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        基于毛蕊花糖苷含量分析陳皮和砂仁在熟地黃炮制中的影響性研究*

        2019-12-25 08:32:36王中華竇志英王遠(yuǎn)志
        天津中醫(yī)藥 2019年12期
        關(guān)鍵詞:毛蕊花砂仁熟地黃

        王中華,竇志英,王 洋,陳 濤,王遠(yuǎn)志

        (1.天津中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥學(xué)部,天津 300193;2.天津中醫(yī)藥大學(xué),天津 301617;3.南開大學(xué)經(jīng)濟(jì)學(xué)院,天津 300071)

        熟地黃在中醫(yī)臨床使用廣泛,是補(bǔ)精益髓、養(yǎng)血滋陰的要藥,也是配伍組方使用頻率較高的中藥品種之一,主要應(yīng)用于心悸、失眠、血虛萎黃、月經(jīng)不調(diào)、眩暈、崩漏等病的治療。其藥典中規(guī)定的指標(biāo)性成分“毛蕊花糖苷”是地黃中苯乙醇苷類的主要化合物,現(xiàn)代藥理學(xué)認(rèn)為其具有肝臟保護(hù)及抑制胸主動脈的血管收縮作用[1]。由于熟地黃炮制后的藥性由微寒轉(zhuǎn)微溫,補(bǔ)益滋膩之性增強(qiáng),其性易滋膩滯脾,有礙消化,故脾胃虛弱、氣滯痰多、脘腹脹滿及食少便溏者忌服,因此限制了其臨床應(yīng)用范圍。當(dāng)前由于市場化需求及成本、人工、工藝等方面的問題,熟地黃主要有兩種常規(guī)炮制方法[2]:1)將生地黃用酒拌后,火燉至酒吸盡,取出晾曬至外皮黏液稍干,切厚片,干燥即得。2)將生地直接蒸至斷面顯黑潤,曬至八成干后切厚片,干燥即得。兩種方法都需要將地黃蒸煮至斷面烏黑色,一般需要蒸1~2 次,曬干后的熟地黃柔軟、黏性強(qiáng)、味甜,溫性增強(qiáng)。

        目前針對熟地黃常規(guī)炮制的研究較多,但基于中醫(yī)藥藥性理論及配伍原則,采用不同藥材或輔料復(fù)合炮制的研究較少。同時缺乏相應(yīng)的炮制規(guī)范及其指標(biāo)性成分的含量分析與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),本次研究尚屬首次探索。所以根據(jù)熟地黃臨床用藥的特點(diǎn),針對目前飲片市場上缺乏供應(yīng)的情況,而臨床又有治療使用需求的熟地黃炮制品種,采用新型的炮制工藝,其中陳皮制熟地黃、砂仁制熟地黃(酒蒸法),選用主產(chǎn)地的生藥材,借鑒并參考地方炮制規(guī)范和古籍文獻(xiàn)中的方法,逐級分步炮制。同時采用砂仁制熟地黃(拌制法),來考察日常中藥市場上供應(yīng)的常規(guī)炮制的熟地黃飲片再次復(fù)合炮制后的含量變化及可行性分析。以2015 版《中華人民共和國藥典》[3](簡稱《中國藥典》)中規(guī)定的熟地黃性狀及毛蕊花糖苷的含量標(biāo)準(zhǔn)(≥0.020%)為檢測指標(biāo)。為提高檢測精度和速度,采用超高壓液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(UPLC-MS)法進(jìn)行含量檢測,并結(jié)合其性狀評分進(jìn)行綜合評價,結(jié)果使用SPSS 22.0 數(shù)據(jù)分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

        1 材料

        1.1 儀器 美國Waters 公司液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)UPLC(I-Class)-MS(XEXO TQD),MassLynx V4.1 工作站;離心機(jī):Thermo LEGEND MICRO 17R,Precisa 水分測定儀(XM60/120,廣州合華科技有限公司),電子分析天平(型號:AL204,分度值0.000 1 g,梅特勒-托利多儀器有限公司上海分公司),單列六孔電熱恒溫水浴鍋(TWS-16,上海喆圖科學(xué)儀器有限公司),玻璃儀器等。

