周曉靜 李衛(wèi)鵬

蚌埠醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院核醫(yī)學(xué)科，安徽 蚌埠 233000

毒性彌漫性甲狀腺腫(Graves病)是一種特異性自身免疫疾病，主要表現(xiàn)為甲狀腺激素水平上升，主要特征為甲狀腺自身抗體陽性、彌漫性甲狀腺腫、高甲狀腺素血癥、突眼等。該病發(fā)病機制復(fù)雜，與遺傳、感染、壓力等因素均密切相關(guān)，可引起免疫功能紊亂，并損傷免疫耐受功能，使免疫細(xì)胞、成分破壞自身正常組織結(jié)構(gòu)及功能[1]。但目前，臨床上對自身免疫反應(yīng)發(fā)生的原因尚未完全明確。本研究將分析Th17細(xì)胞、CD4+CD25+FoxP3+T細(xì)胞與Graves病臨床狀態(tài)的相關(guān)性，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年11月—2019年4月，在我院治療的50例Graves病患者，所有患者均符合《內(nèi)科學(xué)》(第7版)的診斷標(biāo)準(zhǔn)。將其中未使用過抗甲狀腺藥物治療的22例患者作為初發(fā)組，其中，男性8例，女性14例，年齡24～50歲，平均年齡(37.59±5.45)歲。將使用抗甲狀腺藥物治療超過6個月、甲狀腺功能恢復(fù)的28例患者作為緩解組，其中，男性9例，女性19例，年齡23～49歲，平均年齡(36.95±6.17)歲。同時，選取同期健康體檢者50例作為對照組，其中，男性17例，女性33例，年齡23～51歲，平均年齡(37.07±6.36)歲。

1.2 方法

初發(fā)組及緩解組Graves病患者、對照組健康人群均予以Th17細(xì)胞、CD4+CD25+FoxP3+T細(xì)胞檢測，指定同一名高年資、高職稱實驗室檢驗人員嚴(yán)格按照儀器設(shè)備及試劑相關(guān)要求完成操作。

1.2.1CD4+CD25+FoxP3+T細(xì)胞檢測 利用FITC對抗CD4抗體予以標(biāo)記、PE-Cy5對抗CD25抗體予以標(biāo)記、PE對抗FoxP3抗體予以標(biāo)記、PerCP對抗CD3抗體予以標(biāo)記，PE對抗FoxP3抗體同型對照予以標(biāo)記，上述抗體均由BD公司提供。細(xì)胞內(nèi)染FoxP3分子方法如下：將分離獲得淋巴細(xì)胞首先加入CD3抗體、CD4抗體、CD25抗體(上述抗體分別由PerCP、FITC、PE-Cy5標(biāo)記)，之后經(jīng)固定、破膜30 min后加入FoxP3抗體(經(jīng)PE標(biāo)記)。細(xì)胞標(biāo)記完成后利用流式細(xì)胞儀(由BD公司提供，型號：FACS Caliber)檢測及配套專用軟件(版本號：Cellquest 3.0)分析。

1.2.2Th17細(xì)胞檢測 利用酶聯(lián)免疫吸附實驗(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)檢測Th17細(xì)胞相關(guān)因子IL-17(白介素-17，Interleukin-17)水平，人IL-17 ELISA試劑盒由Biosource公司提供，實驗中設(shè)立陰性、空白對照。

1.3 評價標(biāo)準(zhǔn)

對比各組患者的CD4+CD25+FoxP3+T細(xì)胞Treg細(xì)胞、Th17細(xì)胞水平。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié) 果

初發(fā)組患者CD4+CD25+Tr細(xì)胞水平明顯低于對照組，Th17細(xì)胞高于對照組(P<0.05)；緩解組患者的CD4+CD25+Tr細(xì)胞水平與對照組無明顯差異(P>0.05)，見表1。

