洪春桃，沈登鋒，魏斌，章建紅

(寧波市農(nóng)業(yè)科學研究院 林業(yè)研究所，浙江 寧波 315040)

三葉青(Tetrastigmahemsleyanum)為葡萄科(Vitaceae)崖爬藤屬(Tetrastigma)植物，又名蛇附子、金線吊葫蘆、破石珠、石猴子等，全株可入藥，其中塊根藥效最佳，具有清熱解毒、活血止痛和祛風化痰等方面的功效[1-2]。近些年研究發(fā)現(xiàn)，三葉青在抗腫瘤、抗炎鎮(zhèn)痛，以及保肝等方面具有較好療效[3-7]，能夠治療支氣管炎、肺炎、肝炎、扁桃體炎等，其主要有效成分為黃酮和多糖等物質[8-9]。長期以來，民間一直有服用新鮮三葉青用于治療感冒等病癥的習慣，且療效獨特，但由于鮮品受季節(jié)、地區(qū)的限制，其在臨床應用過程中有諸多不便。而對新鮮的三葉青塊根進行干燥處理，既有利于保存，又提高了其在臨床使用中的便捷性。本試驗比較4種不同干燥方式[10-12]和儲藏方式對三葉青總黃酮含量的影響，以期為生產(chǎn)和儲存三葉青塊根干品方法提供科學的理論基礎。

1 材料與方法

1.1 供試材料

本試驗所用三葉青塊根于2017年11月中旬收獲于寧波市農(nóng)業(yè)科學研究院橫溪鎮(zhèn)大岙村的三葉青基地(浙江市寧波市)。蘆丁對照品(批號為20200423，北京索萊寶科技有限公司)、無水乙醇(國藥集團化學試劑有限公司)、三氯化鋁(阿拉丁)、氫氧化鈉(國藥集團化學試劑有限公司)等均為分析純試劑。

儀器與設備。電熱恒溫鼓風干燥箱(型號DHG-9240A，上海齊欣科學儀器有限公司)，分析天平(型號Sartorius，賽多利斯科學儀器(北京)有限公司)，冷凍干燥機(型號SCIENTZ-30ND，寧波新芝生物科技股份有限公司)，真空保鮮機(型號WP300，美吉斯)，恒溫水浴鍋(型號HWS-28，上海慧泰儀器制造有限公司)，超聲波清洗機(型號SB-120D，寧波新芝生物科技股份有限公司)，高速冷凍離心機(型號MULTTFUGE XIR，Thermo Fisher Scientific，USA)，酶標儀(型號GO，Thermo Fisher Scientific，USA)等。

1.2 處理設計

1.2.1 三葉青塊根干燥處理

將采集的鮮三葉青塊根洗凈，瀝干，表面無水分后進行稱量。分別采用8種干燥方法對三葉青塊根進行干燥處理，每個處理重復3次，每個重復分別稱取鮮樣100 g，干燥處理至恒質量。8種干燥方式分別為：A，自然曬干；B，自然陰干；C，40 ℃電熱恒溫鼓風干燥箱烘干；D，60 ℃電熱恒溫鼓風干燥箱烘干；E，80 ℃電熱恒溫鼓風干燥箱烘干；F，-50 ℃真空冷凍干燥(后續(xù)加溫至55 ℃)；G，-50 ℃真空冷凍干燥(后續(xù)加溫至35 ℃)；H，-50 ℃真空冷凍干燥(后續(xù)不加熱，恒溫14.4 ℃)。

1.2.2 儲存方法

將-50 ℃真空冷凍干燥(后續(xù)系統(tǒng)設置加溫至55 ℃)后的三葉青塊根用超微粉碎機進行粉碎，粉碎后的樣品過200目篩(網(wǎng)孔直徑75 μm)，達到納米級，每份稱取10 g，共計60份，進行抽真空封膜包裝，再用紫外進行殺菌處理。將30份儲藏于-20 ℃冰箱中，另外30份常溫儲藏于陰涼干燥處，以1.2.1節(jié)中F組樣品的總黃酮含量作為對照組(即為未儲存過的樣品)。1 a后對低溫儲存和常溫儲藏的樣品進行總黃酮含量測定?？傸S酮含量按照謝海榮等[13]的方法進行測定。

