鄧寒霜，徐航，楊夢琦，褚雅婕，楊潔，常天天，李維倩

(商洛學院 生物醫(yī)藥與食品工程學院，陜西 商洛 726000)

桑杏湯，源自清代吳鞠通所著《溫病條辨》，可輕宣溫燥、止咳平喘。處方組成為桑葉、杏仁、沙參、象貝、香豉、梔皮、梨皮，是治療溫燥的代表方。中醫(yī)臨床中，桑杏湯多用以治療頭痛發(fā)熱、干咳無痰、舌紅少津、脈浮數等證。現代醫(yī)療實踐發(fā)現，桑杏湯在治療秋季感冒、流感、肺結核、肺炎等屬溫燥襲肺，肺陰受灼等患者時具有良好的效果[1]。由于湯劑療效易受原藥材質量、炮制工藝、煎煮條件、儲存條件等影響，且需臨用時新制，攜帶不便、服用量大，脂溶性和難溶性成分用水煎煮，不易被提取等缺點，造成湯劑在臨床使用中的諸多限制。中藥顆粒劑是在傳統(tǒng)湯劑和糖漿劑的基礎上發(fā)展起來的，是以傳統(tǒng)中藥為原料，經提取、純化、濃縮、制粒等工藝，制成的一種具有統(tǒng)一質量標準，具有一定粒度的干燥顆粒狀制劑。與傳統(tǒng)中藥湯劑相比較，顆粒制劑具有質量穩(wěn)定，劑量小，便于服用、攜帶、貯藏、運輸等優(yōu)點[2]。無糖顆粒是一種新型的中藥顆粒劑，擴大了顆粒劑的適用范圍，可解除糖尿病患者以及糖耐量不足患者的用藥限制。無糖顆粒劑相對于傳統(tǒng)顆粒劑來說，提高了藥物的穩(wěn)定性，減少了藥物輔料的用量，患者服用、攜帶更加方便[3]。筆者將中醫(yī)傳統(tǒng)方劑桑杏湯改進為中藥無糖顆粒，探索了桑杏湯無糖顆粒的最適制備工藝，擴大了其臨床應用范圍，并為桑杏湯無糖顆粒的工業(yè)生產奠定了基礎。

1 材料與方法

1.1 實驗材料與儀器設備

桑葉、杏仁、沙參、象貝、豆鼓、梔皮等飲片購自商洛康天醫(yī)藥公司；梨皮為實驗室自制。95%乙醇(天津市百世化工有限公司)、甲醇(天津市百世化工有限公司)、可溶性淀粉(國藥集團化學試劑有限公司)等。

LA230S型電子天平，北京賽多利斯儀器有限公司；UV-1780型紫外-可見分光光度計，日本島津公司；FW-80微型粉碎機，天津泰斯特儀器有公司；R206D型旋轉蒸發(fā)儀，上海亞榮生化儀器廠；KH5200E型超聲提取裝置，昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司等。

1.2 實驗方法

1.2.1 無糖顆粒制備工藝路線 按桑杏湯處方調配比例，分取桑葉、杏仁適量，采取水蒸汽蒸餾法提取揮發(fā)油，再向上述提取揮發(fā)油后殘留藥渣中，按比例混入象貝、香豉、梔皮、梨皮、沙參各藥材適量，以10倍量水，煎煮提取2 h，放冷，過濾，收集濾液；殘渣加8倍量水，再次煎煮提取1 h，過濾，收集濾液；合并兩次濾液，減壓濃縮至相對密度約為1.3左右的浸膏，即得藥材提取物。將藥材提取物與適量輔料(可溶性淀粉)混合，加入不同濃度的乙醇為潤濕劑，混入前述所得揮發(fā)油，不斷搓捏混均至“手握成團，輕壓即散”狀后，擠壓通過制粒篩，制粒，收集所得顆粒，50℃干燥，即得桑杏湯無糖顆粒。具體技術路線見圖1。

1.2.2 工藝優(yōu)化正交試驗設計 以可溶性淀粉為輔料，以不同濃度乙醇為潤濕劑，以顆粒劑中桑葉總黃酮、杏仁中苦杏仁苷等活性成分吸光度及顆粒劑性狀、粒度、水分、干燥失重、溶化現象等檢查項目綜合評分為評價指標，采用正交試驗法考察輔料用量、乙醇濃度、潤濕劑用量三個影響顆粒劑質量的關鍵因素的最優(yōu)水平組合，確定桑杏湯無糖顆粒的最佳制備工藝。具體試驗因素水平及正交試驗設計方案見表1。