        1.2 藥材、標(biāo)準(zhǔn)品、試劑

        1.2.1 藥材 地黃(Rehmannia glutinosaLibosch.)藥材(2017 年10—12 月采收自河南焦作,個子貨約40 頭/kg,直徑約為2~4 cm,長約6~14 cm,大小均勻,性狀呈不規(guī)則的紡錘形,表面呈棕黃色至黃棕色,外表皮皺縮且具有許多不規(guī)則的橫紋,體重,質(zhì)地較軟而具有韌性,不容易折斷,斷面棕黃色,稍有黏性,氣味微甜而稍帶酸苦味,經(jīng)天津中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院陳濤主任藥師鑒定為玄參科植物地黃干燥塊根);砂仁(Amomum villosumLour.)飲片(產(chǎn)地云南,批號171004,經(jīng)陳濤主任藥師鑒定為姜科植物陽春砂的干燥成熟果實(shí));陳皮(Citrus reticu1ataBlanco.)飲片(產(chǎn)地浙江,批號171001,經(jīng)陳濤主任藥師鑒定為蕓香科植物橘的干燥成熟果皮);熟地黃(Rehmannia glutinosaLibosch.)飲片(產(chǎn)地河南,批號170901,經(jīng)陳濤主任藥師鑒定為玄參科植物地黃干燥塊根,為地黃的炮制加工品)。以上藥材均由河北安國普天和中藥飲片有限公司提供。

        1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)品 毛蕊花糖苷標(biāo)準(zhǔn)品(規(guī)格:20 mg,國家批號:111530-201713,ID:RY59-K596,中國食品藥品檢定研究院,標(biāo)注純度以麥角甾苷計(jì)為92.50%)

        1.2.3 試劑 甲醇色譜級(批號:181024,天津市化學(xué)試劑供銷公司第二分公司),紹興花雕黃酒(批號:20170308,浙江谷越龍山紹興酒股份有限公司)。

        2 方法與結(jié)果

        2.1 炮制方法 參考江西、河南、貴州、上海等省市《中藥飲片炮制規(guī)范》[4-7]《實(shí)用中藥手冊》[8]及《全國中藥炮制規(guī)范》1988 版[9]中熟地黃的炮制方法。具體炮制方法如下。

        2.1.1 陳皮制熟地黃 取地黃藥材1 000 g,搶水洗凈備用。取陳皮飲片100 g,加冷水浸泡30 min,因陳皮是芳香之品不宜久煎,先武火后文火,以水開后記時,煎煮2 次,每次約20 min,過濾殘?jiān)鼔赫ズ笕≈?,合? 次濾液,陳皮的濾液以完全能淹沒地黃藥材為宜(地黃與陳皮的用量比例10∶1)。

        取洗凈備用的地黃與陳皮濾液混合拌勻,置陶瓷鍋內(nèi)蓋嚴(yán)鍋蓋,武火加熱并開始記錄時間,至沸騰后改用文火保持微沸,加熱期間要注意鍋內(nèi)水量變化,不足時應(yīng)補(bǔ)充開水,以防藥材焦化,連續(xù)燉制48 h(至藥材烏黑發(fā)亮,味轉(zhuǎn)甜時)后停止加熱,然后用余溫再加蓋悶制12 h(鍋內(nèi)應(yīng)保持適量的汁液,供藥材在悶制過程中充分吸收)。炮制期間每隔4 h提取20 g 熟地黃樣品(樣品編號為A0~A15),所提樣品取出后切約0.4 cm 厚片,置陰涼干燥處晾干備用。

