王中華，竇志英，王 洋，陳 濤，王遠(yuǎn)志

（1.天津中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥學(xué)部，天津 300193；2.天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津 301617；3.南開(kāi)大學(xué)經(jīng)濟(jì)學(xué)院，天津 300071）

熟地黃在中醫(yī)臨床使用廣泛，是補(bǔ)精益髓、養(yǎng)血滋陰的要藥，也是配伍組方使用頻率較高的中藥品種之一，主要應(yīng)用于心悸、失眠、血虛萎黃、月經(jīng)不調(diào)、眩暈、崩漏等病的治療。其藥典中規(guī)定的指標(biāo)性成分“毛蕊花糖苷”是地黃中苯乙醇苷類(lèi)的主要化合物，現(xiàn)代藥理學(xué)認(rèn)為其具有肝臟保護(hù)及抑制胸主動(dòng)脈的血管收縮作用[1]。由于熟地黃炮制后的藥性由微寒轉(zhuǎn)微溫，補(bǔ)益滋膩之性增強(qiáng)，其性易滋膩滯脾，有礙消化，故脾胃虛弱、氣滯痰多、脘腹脹滿(mǎn)及食少便溏者忌服，因此限制了其臨床應(yīng)用范圍。當(dāng)前由于市場(chǎng)化需求及成本、人工、工藝等方面的問(wèn)題，熟地黃主要有兩種常規(guī)炮制方法[2]：1）將生地黃用酒拌后，火燉至酒吸盡，取出晾曬至外皮黏液稍干，切厚片，干燥即得。2）將生地直接蒸至斷面顯黑潤(rùn)，曬至八成干后切厚片，干燥即得。兩種方法都需要將地黃蒸煮至斷面烏黑色，一般需要蒸1～2 次，曬干后的熟地黃柔軟、黏性強(qiáng)、味甜，溫性增強(qiáng)。

目前針對(duì)熟地黃常規(guī)炮制的研究較多，但基于中醫(yī)藥藥性理論及配伍原則，采用不同藥材或輔料復(fù)合炮制的研究較少。同時(shí)缺乏相應(yīng)的炮制規(guī)范及其指標(biāo)性成分的含量分析與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，本次研究尚屬首次探索。所以根據(jù)熟地黃臨床用藥的特點(diǎn)，針對(duì)目前飲片市場(chǎng)上缺乏供應(yīng)的情況，而臨床又有治療使用需求的熟地黃炮制品種，采用新型的炮制工藝，其中陳皮制熟地黃、砂仁制熟地黃（酒蒸法），選用主產(chǎn)地的生藥材，借鑒并參考地方炮制規(guī)范和古籍文獻(xiàn)中的方法，逐級(jí)分步炮制。同時(shí)采用砂仁制熟地黃（拌制法），來(lái)考察日常中藥市場(chǎng)上供應(yīng)的常規(guī)炮制的熟地黃飲片再次復(fù)合炮制后的含量變化及可行性分析。以2015 版《中華人民共和國(guó)藥典》[3]（簡(jiǎn)稱(chēng)《中國(guó)藥典》）中規(guī)定的熟地黃性狀及毛蕊花糖苷的含量標(biāo)準(zhǔn)（≥0.020%）為檢測(cè)指標(biāo)。為提高檢測(cè)精度和速度，采用超高壓液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（UPLC-MS）法進(jìn)行含量檢測(cè)，并結(jié)合其性狀評(píng)分進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)，結(jié)果使用SPSS 22.0 數(shù)據(jù)分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

1 材料

1.1 儀器 美國(guó)Waters 公司液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)UPLC（I-Class）-MS（XEXO TQD），MassLynx V4.1 工作站；離心機(jī)：Thermo LEGEND MICRO 17R，Precisa 水分測(cè)定儀（XM60/120，廣州合華科技有限公司），電子分析天平（型號(hào)：AL204，分度值0.000 1 g，梅特勒-托利多儀器有限公司上海分公司），單列六孔電熱恒溫水浴鍋（TWS-16，上海喆圖科學(xué)儀器有限公司），玻璃儀器等。