圖1 桑杏湯無糖顆粒制備工藝路線

表1 桑杏湯無糖顆粒制備工藝正交試驗設計方案

1.2.3 總黃酮吸光度測定 精密稱取無糖顆粒樣品約0.5 g，精密加入60%乙醇50 mL，超聲處理30 min，放冷，搖勻，過濾，精密量取續(xù)濾液25 mL，以60%乙醇定容至50 mL，即得供試品溶液。精密量取上述供試品溶液1 mL于10 mL容量瓶中，加5%亞硝酸鈉溶液0.4 mL，搖勻，靜置6 min；加10%硝酸鋁溶液0.4 mL，搖勻，靜置6 min；加入4%氫氧化鈉溶液4 mL，用乙醇定容至刻度，搖勻，靜置15 min，在510 nm處測定吸光度[4,5]。

1.2.4 苦杏仁苷吸光度測定 精密稱取無糖顆粒樣品約0.5 g，精密加入甲醇50 mL，浸泡10 min，超聲處理30 min，放冷，搖勻，過濾，精密量取續(xù)濾液25 mL，以甲醇定容至50 mL即得供試品溶液。取上述供試品溶液適量，于219 nm處測定吸光度[6,7]。

1.2.5 顆粒劑質量評分標準 照《中國藥典(2015版 第四部)》中有關顆粒劑質量評價的規(guī)定，對所得顆粒劑進行粒度、溶化性、水分和干燥失重檢查；對吸光度檢測及各項檢查結果進行打分，以各項目得分總和為綜合評價指標。其中桑葉總黃酮吸光度占30分，苦杏仁苷吸光度占30分；顆粒劑粒度、水分、溶化性和干燥失重的檢查結果各占10分，具體評分標準如下。

(1)活性成分檢測項目，以吸光度最高者為滿分30分，其他組數據與最高者相比，再乘以30分，即為其分數。

(2)粒度檢查項目，以不合格率最低者為滿分為10分，最低者與其他組數據相比，再乘以10分，即為其他組分數。

(3)溶化性檢查項目，以全部溶化者為滿分10分，輕微渾濁8～9分，中度渾濁6～7分，重度渾濁0～5分。

(4)水分檢查項目，以含水量最低者為滿分10分，最低者與其他組數據相比，再乘以10分，即為其他組分數。

(5)干燥失重項目檢查，以減失重量最低者為滿分10分，最低者與其他組數據相比，再乘以10分，即為其他組分數。

2 結果與分析

2.1 桑杏湯無糖顆粒劑質量檢查結果

2.1.1 性狀 試驗所得的顆粒劑干燥，顆粒均勻，各組所得的顆粒劑色澤一致，均呈淺黃色，無吸潮、軟化、結塊、潮解等現象。

2.1.2 粒度 取供試品30 g，稱定重量，置于五號藥篩中，保持水平狀態(tài)過篩，左右往返，邊篩邊輕叩3 min；將未通過五號篩的供試品置于一號藥篩中，使用方法相同，邊篩邊輕叩3 min。除另有規(guī)定外，不能通過一號篩與能通過五號篩的總和不得超過15%[8]，檢查結果見表2。

2.1.3 水分 中藥顆粒劑照《中國藥典(2015版 第四部)》水分測定法(通則0832)測定，除另有規(guī)定外，水分不得超過8.0%，檢查結果見表2。

2.1.4 溶化性 取供試品各0.5 g，加熱水10 mL，攪拌5 min，立即觀察?？扇茴w粒應全部溶化或輕微渾濁[8]，檢查結果見表2。

2.1.5干燥失重 除另有規(guī)定外，化學藥品和生物制品顆粒劑照《中國藥典(2015版 第四部)》干燥失重測定法(通則0831)測定，于105℃干燥至恒重，減失重量不得超過2.0%，檢查結果見表2。

由表2可知，不同處理所得桑杏湯無糖顆粒劑，各項質量檢查指標均符合藥典要求。

2.2 活性成分吸光度測定結果

總黃酮檢測結果。為評價顆粒劑中活性成分的含量，采用紫外-可見分光光度法對桑杏湯無糖顆粒提取液中總黃酮及苦杏仁苷的吸光度進行了檢測，詳細結果見表3。

表2 顆粒劑質量檢查結果

表3 桑杏湯無糖顆粒中活性成分吸光度測定結果

由表3可知，2號處理樣品，即在條件為輔料用量為浸膏的3倍，潤濕劑(乙醇)濃度為60%，潤濕劑用量為輔料與浸膏總量的10%的處理中總黃酮類成分含量最高；5號處理樣品，即在條件為輔料用量為浸膏的3倍，潤濕劑(乙醇)濃度為65%，潤濕劑用量為輔料與浸膏總量的5%的處理中苦杏仁苷含量最高。