        2.1.2 砂仁制熟地黃(酒蒸法) 取地黃藥材1 000 g、紹興花雕黃酒300 g、砂仁10 g(打碎成末),首先將地黃搶水洗凈后與黃酒拌勻,置隔水蒸鍋內(nèi),隔水加熱蒸制2 次。第1 次蒸制12 h 后停止加熱,燜12 h。在第2 次蒸制前拌入砂仁末(地黃與砂仁用量比例為100∶1),第2 次蒸制12 h 后,停止加熱,再燜24 h。炮制后的熟地黃內(nèi)外烏黑發(fā)亮,有黏性,斷面呈菊花芯或針刺孔狀。炮制過程中每隔4 h 提取20 g 熟地黃樣品(樣品編號為B0~B15),所提樣品取出后切約0.4 cm 厚片,置陰涼干燥處晾干備用。

        2.1.3 砂仁制熟地黃(拌制法) 選取飲片市場中經(jīng)質(zhì)量檢驗(yàn)合格的熟地黃飲片1 000 g,切制成約0.4 cm 厚片,以其性狀色澤光黑油潤如漆,味甘如飴,軟硬適中,斷面有菊花芯或有似針刺孔狀為標(biāo)準(zhǔn)。炮制時首先用砂仁20 g(打碎成末)與其充分混合拌勻(熟地黃與砂仁用量為50∶1),然后置瓷缸內(nèi)加蓋密閉備用,每隔2 d 提取20 g 熟地黃樣品(樣品編號為C0~C15),所提樣品置陰涼干燥處晾干備用。

        2.2 檢測指標(biāo) 依據(jù)《中國藥典》2015 版一部,熟地黃項(xiàng)下,水分含量不得超過15%,按干燥品計(jì)算,毛蕊花糖苷(C29H36O15)含量不得少于0.020%。

        2.3 水分檢測 熟地黃樣品進(jìn)行水分檢測時,采用Precisa 水分測定儀(XM60/120)進(jìn)行快速測定,其水分測定儀的原理[10]是利用紅外的強(qiáng)穿透力以及加熱效應(yīng)將樣品的水分快速蒸發(fā),以加熱前后樣品的質(zhì)量計(jì)算差值,得到樣品水分含量,其紅外干燥效率要遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于烘箱干燥效率,相比藥典烘箱烘干法,時間快、操作簡單、測量準(zhǔn)確。在預(yù)實(shí)驗(yàn)時,取3 份生地粗粉,先用水分測定儀測定水分,再用藥典方法進(jìn)行測定,其結(jié)果近似,為提高效率,故本實(shí)驗(yàn)采用水分測定儀來測量熟地黃各樣品的水分含量。

        操作方法:取熟地黃炮制過程中提取的各樣品,粉碎過2 號篩,精密稱取10 g 均勻平鋪于水分測定儀的托盤中,啟動檢測程序分別讀取各樣品數(shù)值,每個樣品檢測3 次,并計(jì)算平均值及RSD 值。2015 版《中國藥典》規(guī)定熟地黃水分不得>15%,各樣品水分含量均符合藥典標(biāo)準(zhǔn),結(jié)果見表1。

        表1 地黃炮制過程中各樣品水分含量檢測結(jié)果Tab.1 Test results of moisture content in processing of Dihuang %

        2.4 熟地黃性狀評價 依據(jù)2015 版《中國藥典》熟地黃項(xiàng)下的性狀描述以及傳統(tǒng)炮制的質(zhì)量鑒別標(biāo)準(zhǔn),對各實(shí)驗(yàn)樣品進(jìn)行性狀評價(8 分為合格,9 分為優(yōu)秀,10 分為最佳),評分標(biāo)準(zhǔn)見表2。結(jié)果顯示陳皮制熟地黃(樣品編號A0~A15)隨著炮制時間的不斷增加,評分逐漸提高,逐步接近地黃藥典和傳統(tǒng)炮制黑如漆、甜如飴的性狀標(biāo)準(zhǔn),至40 h 時分值達(dá)到最高,至52 h 后分值才開始略有下降并維持至炮制結(jié)束。砂仁制熟地黃(酒蒸法,樣品編號B0~B15)隨著炮制時間的不斷增加,性狀評分逐漸提高,其分值最高階段,是在炮制超過36 h 時后(即拌入砂仁又蒸制12 h 以后)。砂仁制熟地黃(拌制法,樣品編號C0~C15)其炮制前后性狀未發(fā)生明顯變化,性狀評分相同。