1.2 藥材、標(biāo)準(zhǔn)品、試劑

1.2.1 藥材 地黃（Rehmannia glutinosaLibosch.）藥材（2017 年10—12 月采收自河南焦作，個(gè)子貨約40 頭/kg，直徑約為2～4 cm，長(zhǎng)約6～14 cm，大小均勻，性狀呈不規(guī)則的紡錘形，表面呈棕黃色至黃棕色，外表皮皺縮且具有許多不規(guī)則的橫紋，體重，質(zhì)地較軟而具有韌性，不容易折斷，斷面棕黃色，稍有黏性，氣味微甜而稍帶酸苦味，經(jīng)天津中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院陳濤主任藥師鑒定為玄參科植物地黃干燥塊根）；砂仁（Amomum villosumLour.）飲片（產(chǎn)地云南，批號(hào)171004，經(jīng)陳濤主任藥師鑒定為姜科植物陽(yáng)春砂的干燥成熟果實(shí)）；陳皮（Citrus reticu1ataBlanco.）飲片（產(chǎn)地浙江，批號(hào)171001，經(jīng)陳濤主任藥師鑒定為蕓香科植物橘的干燥成熟果皮）；熟地黃（Rehmannia glutinosaLibosch.）飲片（產(chǎn)地河南，批號(hào)170901，經(jīng)陳濤主任藥師鑒定為玄參科植物地黃干燥塊根，為地黃的炮制加工品）。以上藥材均由河北安國(guó)普天和中藥飲片有限公司提供。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)品 毛蕊花糖苷標(biāo)準(zhǔn)品（規(guī)格：20 mg，國(guó)家批號(hào)：111530-201713，ID：RY59-K596，中國(guó)食品藥品檢定研究院，標(biāo)注純度以麥角甾苷計(jì)為92.50%）

1.2.3 試劑 甲醇色譜級(jí)（批號(hào)：181024，天津市化學(xué)試劑供銷(xiāo)公司第二分公司），紹興花雕黃酒（批號(hào)：20170308，浙江谷越龍山紹興酒股份有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 炮制方法 參考江西、河南、貴州、上海等省市《中藥飲片炮制規(guī)范》[4-7]《實(shí)用中藥手冊(cè)》[8]及《全國(guó)中藥炮制規(guī)范》1988 版[9]中熟地黃的炮制方法。具體炮制方法如下。

2.1.1 陳皮制熟地黃 取地黃藥材1 000 g，搶水洗凈備用。取陳皮飲片100 g，加冷水浸泡30 min，因陳皮是芳香之品不宜久煎，先武火后文火，以水開(kāi)后記時(shí)，煎煮2 次，每次約20 min，過(guò)濾殘?jiān)鼔赫ズ笕≈喜? 次濾液，陳皮的濾液以完全能淹沒(méi)地黃藥材為宜（地黃與陳皮的用量比例10∶1）。

取洗凈備用的地黃與陳皮濾液混合拌勻，置陶瓷鍋內(nèi)蓋嚴(yán)鍋蓋，武火加熱并開(kāi)始記錄時(shí)間，至沸騰后改用文火保持微沸，加熱期間要注意鍋內(nèi)水量變化，不足時(shí)應(yīng)補(bǔ)充開(kāi)水，以防藥材焦化，連續(xù)燉制48 h（至藥材烏黑發(fā)亮，味轉(zhuǎn)甜時(shí)）后停止加熱，然后用余溫再加蓋悶制12 h（鍋內(nèi)應(yīng)保持適量的汁液，供藥材在悶制過(guò)程中充分吸收）。炮制期間每隔4 h提取20 g 熟地黃樣品（樣品編號(hào)為A0～A15），所提樣品取出后切約0.4 cm 厚片，置陰涼干燥處晾干備用。

2.1.2 砂仁制熟地黃（酒蒸法） 取地黃藥材1 000 g、紹興花雕黃酒300 g、砂仁10 g（打碎成末），首先將地黃搶水洗凈后與黃酒拌勻，置隔水蒸鍋內(nèi)，隔水加熱蒸制2 次。第1 次蒸制12 h 后停止加熱，燜12 h。在第2 次蒸制前拌入砂仁末（地黃與砂仁用量比例為100∶1），第2 次蒸制12 h 后，停止加熱，再燜24 h。炮制后的熟地黃內(nèi)外烏黑發(fā)亮，有黏性，斷面呈菊花芯或針刺孔狀。炮制過(guò)程中每隔4 h 提取20 g 熟地黃樣品（樣品編號(hào)為B0～B15），所提樣品取出后切約0.4 cm 厚片，置陰涼干燥處晾干備用。