表1 各組患者淋巴細(xì)胞亞群水平對比

3 討 論

Graves 病屬于自身免疫性甲狀腺疾病，是導(dǎo)致甲亢的主要原因，占比約為85%。在普通人群中，Graves 病發(fā)病率較低，約為1%，且多為家族聚集性發(fā)病，多見于女性。研究發(fā)現(xiàn)，免疫性甲狀腺疾病免疫病理與細(xì)胞因子具有相關(guān)性，對甲狀腺細(xì)胞，細(xì)胞因子具有免疫調(diào)節(jié)、免疫穩(wěn)定等作用。細(xì)胞因子對炎癥、內(nèi)分泌、免疫均具有調(diào)節(jié)作用，例如白細(xì)胞介素(IL)、干擾素(IFN)、集落刺激因 子(CSF)、腫瘤壞死因子(TNF)等，當(dāng)細(xì)胞因子失衡后，可引起免疫功能紊亂，并導(dǎo)致甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞分化異常。

CD4+CD25+Tr具有維持免疫穩(wěn)態(tài)的作用，可對機體免應(yīng)答進(jìn)行負(fù)調(diào)節(jié)，避免產(chǎn)生自身免疫，是預(yù)防自身免疫性疾病的重要細(xì)胞，當(dāng)其數(shù)量、功能、分子表達(dá)發(fā)生異常時，均可能誘發(fā)自身免疫病。有研究證明，系統(tǒng)性紅斑狼瘡、1型糖尿病患者均存在CD4+CD25+Tr細(xì)胞水平下降情況。Th17細(xì)胞是CD4+T 細(xì)胞亞群，其功能受多種細(xì)胞因子調(diào)節(jié)。研究發(fā)現(xiàn)[2]，人體Th17細(xì)胞分化為IL-113 、TGF-β共同誘導(dǎo)，并會受IL6 增強。已有研究證實[3]，Th17 細(xì)胞可分泌IL-17，在感染性疾病、自身免疫性疾病發(fā)病過程中具有參與。有學(xué)者指出[4-5]，Th17 細(xì)胞功能及分化與CD4+CD25+Tr存在相互抑制的關(guān)系，在維持免疫防御、免疫穩(wěn)態(tài)方面發(fā)揮了重要作用。在本次研究中，CD4+CD25+Tr細(xì)胞水平明顯低于對照組，Th17細(xì)胞高于對照組，(P<0.05)，提示CD4+CD25+Tr、Th17在Graves病發(fā)病、發(fā)展過程中具有參與。從Graves病發(fā)生機制上看，主要為免疫系統(tǒng)識別自己或非己的機制異常引起，部分自身反應(yīng)性T細(xì)胞可識別外周組織抗原，并破壞正常組織結(jié)構(gòu)及功能，從而引起自身免疫反應(yīng)。從本次研究結(jié)果上看，初發(fā)Graves病患者的CD4+CD25+Tr水平明顯低于正常人，而Th17細(xì)胞水平高于正常人，表明在發(fā)病過程中，CD4+CD25+Tr細(xì)胞處于缺乏狀態(tài)，而Th17細(xì)胞大量產(chǎn)生，導(dǎo)致免疫穩(wěn)定失調(diào)。經(jīng)過一段時間治療后，CD4+CD25+Tr水平有所上升，但仍低于正常人，表明患者盡管甲狀腺功能恢復(fù)，但免疫系統(tǒng)尚未完全恢復(fù)。以往有研究顯示[6]，Graves病患者的CD4+CD25+Tr細(xì)胞水平明顯低于正常人，且效應(yīng)因子TGF-β、FoxP3 表達(dá)也低于正常人，認(rèn)為CD4+CD25+Tr數(shù)量減少可能在Graves病發(fā)病過程中扮演了重要角色，與本次研究結(jié)果一致。

綜上所述，CD4+CD25+Tr、Th17可能參與了Graves病發(fā)病過程。