        表2 性狀評分標(biāo)準(zhǔn)Tab.2 Trait evaluation criteria

        2.5 毛蕊花糖苷的檢測

        2.5.1 色譜條件 流動相:A:0.1%甲酸水溶液,B:0.1%甲酸乙腈溶液;流速:0.4 mL/min;色譜柱:Waters ACQUITY UPLC HSS T3,2.1 mm×100 mm,1.8 μm;柱溫:35 ℃;樣品室溫度:10 ℃;進(jìn)樣量:1 μL;梯度洗脫程序結(jié)果見表3。

        表3 毛蕊花糖苷梯度洗脫程序Tab.3 Gradient elution program of Verbascoside glycoside

        2.5.2 質(zhì)譜條件 毛蕊花糖苷的質(zhì)譜檢測參數(shù):負(fù)離子掃描模式,MRM 多反應(yīng)檢測模式;Source Voltages 2.70 KV;Source Temperature:400 ℃;Gas Flow:700 L/Hr;Cone:50 L/Hr;Parention(m/z):623.2;Daughterion(m/z)Quantitation:161.0;Cone(V):74;Collision(V):40。

        2.5.3 標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備 精密量取毛蕊花糖苷標(biāo)準(zhǔn)品適量,用甲醇(色譜級)定容于100 mL 的容量瓶中,配置成含量為10.26 μg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)品溶液,過0.22 μm 的濾膜備用。

        2.5.4 線性關(guān)系 標(biāo)準(zhǔn)品儲備液:取2.5.3 項(xiàng)下制備的標(biāo)準(zhǔn)品溶液,稀釋配制成1 μg/mL 的儲備液,用甲醇依次稀釋成相應(yīng)濃度的系列混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液:1 000、500、200、100、50、20、10、5、2、1 ng/mL,按照2.5.1 及2.5.2 項(xiàng)下的檢測條件進(jìn)行檢測,以標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)(X),峰面積積分值為縱坐標(biāo)(Y),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算相關(guān)系數(shù),相關(guān)系數(shù)為r=1,直線方程為Y=2.432 3X-0.838 4,線性范圍為1~1 000 ng/mL,結(jié)果見圖1。

        圖1 毛蕊花糖苷標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.1 Standard curve line of Verbascoside glycoside

        2.5.5 樣品溶液的制備 取容量為250 mL 具塞三角瓶,置恒溫干燥箱中60 ℃干燥30 min 至恒重。精密量取粉碎過2 號篩的地黃各實(shí)驗(yàn)樣品的粗顆粒約2 g,將已稱定的實(shí)驗(yàn)樣品置已知重量的三角瓶中,精密加入純甲醇100 mL(色譜級)精密稱重后,置超聲提取器中40 ℃,40 Hz,240 W 超聲提取1 h,后靜置至室溫稱質(zhì)量,用甲醇補(bǔ)足缺失的質(zhì)量,常壓過濾后的續(xù)濾液密封冷藏備用。

        精密量取備用的各樣品續(xù)濾液30 mL,至蒸發(fā)皿內(nèi)水浴60 ℃揮干甲醇至近干,殘?jiān)眉状既芙舛ㄈ萦? mL 的棕色容量瓶中作為儲備液,檢測時取儲備液1 mL 用甲醇定容于100 mL 容量瓶中(即樣品溶液稀釋100 倍),得樣品溶液。同時用純甲醇溶液定容作為空白試劑,各樣品過0.22 μm 的濾膜,進(jìn)樣量為1 μL。

        2.5.6 精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性、準(zhǔn)確度

        2.5.6.1 精密度實(shí)驗(yàn) 取同一份已配置的毛蕊花糖苷混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液,按照2.5.1 及2.5.2 項(xiàng)下的檢測條件檢測,進(jìn)樣量為1 μL,連續(xù)重復(fù)進(jìn)樣6 次,并記錄峰面積,計(jì)算RSD 值為1.77%,說明儀器的精密度良好。

