王文佳，李存法，王瑞寧，連瑞麗，安玉甫

(1.河南牧業(yè)經(jīng)濟(jì)學(xué)院 制藥工程學(xué)院，河南 鄭州450046；2.杭州惠通生物技術(shù)有限公司，浙江 杭州 310006)

豬繁殖與呼吸綜合征 (porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)，是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)引起的，以妊娠母豬晚期流產(chǎn)、早產(chǎn)、死產(chǎn)和產(chǎn)弱仔數(shù)量增加，及新生仔豬與肥育豬嚴(yán)重呼吸障礙為主要特征，發(fā)病豬多呼吸困難，或腹式呼吸[1]。PRRSV侵入豬體內(nèi)后，首先侵襲肺泡巨噬細(xì)胞和肺內(nèi)皮巨噬細(xì)胞[2]，在細(xì)胞內(nèi)大量繁殖，最終導(dǎo)致巨噬細(xì)胞的崩解，產(chǎn)生炎癥，造成肺部組織肉樣化病變。目前對(duì)PRRS的診斷主要有臨床癥狀檢查、血清學(xué)診斷、分子生物學(xué)診斷及病理學(xué)診斷等多種方法[3]。對(duì)PRRSV的研究也主要集中在病毒基因組、流行病學(xué)調(diào)查及病毒遺傳變異演化方面[4]。而PRRSV的病毒含量對(duì)肺臟組織的損害程度是否呈現(xiàn)一定的相關(guān)性，研究較少。本實(shí)驗(yàn)采集4頭疑似感染PRRSV豬的肺臟組織，利用臨床剖檢、熒光定量RT-PCR、病理切片等方法，探究肺臟病變、顯微病變與PRRSV病毒含量的相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1 材料

通過(guò)豬場(chǎng)巡欄、豬只解剖，采集4只豬的肺臟病料送至杭州惠通豬醫(yī)院進(jìn)行檢測(cè)，豬只信息及肺臟組織臨床病變見(jiàn)表1、圖1。

1.2 方法

利用熒光定量RT-PCR方法檢測(cè)豬PRRSV的ORF5(M)基因，同時(shí)制作肺臟組織病理切片進(jìn)行顯微觀察。

表1 樣本基本信息

圖1 豬肺部組織剖檢情況

2 結(jié)果

2.1 剖檢結(jié)果

剖檢豬肺臟，案例一豬只肺臟組織大體無(wú)病變，案例二肺臟輕微病變，案例三肺臟中度病變，案例四肺臟嚴(yán)重間質(zhì)性病變。

2.2 熒光定量RT-PCR結(jié)果

案例一、二、三、四熒光定量RT-PCR結(jié)果見(jiàn)表2，圖2。

表2 ORF5(M)基因的循環(huán)數(shù)及拷貝數(shù)

注：M為陽(yáng)性對(duì)照；1、2、3分別為同一組織不同采樣點(diǎn)樣品

圖2 ORF5(M)基因熒光定量RT-PCR峰圖

2.3 病理切片檢查

顯微鏡下觀察肺臟組織病理切片，結(jié)果見(jiàn)表3、圖3。

表3 肺臟病理學(xué)切片檢查結(jié)果

圖3 肺臟病理切片

3 討論

PRRSV入侵豬只后，常會(huì)引起豬只肺臟組織病變，臨床表現(xiàn)為豬只呼吸困難，伴有腹式呼吸。PRRSV的病毒含量與肺臟病變程度的高低是否呈現(xiàn)一定的相關(guān)性，猶未可知。本研究中案例二和案例四PRRSV病毒的Ct值相近，但肉眼與顯微鏡下觀察到后者的肺臟病變程度更為嚴(yán)重，其肺泡內(nèi)有大量嗜酸性壞死團(tuán)塊，并伴有纖維素性滲出，相較之下，案例二的剖檢病變和顯微病變都較輕。較之于案例二和案例四，案例一病毒的Ct值較高，其相應(yīng)的PRRSV的病毒含量較低，肉眼觀察未見(jiàn)明顯肺臟損傷，顯微檢查顯示肺臟正常。這種PCR陽(yáng)性但無(wú)明顯病理學(xué)變化的情況，很有可能是豬只還在受母源抗體保護(hù)，并未表現(xiàn)癥狀；或者PCR檢測(cè)出的是疫苗毒株，豬只并未真正受到PRRSV的侵襲。肺組織切片顯示，案例三豬只呈中度間質(zhì)性肺炎特征，但并未檢測(cè)到PRRSV的ORF5基因，PCR呈陰性，可能是PRRS的病毒血癥已經(jīng)結(jié)束，也不排除有其他病原導(dǎo)致肺臟出現(xiàn)類(lèi)似病變。

本試驗(yàn)結(jié)果表明，PRRSV的病毒含量與肺臟病變程度并無(wú)一定相關(guān)性，但顯微病變與剖檢病變的契合度較高。在PRRS及其它疾病的臨床診斷中，應(yīng)配合使用多種診斷方法，以防誤診，給后續(xù)的治療和預(yù)防工作帶來(lái)麻煩。