的亞細(xì)胞定位與激活，PKD1/2是外泌體分泌的關(guān)鍵調(diào)節(jié)分子，介導(dǎo)DGKα對外泌體分泌通道的影響[39]。而這些外泌體在體外能夠發(fā)揮多種作用。

大鼠體內(nèi)OVA抗原特異性的T細(xì)胞外泌體能夠抑制DC對CD8+T細(xì)胞的刺激，進(jìn)而抑制DC介導(dǎo)的大鼠CD8+CTL糖尿病和抗腫瘤免疫[24]。而在小鼠體內(nèi)，Treg來源的外泌體還能將miRNA轉(zhuǎn)移到Th1細(xì)胞中，抑制Th1細(xì)胞增殖和細(xì)胞因子分泌[28]。體外實(shí)驗(yàn)表明，CTL能通過外泌體來釋放TNF超家族，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞死亡[54]。在脾和淋巴結(jié)部位衍生的Ts則能分泌抑制性外泌體，調(diào)節(jié)免疫炎癥反應(yīng)外周組織部位抗原遞呈細(xì)胞和效應(yīng)T細(xì)胞功能[55]。受到LPS刺激的Treg衍生的外泌體能攜帶miR1505p和miR-142-3p調(diào)控DC，使IL-10過表達(dá)并抑制IL-6表達(dá)來抑制免疫反應(yīng)，這可能有助于治療自身免疫性疾病[56]。而在受到腺病毒基因刺激時，Treg會分泌含有獨(dú)特的miRNAs和iNOS分子的外泌體。其能誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，并促進(jìn)T細(xì)胞向Treg的轉(zhuǎn)化[57]。

通過這些研究可知，T細(xì)胞來源外泌體能夠作用于DC、腫瘤細(xì)胞、抗原遞呈細(xì)胞和其他T細(xì)胞，其功能包括激活T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性和殺傷作用以及多種免疫調(diào)節(jié)過程。

3.3B細(xì)胞來源外泌體對免疫細(xì)胞的作用 與T細(xì)胞類似，在B細(xì)胞內(nèi)MVB成熟和外泌體分泌的過程中，PKD1/2蛋白扮演著關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子的角色[58]，能夠影響細(xì)胞功能并造成微環(huán)境的改變。

體外研究表明，這些外泌體能夠傳遞miRNA-155來抑制肝細(xì)胞中丙肝病毒的活性[59]，還能攜帶過敏原衍生肽以誘導(dǎo)T細(xì)胞增殖和Th2樣細(xì)胞因子的產(chǎn)生[60]。而一些病毒對B細(xì)胞的感染也會改變其外泌體成分與功能，使之對細(xì)胞代謝產(chǎn)生影響，進(jìn)而改變腫瘤微環(huán)境[61]。同時，B細(xì)胞外泌體能在小鼠體內(nèi)激活特異性T淋巴細(xì)胞、誘導(dǎo)體內(nèi)的細(xì)胞毒性反應(yīng)[62]。

B細(xì)胞淋巴瘤是一組淋巴組織的惡性腫瘤，其特征為B淋巴細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化。B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞來源的外泌體在腫瘤發(fā)生過程中起雙重作用。一方面，來自腫瘤細(xì)胞的外泌體能將腫瘤抗原和MHCⅠ類分子傳遞給樹突狀細(xì)胞，然后通過誘導(dǎo)CD8+T細(xì)胞依賴性的抗腫瘤免疫應(yīng)答，直接抑制惡性腫瘤的發(fā)生[63]；而另一方面也能誘導(dǎo)免疫細(xì)胞的凋亡，并通過抑制NKG2D受體介導(dǎo)的細(xì)胞毒性，從而損害NK細(xì)胞功能[64]。對外泌體在B細(xì)胞淋巴瘤中的作用研究，為淋巴瘤的抑制和治療提供了新思路。

通過對這些研究的總結(jié)可知，來自B細(xì)胞的外泌體可以作用于肝細(xì)胞、T細(xì)胞、DC及NK細(xì)胞，影響細(xì)胞的激活、代謝與凋亡。

3.4樹突狀細(xì)胞來源的外泌體及其功能 DC來源的外泌體主要通過激活其他免疫細(xì)胞來發(fā)揮功能，作為免疫調(diào)節(jié)的一種重要途徑，能夠在細(xì)菌、寄生蟲、病毒的感染和抗腫瘤過程中發(fā)揮作用。