        2.5.6.2 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 精密稱取同一熟地黃粉末樣品6 份各2 g,按2.5.5 項(xiàng)下樣品溶液制備方法制備,按照2.5.1 及2.5.2 項(xiàng)下的檢測條件檢測,進(jìn)樣量為1 μL,記錄峰面積,并計(jì)算樣品含量,其RSD值為2.03%,說明該方法的重復(fù)性良好。

        2.5.6.3 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 精密稱取一份熟地黃粉末樣品2 g,按照2.5.5 項(xiàng)下樣品溶液制備方法制備,按照2.5.1 及2.5.2 項(xiàng)下的檢測條件檢測,在相同的色譜條件下分別在0、2、8、12、24 h 進(jìn)行檢測,進(jìn)樣量為1 μL,記錄峰面積,并計(jì)算樣品含量,其RSD 值為1.96%,說明樣品溶液在常溫24 h 內(nèi)穩(wěn)定。

        2.5.6.4 準(zhǔn)確度實(shí)驗(yàn) 取已知毛蕊花糖苷含量的同一熟地黃樣品6 份,每份各2 g,按2.5.5 項(xiàng)下的樣品溶液方法制備,精密量取制備后的各樣品溶液1mL,分別加入毛蕊花糖苷標(biāo)準(zhǔn)品溶液(精密量取2.5.4 項(xiàng)下標(biāo)準(zhǔn)品溶液中濃度為500 ng/mL 的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液1 mL),與樣品溶液中毛蕊花糖苷含量的比例約為1∶1,按照2.5.1 及2.5.2 中的檢測條件檢測,進(jìn)樣量為1 μL,平均回收率為97.28%,RSD 值為2.48%,結(jié)果見表4。

        2.5.7 熟地黃樣品中毛蕊花糖苷的檢測 取熟地黃各實(shí)驗(yàn)樣品,按照2.5.5 項(xiàng)下進(jìn)行制備,按照2.5.1及2.5.2 項(xiàng)下的檢測條件檢測,進(jìn)樣量為1 μL,每個樣品進(jìn)樣3 次,檢測結(jié)果換算成實(shí)際濃度,并計(jì)算樣品含量的平均值及含量比例。結(jié)果顯示熟地黃樣品中毛蕊花糖苷的色譜峰與毛蕊花糖苷標(biāo)準(zhǔn)品色譜峰的保留時間相同,且顯示相同的相對分子質(zhì)量,結(jié)果見圖2、表5。

        表4 加樣回收率實(shí)驗(yàn)Tab.4 Sample recovery rate of experiment

        3 分析與討論

        本研究采用“相畏為制”的炮制原理,在陳皮制熟地黃的炮制過程中,借陳皮味苦性溫,行氣、調(diào)中、消痰之功,可緩解地黃炮制后的滋膩之性,起到補(bǔ)而不滯的效果,更好發(fā)揮地黃補(bǔ)血滋陰、益精填髓的作用。而砂仁香燥性溫,為化濕理氣溫脾的要藥,有寬中、下氣、消脹之功,砂仁制熟地黃(酒蒸法)的目的是借砂仁香燥之性,來抑制或降低熟地黃的滋膩之性,可使熟地黃補(bǔ)而不膩。而且兩種方法炮制后的熟地黃,其性狀都達(dá)到了色黑如漆,味甜如飴的傳統(tǒng)炮制要求。砂仁制熟地黃(拌制法)的炮制特點(diǎn)是將砂仁打碎與常規(guī)法炮制后熟地黃飲片物理混合,并同置一密閉容器內(nèi),這樣可避免砂仁芳香性成分的散失,最大程度上保留砂仁的藥性,使其更好地發(fā)揮抑制熟地黃滋膩之性的作用,且有利于長期保存。

        本實(shí)驗(yàn)選取的以上炮制方法,遵循古法并符合基本炮制規(guī)范的要求,操作簡單,炮制時間較短,節(jié)約能源,炮制效率較高,而且符合臨床使用需求。在含量檢測時應(yīng)用超聲提取方法[11],及UPLC-MS 檢測技術(shù)[12],對指標(biāo)成分的損失少,提取效率高,含量檢測的時間短、速度快、精確度高。