2.1.3 砂仁制熟地黃（拌制法） 選取飲片市場(chǎng)中經(jīng)質(zhì)量檢驗(yàn)合格的熟地黃飲片1 000 g，切制成約0.4 cm 厚片，以其性狀色澤光黑油潤(rùn)如漆，味甘如飴，軟硬適中，斷面有菊花芯或有似針刺孔狀為標(biāo)準(zhǔn)。炮制時(shí)首先用砂仁20 g（打碎成末）與其充分混合拌勻（熟地黃與砂仁用量為50∶1），然后置瓷缸內(nèi)加蓋密閉備用，每隔2 d 提取20 g 熟地黃樣品（樣品編號(hào)為C0～C15），所提樣品置陰涼干燥處晾干備用。

2.2 檢測(cè)指標(biāo) 依據(jù)《中國(guó)藥典》2015 版一部，熟地黃項(xiàng)下，水分含量不得超過(guò)15%，按干燥品計(jì)算，毛蕊花糖苷（C29H36O15）含量不得少于0.020%。

2.3 水分檢測(cè) 熟地黃樣品進(jìn)行水分檢測(cè)時(shí)，采用Precisa 水分測(cè)定儀（XM60/120）進(jìn)行快速測(cè)定，其水分測(cè)定儀的原理[10]是利用紅外的強(qiáng)穿透力以及加熱效應(yīng)將樣品的水分快速蒸發(fā)，以加熱前后樣品的質(zhì)量計(jì)算差值，得到樣品水分含量，其紅外干燥效率要遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于烘箱干燥效率，相比藥典烘箱烘干法，時(shí)間快、操作簡(jiǎn)單、測(cè)量準(zhǔn)確。在預(yù)實(shí)驗(yàn)時(shí)，取3 份生地粗粉，先用水分測(cè)定儀測(cè)定水分，再用藥典方法進(jìn)行測(cè)定，其結(jié)果近似，為提高效率，故本實(shí)驗(yàn)采用水分測(cè)定儀來(lái)測(cè)量熟地黃各樣品的水分含量。

操作方法：取熟地黃炮制過(guò)程中提取的各樣品，粉碎過(guò)2 號(hào)篩，精密稱(chēng)取10 g 均勻平鋪于水分測(cè)定儀的托盤(pán)中，啟動(dòng)檢測(cè)程序分別讀取各樣品數(shù)值，每個(gè)樣品檢測(cè)3 次，并計(jì)算平均值及RSD 值。2015 版《中國(guó)藥典》規(guī)定熟地黃水分不得＞15%，各樣品水分含量均符合藥典標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 地黃炮制過(guò)程中各樣品水分含量檢測(cè)結(jié)果Tab.1 Test results of moisture content in processing of Dihuang %

2.4 熟地黃性狀評(píng)價(jià) 依據(jù)2015 版《中國(guó)藥典》熟地黃項(xiàng)下的性狀描述以及傳統(tǒng)炮制的質(zhì)量鑒別標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)各實(shí)驗(yàn)樣品進(jìn)行性狀評(píng)價(jià)（8 分為合格，9 分為優(yōu)秀，10 分為最佳），評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)表2。結(jié)果顯示陳皮制熟地黃（樣品編號(hào)A0～A15）隨著炮制時(shí)間的不斷增加，評(píng)分逐漸提高，逐步接近地黃藥典和傳統(tǒng)炮制黑如漆、甜如飴的性狀標(biāo)準(zhǔn)，至40 h 時(shí)分值達(dá)到最高，至52 h 后分值才開(kāi)始略有下降并維持至炮制結(jié)束。砂仁制熟地黃（酒蒸法，樣品編號(hào)B0～B15）隨著炮制時(shí)間的不斷增加，性狀評(píng)分逐漸提高，其分值最高階段，是在炮制超過(guò)36 h 時(shí)后（即拌入砂仁又蒸制12 h 以后）。砂仁制熟地黃（拌制法，樣品編號(hào)C0～C15）其炮制前后性狀未發(fā)生明顯變化，性狀評(píng)分相同。

表2 性狀評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)Tab.2 Trait evaluation criteria

2.5 毛蕊花糖苷的檢測(cè)