通過對小鼠的研究發(fā)現(xiàn)，被腫瘤激活的DC釋放的外泌體，在體外和體內(nèi)均能刺激CD8 T細(xì)胞增殖，并傳遞抗原物質(zhì)與功能性MHC-肽復(fù)合物，有效地誘導(dǎo)特異性CTL反應(yīng)、抗腫瘤免疫和CD8 T細(xì)胞記憶[36，65]；而在寄生蟲感染過程中，受到抗原刺激的DC能夠通過外泌體的方式抵抗炎癥反應(yīng)[66]。同時，DC來源的外泌體能利用功能性IL-15與NKG2D配體直接介導(dǎo)NK細(xì)胞的活化[45]，或通過攜帶TNF超家族配體激活NK細(xì)胞TNF-γ的分泌，并能在腫瘤細(xì)胞表面表達(dá)TNF、FasL和TRAIL，從而觸發(fā)腫瘤細(xì)胞Caspase的活化和凋亡[67]。體外研究則表明，DC來源的外泌體也能夠促使NK細(xì)胞的增殖與分泌IFNc，抑制腫瘤的轉(zhuǎn)移[68]；還能與細(xì)菌Toll樣受體配體結(jié)合，對未活化的DC有著強(qiáng)烈的激活作用[69]。此外，DC來源的外泌體也會幫助病原體入侵機(jī)體。HIV-1會通過刺激樹突狀細(xì)胞免疫受體，來抑制外泌體從DC中釋放，并改變外泌體內(nèi)容物的成分，使之富含促凋亡分子DAP-3，以增加CD4+T淋巴細(xì)胞的凋亡[70]。此外，DC來源的外泌體也可能與朊病毒的體內(nèi)傳播有關(guān)[71]。

DC來源的外泌體能對T細(xì)胞、B細(xì)胞、NK細(xì)胞以及未激活的DC起作用，其作用包括參與免疫激活、免疫調(diào)控與抗腫瘤作用。DC來源外泌體功能的多樣性也為研究者們提供了靶向給藥的新思路。

3.5NK細(xì)胞來源外泌體的抗腫瘤作用 NK細(xì)胞的殺傷作用主要有兩種機(jī)制：①釋放穿孔素和顆粒酶，通過增加凋亡小體的形成和caspase-3激活而誘導(dǎo)內(nèi)在凋亡途徑；②涉及caspase-8a的外源性凋亡途徑。NK細(xì)胞主要通過表達(dá)FasL和穿孔素等殺傷蛋白發(fā)揮細(xì)胞毒性作用，參與抗腫瘤和免疫穩(wěn)態(tài)的調(diào)節(jié)。而NK細(xì)胞在靜息和激活條件下都會釋放出外泌體，能夠作為FasL、顆粒酶B、穿孔素與TNF-α的載體，將其分泌到細(xì)胞外[72，73]。同時體外實(shí)驗(yàn)表明，這些外泌體能攜帶NK細(xì)胞的標(biāo)記蛋白CD56，可能參與促進(jìn)外泌體與靶細(xì)胞的黏附，對不同的腫瘤靶細(xì)胞和活化的免疫細(xì)胞發(fā)揮細(xì)胞毒活性[74]。NK細(xì)胞分泌的攜帶TNF-α的外泌體還能夠在腫瘤處特異性聚集，在體外和體內(nèi)均對膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞有靶向和抗腫瘤作用[72]。并且NK細(xì)胞也會利用外泌體來激活其他NK細(xì)胞的活性，并傳遞殺傷物質(zhì)。

根據(jù)目前的報道，NK細(xì)胞作為殺傷腫瘤的重要細(xì)胞，其分泌的外泌體主要作用包括向腫瘤細(xì)胞靶向傳遞殺傷物質(zhì)以及免疫激活，發(fā)揮抗腫瘤功能。

4 展望

外泌體作為一種廣泛存在于細(xì)胞間的信息傳遞方式，由于其迅速和直接跨膜的特性而受到廣泛關(guān)注。隨著研究的深入，外泌體在免疫細(xì)胞應(yīng)答過程中的作用逐漸被揭示。外泌體在免疫細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞、干細(xì)胞、其他免疫細(xì)胞及一些組織細(xì)胞間的信息傳遞中發(fā)揮作用，調(diào)控機(jī)體免疫和腫瘤抵抗過程，其中也不乏雙向調(diào)控的情況出現(xiàn)。此外，這些機(jī)制也與細(xì)胞代謝和干細(xì)胞分化有關(guān)。深入探討外泌體的免疫調(diào)節(jié)方式及相關(guān)機(jī)制，對進(jìn)一步完善對機(jī)體免疫過程的認(rèn)識具有重要意義，也能夠?yàn)橄嚓P(guān)研究提供參考。