        目前相關(guān)文獻(xiàn)研究證明,常規(guī)炮制后的熟地黃中毛蕊花糖苷的含量成明顯下降趨勢,隨著炮制程度的增加其下降幅度劇烈(研究顯示炮制至約30~60 h 時,其含量下降約40~70%)[13-16]。而《中國藥典》中要求熟地黃中毛蕊花糖苷的含量比例要≥0.020%,與生地的含量標(biāo)準(zhǔn)相同,缺乏一定的合理性[13]。

        本實(shí)驗(yàn)熟地黃炮制前后的性狀評分變化提示,陳皮制熟地黃與砂仁制熟地黃(酒蒸法)隨著炮制時間的不斷增加,性狀評分逐步提高,幾近熟地黃藥典及傳統(tǒng)炮制要求的黑如漆、甜如飴的性狀標(biāo)準(zhǔn),分析其炮制過程中性狀變化的原因,應(yīng)與加熱和蒸制時間及炮制輔料的參與密切相關(guān)。而砂仁制熟地黃(拌制法)其炮制前后的性狀未發(fā)生明顯變化,分析原因應(yīng)為拌制法僅是單純的物理混合,藥材沒有液體輔料的參與,以及加熱蒸制的過程,結(jié)果見表5。

        圖2 陰性空白(A)、毛蕊花糖苷標(biāo)準(zhǔn)品(B)、熟地黃樣品中毛蕊花糖苷(C)Fig.2 Chromatogram of negative blank(A),standard of Verbascoside glycoside(B),Verbascoside glycoside in Rehmannia sample(C)

        表5 熟地黃樣品中毛蕊花糖苷含量與性狀評分Tab.5 Content and trait evaluation of Verbascoside glycoside in Rehmannia

        熟地黃藥典中規(guī)定了毛蕊花糖苷(C29H36O15)的含量比例要求(≥0.020%),通過表5 發(fā)現(xiàn)所有實(shí)驗(yàn)樣品的毛蕊花糖苷含量均符合藥典標(biāo)準(zhǔn)。其中在陳皮制熟地黃炮制過程中,毛蕊花糖苷的含量在炮制初始時有明顯的躍升且達(dá)到較高峰值,而后隨著炮制時間的增加,維持在相對平穩(wěn)的水平,接近炮制后期含量仍有明顯提高,至炮制終點(diǎn)時仍能穩(wěn)定在炮制初期的含量水平,結(jié)果見圖3。對比表5 的結(jié)果顯示最佳炮制時間約為52 h 時(即連續(xù)燉制48 h后再悶4 h),其性狀評分和毛蕊花糖苷的含量均相對較高。以藥典中熟地黃毛蕊花糖苷含量標(biāo)準(zhǔn)(≥0.020%)作為參照比值,計(jì)算其單樣本t 檢驗(yàn)值(t=14.224,P<0.05),證明其差異性非常顯著。實(shí)驗(yàn)證明陳皮制熟地黃可使其炮制后的性狀在達(dá)到藥典及傳統(tǒng)標(biāo)準(zhǔn)的同時,仍能維持其毛蕊花糖苷的含量在較高水平,并不發(fā)生顯著下降,證明其炮制方法具有一定的科學(xué)性與合理性及應(yīng)用意義。

        分析砂仁制熟地黃(酒蒸法),其毛蕊花糖苷的含量在炮制初期下降明顯。當(dāng)?shù)? 次蒸制時(即拌入砂仁后),毛蕊花糖苷的含量又顯著上升,并維持至36 h 后開始逐步下降,結(jié)果見圖3。當(dāng)蒸至36 h時(即拌入砂仁,第2 次再蒸制12 h 后)毛蕊花糖苷的含量與其性狀評分均最高,結(jié)果見表5。以藥典中熟地黃毛蕊花糖苷的含量標(biāo)準(zhǔn)(≥0.020%)作為參照比值,計(jì)算其單樣本t 檢驗(yàn)值(t=6.246,P<0.05),證明整個炮制過程中毛蕊花糖苷的含量變化差異性非常顯著。同時也證明砂仁的參與對其炮制過程中毛蕊花糖苷的含量變化產(chǎn)生了顯著的影響,具有一定的科學(xué)性和應(yīng)用意義。