1.3 統(tǒng)計分析

采用Excel 13.0進行數(shù)據(jù)分析與繪圖，采用SPSS 18.0進行統(tǒng)計分析。

2 結果與分析

2.1 不同干燥方法對三葉青塊根總黃酮含量的影響

不同干燥方法處理所需時長和三葉青塊根總黃酮含量測定結果見表1。A、B組均為傳統(tǒng)的干燥方法，含量相對接近，分別為5.38%和5.12%；C、D、E組用電熱恒溫鼓風干燥箱進行烘干處理，所得的三葉青總黃酮含量較低，尤其是C組，其總黃酮含量僅2.69%；F、G、H組為冷凍干燥處理，所得的三葉青總黃酮含量較高，尤其是F組(-50 ℃真空冷凍干燥，后續(xù)系統(tǒng)設置加溫至55 ℃)，其總黃酮含量達到8.13%。通過SPSS18.0軟件分析可得，除G組外，F(xiàn)組與其他組均存在顯著差異，其更好地保留了三葉青塊根在干燥過程中的總黃酮成分，與常飛等[14]在葛根中的研究報道相一致。

表1 三葉青塊根不同干燥處理方法的總黃酮含量

注：同列數(shù)據(jù)后無相同小寫字母表明差異顯著(P<0.05)。

從表1可見，8種干燥處理方法中，電熱恒溫鼓風干燥箱烘干處理(C、D、E組)用時最短，其次為冷凍干燥(F、G、H組)，傳統(tǒng)的曬干和陰干方法用時最長。同時，隨著后續(xù)加熱設定溫度的降低，F(xiàn)、G、H組干燥所需時間也越長，其中H組所用時間分別是F組和G組的2.35倍和1.82倍，H組的三葉青塊根總黃酮含量絕對值分別比F組和G組低2.47%和1.39%。該現(xiàn)象在傳統(tǒng)的曬干和陰干，以及烘干試驗中也同樣存在，曬干(A組)的用時比陰干(B組)的時間短，總黃酮含量絕對值也比B組高出0.26%；D組耗時比C組短32.5 h，總黃酮含量絕對值高出C組1.99%；E組耗時比C組短37 h，總黃酮含量絕對值高出C組0.56%。E組由于烘干溫度過高，雖然試驗用時較短，但是三葉青塊根的總黃酮在80 ℃高溫下有部分分解，所以其總黃酮含量比D組低。說明三葉青塊根總黃酮含量隨著干燥處理時間的延長而降低。

綜上所述，在不同的干燥方法中，真空冷凍干燥更有利于保留三葉青塊莖的總黃酮，電熱恒溫鼓風干燥箱烘干容易造成三葉青總黃酮的分解，而傳統(tǒng)的干燥方式如曬干和陰干雖能較好地保留三葉青總黃酮，但是干燥所需時間較長。本研究中采用-50 ℃真空冷凍干燥(后續(xù)系統(tǒng)設置加溫至55 ℃)的方法干燥三葉青塊根是較好的干燥方法，其既能讓三葉青塊根保持較高的總黃酮含量，還能縮短干燥時間，建議在產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)干燥三葉青塊根時使用此方法。

2.2 儲存方式對冷凍干燥的三葉青塊根中總黃酮含量的影響

將冷凍干燥的三葉青塊根分別在-20 ℃和常溫儲存1 a，-20 ℃低溫儲存1 a的三葉青塊根總黃酮含量比未儲存時總黃酮含量絕對值降低了0.99%，但是沒有顯著差異；常溫儲藏的三葉青塊根總黃酮含量絕對值比未儲存時降低了2.15%，差異顯著(圖1)。可見-20 ℃低溫儲存能有效保留干燥三葉青塊根的總黃酮含量，而常溫儲存不利于三葉青塊根總黃酮的保存。因此，建議干燥的三葉青塊根在常溫下應盡快使用，-20 ℃低溫儲存的三葉青塊根總黃酮含量盡管與未儲存沒有顯著差異，但是有下降的趨勢，可能隨著儲存時間的延長會繼續(xù)降低，但其有效期至少有1 a。

柱上無相同小寫字母表明差異顯著(P<0.05)。圖1 不同儲存方式對三葉青塊根超微粉中總黃酮含量的影響

3 小結

隨著三葉青種植面積的擴大，三葉青產(chǎn)品也在不斷實現(xiàn)多樣化，尤其是耐儲藏的干燥三葉青塊根。為了提高三葉青在臨床應用的方便性，三葉青凍干粉也在不斷開拓市場[15]，目前價格相對較高。在今后的生產(chǎn)實踐中，本研究能更好地為三葉青干燥品的制備提供科學依據(jù)。同時本研究也存在一些局限，后續(xù)研究應進一步檢測儲存2 a或3 a以上的三葉青塊根干燥品。