2.5.1 色譜條件 流動(dòng)相：A：0.1%甲酸水溶液，B：0.1%甲酸乙腈溶液；流速：0.4 mL/min；色譜柱：Waters ACQUITY UPLC HSS T3，2.1 mm×100 mm，1.8 μm；柱溫：35 ℃；樣品室溫度：10 ℃；進(jìn)樣量：1 μL；梯度洗脫程序結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 毛蕊花糖苷梯度洗脫程序Tab.3 Gradient elution program of Verbascoside glycoside

2.5.2 質(zhì)譜條件 毛蕊花糖苷的質(zhì)譜檢測(cè)參數(shù)：負(fù)離子掃描模式，MRM 多反應(yīng)檢測(cè)模式；Source Voltages 2.70 KV；Source Temperature：400 ℃；Gas Flow：700 L/Hr；Cone：50 L/Hr；Parention（m/z）：623.2；Daughterion（m/z）Quantitation：161.0；Cone（V）：74；Collision（V）：40。

2.5.3 標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備 精密量取毛蕊花糖苷標(biāo)準(zhǔn)品適量，用甲醇（色譜級(jí)）定容于100 mL 的容量瓶中，配置成含量為10.26 μg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，過(guò)0.22 μm 的濾膜備用。

2.5.4 線(xiàn)性關(guān)系 標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液：取2.5.3 項(xiàng)下制備的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，稀釋配制成1 μg/mL 的儲(chǔ)備液，用甲醇依次稀釋成相應(yīng)濃度的系列混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液：1 000、500、200、100、50、20、10、5、2、1 ng/mL，按照2.5.1 及2.5.2 項(xiàng)下的檢測(cè)條件進(jìn)行檢測(cè)，以標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)（X），峰面積積分值為縱坐標(biāo)（Y），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)并計(jì)算相關(guān)系數(shù)，相關(guān)系數(shù)為r=1，直線(xiàn)方程為Y=2.432 3X-0.838 4，線(xiàn)性范圍為1～1 000 ng/mL，結(jié)果見(jiàn)圖1。

圖1 毛蕊花糖苷標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)Fig.1 Standard curve line of Verbascoside glycoside

2.5.5 樣品溶液的制備 取容量為250 mL 具塞三角瓶，置恒溫干燥箱中60 ℃干燥30 min 至恒重。精密量取粉碎過(guò)2 號(hào)篩的地黃各實(shí)驗(yàn)樣品的粗顆粒約2 g，將已稱(chēng)定的實(shí)驗(yàn)樣品置已知重量的三角瓶中，精密加入純甲醇100 mL（色譜級(jí)）精密稱(chēng)重后，置超聲提取器中40 ℃，40 Hz，240 W 超聲提取1 h，后靜置至室溫稱(chēng)質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足缺失的質(zhì)量，常壓過(guò)濾后的續(xù)濾液密封冷藏備用。

精密量取備用的各樣品續(xù)濾液30 mL，至蒸發(fā)皿內(nèi)水浴60 ℃揮干甲醇至近干，殘?jiān)眉状既芙舛ㄈ萦? mL 的棕色容量瓶中作為儲(chǔ)備液，檢測(cè)時(shí)取儲(chǔ)備液1 mL 用甲醇定容于100 mL 容量瓶中（即樣品溶液稀釋100 倍），得樣品溶液。同時(shí)用純甲醇溶液定容作為空白試劑，各樣品過(guò)0.22 μm 的濾膜，進(jìn)樣量為1 μL。

2.5.6 精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性、準(zhǔn)確度

2.5.6.1 精密度實(shí)驗(yàn) 取同一份已配置的毛蕊花糖苷混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液，按照2.5.1 及2.5.2 項(xiàng)下的檢測(cè)條件檢測(cè)，進(jìn)樣量為1 μL，連續(xù)重復(fù)進(jìn)樣6 次，并記錄峰面積，計(jì)算RSD 值為1.77%，說(shuō)明儀器的精密度良好。

2.5.6.2 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 精密稱(chēng)取同一熟地黃粉末樣品6 份各2 g，按2.5.5 項(xiàng)下樣品溶液制備方法制備，按照2.5.1 及2.5.2 項(xiàng)下的檢測(cè)條件檢測(cè)，進(jìn)樣量為1 μL，記錄峰面積，并計(jì)算樣品含量，其RSD值為2.03%，說(shuō)明該方法的重復(fù)性良好。