        圖3 陳皮制熟地黃、砂仁制熟地黃(酒蒸法)中毛蕊花糖苷含量變化Fig.3 Changes of the content of Verbascoside glycoside in the Tangerine-processed Rehmannia and the Amomumprocessed Rehmannia(wine steaming)

        分析砂仁制熟地黃(拌制法),其毛蕊花糖苷的含量整體呈震蕩下降趨勢,結(jié)果見圖4。其對應(yīng)的性狀評分在整個炮制過程中沒有變化,結(jié)果見表5。以藥典中熟地黃毛蕊花糖苷的含量標(biāo)準(zhǔn)(≥0.020%)為參照比值,計(jì)算其單樣本t 檢驗(yàn)值(t=2.577,P>0.05),證明其含量變化差異性不顯著,說明此炮制法中砂仁的參與對毛蕊花糖苷的含量沒有明顯的影響。但砂仁拌制后的熟地黃如與群藥配伍組方后共同煎煮,在煎煮過程中由于加熱時間、溫度等因素的影響,可能會對毛蕊花糖苷的含量產(chǎn)生一定的影響,其炮制方法的合理性及臨床意義還需進(jìn)一步深入研究。

        圖4 砂仁制熟地黃(拌制法)中毛蕊花糖苷的含量變化Fig.4 Changes of the content of Verbascoside glycoside in the Amomum-processed Rehmannia(mixed method)

        對比以上3 種炮制方法證明炮制過程中陳皮制熟地黃的毛蕊花糖苷含量變化波動性最大,其炮制方法對毛蕊花糖苷含量的影響程度最高,相反砂仁制熟地黃(拌制法)含量變化波動性最小,對毛蕊花糖苷含量的影響程度最低。

        綜合本實(shí)驗(yàn)的各項(xiàng)結(jié)果可以看出,陳皮制熟地黃與砂仁制熟地黃(酒蒸法)炮制后的熟地黃無論從性狀質(zhì)量,還是指標(biāo)性成分的含量,均優(yōu)于常規(guī)炮制后的熟地黃。尤其是陳皮制熟地黃對熟地黃中毛蕊花糖苷的含量有顯著影響,其炮制后毛蕊花糖苷的含量未發(fā)生顯著下降,而且隨著炮制程度的增加在終末期還有相應(yīng)的提高。證明陳皮制熟地黃的炮制法可明顯穩(wěn)定和控制毛蕊花糖苷的下降趨勢,對如何有效地保存熟地黃指標(biāo)性成分的研究有實(shí)踐意義,可為其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的進(jìn)一步優(yōu)化提供思路。未來研究還應(yīng)考慮地黃藥材采收時的產(chǎn)地、個頭等級、儲存時間等影響因素。

        文獻(xiàn)研究還發(fā)現(xiàn),熟地黃炮制過程中隨著炮制程度的增加,部分毛蕊花糖苷轉(zhuǎn)化成為異毛蕊花糖苷[14],兩者成負(fù)相關(guān)性。而本實(shí)驗(yàn)熟地黃炮制中使用的陳皮和砂仁均不含毛蕊花糖苷的相關(guān)成分[17-18],但富含橙皮苷和乙酸龍腦酯,兩者在熟地黃炮制過程中對毛蕊花糖苷的轉(zhuǎn)化是否起到抑制和穩(wěn)定的作用還需進(jìn)一步的研究和分析。對于陳皮與砂仁在熟地黃炮制過程中毛蕊花糖苷的變化機(jī)制,及臨床使用中對熟地黃性味功效產(chǎn)生影響和改變的機(jī)制,還應(yīng)進(jìn)一步開展相關(guān)藥效學(xué)研究。

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