2.3 正交試驗結果

2.3.1 工藝優(yōu)選結果 為優(yōu)選桑杏湯無糖顆粒最適制備工藝，以2.1與2.2項下各處理得分之合為指標，綜合評價正交試驗各處理所得顆粒劑質量優(yōu)劣，具體結果見表4、表5。

表4 正交試驗結果分析

表5 正交試驗方差分析

由表4、表5可知，各試驗因素對實驗結果影響的主次順序為C>A>B，即輔料用量對顆粒劑質量影響最大，其次是乙醇濃度的影響，潤濕劑用量對實驗結果影響最小。經正交試驗優(yōu)選得最佳因素水平組合為A1B2C2，即以65%的乙醇溶液為潤濕劑，潤濕劑用量為輔料與浸膏總量的10%，輔料用量為藥物浸膏量的3倍，在此條件下制得的桑杏湯無糖顆粒質量最優(yōu)。觀察表4可知，2號試驗處理條件與筆者優(yōu)選出的最優(yōu)條件完全相同，在此處理下制得的顆粒劑綜合評分在所有處理中得分最高，說明正交試驗結果可信。

2.3.2 驗證實驗 以上述優(yōu)選的最佳工藝制成4組顆粒劑，并對其進行性狀、粒度、水分、溶化性和干燥失重以及有效成分的吸光度檢測，結果見表6。

表6 驗證試驗結果

由表6可知，所得顆粒劑各項檢測指標均符合藥典標準且與原正交試驗所得結果相近，表明正交試驗優(yōu)選結果可靠。在此最優(yōu)工藝，即以可溶性淀粉為輔料，輔料用量為浸膏量的3倍，以60%乙醇為潤濕劑，潤濕劑用量為輔料與浸膏總量的10%條件下，所得顆粒劑質量最優(yōu)。

3 結論與討論

桑杏湯原處方組成為：桑葉、象貝、香豉、梔皮、梨皮各3 g，杏仁4.5 g，沙參6 g。其方以桑杏為名，即桑葉、杏仁為方中主藥。因此，筆者在評價顆粒劑質量時，主要對桑葉中的總黃酮及杏仁中的苦杏仁苷2種活性成分進行了檢測。另外，按照我國傳統(tǒng)醫(yī)學用藥理論要求，桑葉、杏仁在入湯劑煎煮時勻應“后下”，否則其療效不佳，表明其中活性物質為揮發(fā)油類成分。筆者為充分保留藥材活性成分，確保所得顆粒劑具有原處方療效，先采用水蒸汽蒸餾法提取桑葉、杏仁中的揮發(fā)油性類成分再將之與其它藥材提取物混合后制粒。中藥無糖顆粒常用輔料有糊精、纖維素、可溶性淀粉等，筆者前期試驗對幾種輔料進行了考察，發(fā)現以可溶性淀粉為輔料所得顆粒劑性狀好且輔料用量少，因此以可溶性淀粉為最終研究所用輔料。

筆者所得桑杏湯無糖顆粒實驗室最佳制備工藝為，按桑杏湯處方調配比例，分取桑葉、杏仁適量，采取水蒸汽蒸餾法提取揮發(fā)油，再向上述提取揮發(fā)油后殘留藥渣中，按比例混入象貝、香豉、梔皮、梨皮、沙參各藥材適量，以10倍量水，煎煮提取2 h，放冷，過濾，收集濾液；殘渣加8倍量水，再次煎煮提取1 h，過濾，收集濾液；合并兩次濾液，減壓濃縮至相對密度約為1.3左右的浸膏，即得藥材提取物。將前述所得揮發(fā)油、藥材提取物與3倍量的輔料(可溶性淀粉)混合，加入藥材提取物與輔料總料10%左右的60%乙醇為潤濕劑，不斷搓捏混勻至“手握成團，輕壓即散”狀后，擠壓通過制粒篩，制粒。收集所得顆粒，50℃下干燥，即得桑杏湯無糖顆粒。桑杏湯無糖顆粒相較于傳統(tǒng)湯劑來說，具有便于服用與攜帶、便于調配、便于進行質量管理、便于儲存與運輸等優(yōu)勢，具有一定的市場開發(fā)前景[9,10]。