2.5.6.3 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 精密稱(chēng)取一份熟地黃粉末樣品2 g，按照2.5.5 項(xiàng)下樣品溶液制備方法制備，按照2.5.1 及2.5.2 項(xiàng)下的檢測(cè)條件檢測(cè)，在相同的色譜條件下分別在0、2、8、12、24 h 進(jìn)行檢測(cè)，進(jìn)樣量為1 μL，記錄峰面積，并計(jì)算樣品含量，其RSD 值為1.96%，說(shuō)明樣品溶液在常溫24 h 內(nèi)穩(wěn)定。

2.5.6.4 準(zhǔn)確度實(shí)驗(yàn) 取已知毛蕊花糖苷含量的同一熟地黃樣品6 份，每份各2 g，按2.5.5 項(xiàng)下的樣品溶液方法制備，精密量取制備后的各樣品溶液1mL，分別加入毛蕊花糖苷標(biāo)準(zhǔn)品溶液（精密量取2.5.4 項(xiàng)下標(biāo)準(zhǔn)品溶液中濃度為500 ng/mL 的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液1 mL），與樣品溶液中毛蕊花糖苷含量的比例約為1∶1，按照2.5.1 及2.5.2 中的檢測(cè)條件檢測(cè)，進(jìn)樣量為1 μL，平均回收率為97.28%，RSD 值為2.48%，結(jié)果見(jiàn)表4。

2.5.7 熟地黃樣品中毛蕊花糖苷的檢測(cè) 取熟地黃各實(shí)驗(yàn)樣品，按照2.5.5 項(xiàng)下進(jìn)行制備，按照2.5.1及2.5.2 項(xiàng)下的檢測(cè)條件檢測(cè)，進(jìn)樣量為1 μL，每個(gè)樣品進(jìn)樣3 次，檢測(cè)結(jié)果換算成實(shí)際濃度，并計(jì)算樣品含量的平均值及含量比例。結(jié)果顯示熟地黃樣品中毛蕊花糖苷的色譜峰與毛蕊花糖苷標(biāo)準(zhǔn)品色譜峰的保留時(shí)間相同，且顯示相同的相對(duì)分子質(zhì)量，結(jié)果見(jiàn)圖2、表5。

表4 加樣回收率實(shí)驗(yàn)Tab.4 Sample recovery rate of experiment

3 分析與討論

本研究采用“相畏為制”的炮制原理，在陳皮制熟地黃的炮制過(guò)程中，借陳皮味苦性溫，行氣、調(diào)中、消痰之功，可緩解地黃炮制后的滋膩之性，起到補(bǔ)而不滯的效果，更好發(fā)揮地黃補(bǔ)血滋陰、益精填髓的作用。而砂仁香燥性溫，為化濕理氣溫脾的要藥，有寬中、下氣、消脹之功，砂仁制熟地黃（酒蒸法）的目的是借砂仁香燥之性，來(lái)抑制或降低熟地黃的滋膩之性，可使熟地黃補(bǔ)而不膩。而且兩種方法炮制后的熟地黃，其性狀都達(dá)到了色黑如漆，味甜如飴的傳統(tǒng)炮制要求。砂仁制熟地黃（拌制法）的炮制特點(diǎn)是將砂仁打碎與常規(guī)法炮制后熟地黃飲片物理混合，并同置一密閉容器內(nèi)，這樣可避免砂仁芳香性成分的散失，最大程度上保留砂仁的藥性，使其更好地發(fā)揮抑制熟地黃滋膩之性的作用，且有利于長(zhǎng)期保存。

本實(shí)驗(yàn)選取的以上炮制方法，遵循古法并符合基本炮制規(guī)范的要求，操作簡(jiǎn)單，炮制時(shí)間較短，節(jié)約能源，炮制效率較高，而且符合臨床使用需求。在含量檢測(cè)時(shí)應(yīng)用超聲提取方法[11]，及UPLC-MS 檢測(cè)技術(shù)[12]，對(duì)指標(biāo)成分的損失少，提取效率高，含量檢測(cè)的時(shí)間短、速度快、精確度高。

目前相關(guān)文獻(xiàn)研究證明，常規(guī)炮制后的熟地黃中毛蕊花糖苷的含量成明顯下降趨勢(shì)，隨著炮制程度的增加其下降幅度劇烈（研究顯示炮制至約30～60 h 時(shí)，其含量下降約40～70%）[13-16]。而《中國(guó)藥典》中要求熟地黃中毛蕊花糖苷的含量比例要≥0.020%，與生地的含量標(biāo)準(zhǔn)相同，缺乏一定的合理性[13]。

本實(shí)驗(yàn)熟地黃炮制前后的性狀評(píng)分變化提示，陳皮制熟地黃與砂仁制熟地黃（酒蒸法）隨著炮制時(shí)間的不斷增加，性狀評(píng)分逐步提高，幾近熟地黃藥典及傳統(tǒng)炮制要求的黑如漆、甜如飴的性狀標(biāo)準(zhǔn)，分析其炮制過(guò)程中性狀變化的原因，應(yīng)與加熱和蒸制時(shí)間及炮制輔料的參與密切相關(guān)。而砂仁制熟地黃（拌制法）其炮制前后的性狀未發(fā)生明顯變化，分析原因應(yīng)為拌制法僅是單純的物理混合，藥材沒(méi)有液體輔料的參與，以及加熱蒸制的過(guò)程，結(jié)果見(jiàn)表5。

圖2 陰性空白（A）、毛蕊花糖苷標(biāo)準(zhǔn)品（B）、熟地黃樣品中毛蕊花糖苷（C）Fig.2 Chromatogram of negative blank（A），standard of Verbascoside glycoside（B），Verbascoside glycoside in Rehmannia sample（C）

表5 熟地黃樣品中毛蕊花糖苷含量與性狀評(píng)分Tab.5 Content and trait evaluation of Verbascoside glycoside in Rehmannia

熟地黃藥典中規(guī)定了毛蕊花糖苷（C29H36O15）的含量比例要求（≥0.020%），通過(guò)表5 發(fā)現(xiàn)所有實(shí)驗(yàn)樣品的毛蕊花糖苷含量均符合藥典標(biāo)準(zhǔn)。其中在陳皮制熟地黃炮制過(guò)程中，毛蕊花糖苷的含量在炮制初始時(shí)有明顯的躍升且達(dá)到較高峰值，而后隨著炮制時(shí)間的增加，維持在相對(duì)平穩(wěn)的水平，接近炮制后期含量仍有明顯提高，至炮制終點(diǎn)時(shí)仍能穩(wěn)定在炮制初期的含量水平，結(jié)果見(jiàn)圖3。對(duì)比表5 的結(jié)果顯示最佳炮制時(shí)間約為52 h 時(shí)（即連續(xù)燉制48 h后再悶4 h），其性狀評(píng)分和毛蕊花糖苷的含量均相對(duì)較高。以藥典中熟地黃毛蕊花糖苷含量標(biāo)準(zhǔn)（≥0.020%）作為參照比值，計(jì)算其單樣本t 檢驗(yàn)值（t=14.224，P＜0.05），證明其差異性非常顯著。實(shí)驗(yàn)證明陳皮制熟地黃可使其炮制后的性狀在達(dá)到藥典及傳統(tǒng)標(biāo)準(zhǔn)的同時(shí)，仍能維持其毛蕊花糖苷的含量在較高水平，并不發(fā)生顯著下降，證明其炮制方法具有一定的科學(xué)性與合理性及應(yīng)用意義。

分析砂仁制熟地黃（酒蒸法），其毛蕊花糖苷的含量在炮制初期下降明顯。當(dāng)?shù)? 次蒸制時(shí)（即拌入砂仁后），毛蕊花糖苷的含量又顯著上升，并維持至36 h 后開(kāi)始逐步下降，結(jié)果見(jiàn)圖3。當(dāng)蒸至36 h時(shí)（即拌入砂仁，第2 次再蒸制12 h 后）毛蕊花糖苷的含量與其性狀評(píng)分均最高，結(jié)果見(jiàn)表5。以藥典中熟地黃毛蕊花糖苷的含量標(biāo)準(zhǔn)（≥0.020%）作為參照比值，計(jì)算其單樣本t 檢驗(yàn)值（t=6.246，P＜0.05），證明整個(gè)炮制過(guò)程中毛蕊花糖苷的含量變化差異性非常顯著。同時(shí)也證明砂仁的參與對(duì)其炮制過(guò)程中毛蕊花糖苷的含量變化產(chǎn)生了顯著的影響，具有一定的科學(xué)性和應(yīng)用意義。

圖3 陳皮制熟地黃、砂仁制熟地黃（酒蒸法）中毛蕊花糖苷含量變化Fig.3 Changes of the content of Verbascoside glycoside in the Tangerine-processed Rehmannia and the Amomumprocessed Rehmannia（wine steaming）

分析砂仁制熟地黃（拌制法），其毛蕊花糖苷的含量整體呈震蕩下降趨勢(shì)，結(jié)果見(jiàn)圖4。其對(duì)應(yīng)的性狀評(píng)分在整個(gè)炮制過(guò)程中沒(méi)有變化，結(jié)果見(jiàn)表5。以藥典中熟地黃毛蕊花糖苷的含量標(biāo)準(zhǔn)（≥0.020%）為參照比值，計(jì)算其單樣本t 檢驗(yàn)值（t=2.577，P＞0.05），證明其含量變化差異性不顯著，說(shuō)明此炮制法中砂仁的參與對(duì)毛蕊花糖苷的含量沒(méi)有明顯的影響。但砂仁拌制后的熟地黃如與群藥配伍組方后共同煎煮，在煎煮過(guò)程中由于加熱時(shí)間、溫度等因素的影響，可能會(huì)對(duì)毛蕊花糖苷的含量產(chǎn)生一定的影響，其炮制方法的合理性及臨床意義還需進(jìn)一步深入研究。

圖4 砂仁制熟地黃（拌制法）中毛蕊花糖苷的含量變化Fig.4 Changes of the content of Verbascoside glycoside in the Amomum-processed Rehmannia（mixed method）

對(duì)比以上3 種炮制方法證明炮制過(guò)程中陳皮制熟地黃的毛蕊花糖苷含量變化波動(dòng)性最大，其炮制方法對(duì)毛蕊花糖苷含量的影響程度最高，相反砂仁制熟地黃（拌制法）含量變化波動(dòng)性最小，對(duì)毛蕊花糖苷含量的影響程度最低。

綜合本實(shí)驗(yàn)的各項(xiàng)結(jié)果可以看出，陳皮制熟地黃與砂仁制熟地黃（酒蒸法）炮制后的熟地黃無(wú)論從性狀質(zhì)量，還是指標(biāo)性成分的含量，均優(yōu)于常規(guī)炮制后的熟地黃。尤其是陳皮制熟地黃對(duì)熟地黃中毛蕊花糖苷的含量有顯著影響，其炮制后毛蕊花糖苷的含量未發(fā)生顯著下降，而且隨著炮制程度的增加在終末期還有相應(yīng)的提高。證明陳皮制熟地黃的炮制法可明顯穩(wěn)定和控制毛蕊花糖苷的下降趨勢(shì)，對(duì)如何有效地保存熟地黃指標(biāo)性成分的研究有實(shí)踐意義，可為其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的進(jìn)一步優(yōu)化提供思路。未來(lái)研究還應(yīng)考慮地黃藥材采收時(shí)的產(chǎn)地、個(gè)頭等級(jí)、儲(chǔ)存時(shí)間等影響因素。

文獻(xiàn)研究還發(fā)現(xiàn)，熟地黃炮制過(guò)程中隨著炮制程度的增加，部分毛蕊花糖苷轉(zhuǎn)化成為異毛蕊花糖苷[14]，兩者成負(fù)相關(guān)性。而本實(shí)驗(yàn)熟地黃炮制中使用的陳皮和砂仁均不含毛蕊花糖苷的相關(guān)成分[17-18]，但富含橙皮苷和乙酸龍腦酯，兩者在熟地黃炮制過(guò)程中對(duì)毛蕊花糖苷的轉(zhuǎn)化是否起到抑制和穩(wěn)定的作用還需進(jìn)一步的研究和分析。對(duì)于陳皮與砂仁在熟地黃炮制過(guò)程中毛蕊花糖苷的變化機(jī)制，及臨床使用中對(duì)熟地黃性味功效產(chǎn)生影響和改變的機(jī)制，還應(yīng)進(jìn)一步開(kāi)展相關(guān)藥效學(xué)研究。