肖煒

伊犁州檢驗檢測認(rèn)證研究院 新疆伊犁 835000

進行微生物測試時，不確定度是與測量結(jié)果有很大相關(guān)性的重要參數(shù)。測量值的方差由不確定性的特征給出。合理準(zhǔn)確的測量和不確定性評估可提高測量結(jié)果的分析效率。近年來，在微生物檢測中已經(jīng)認(rèn)識到不確定性測試的重要性，因此越來越多地采用不確定性測試方法，并且在測試純凈飲用水中所含細(xì)菌菌落總數(shù)時，已經(jīng)應(yīng)用了不確定性測試以提高實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。

1 純凈飲用水中微生物群落總數(shù)的實驗

1.1 實驗原理

在有氧條件下，可通過營養(yǎng)瓊脂將水樣品在37℃下溫育48小時，最后可得到1ml水樣品中包含的菌落總數(shù)。實驗是在實驗室中按照規(guī)定的方法進行的，每天都有其他人對樣品進行測試，在測試過程中，必須并行測試每個樣品，并且此測試必須由同一對象執(zhí)行。在檢測到指定數(shù)量的組后，可以應(yīng)用不確定性測試來評估菌落總數(shù)[1]。

1.2 實驗材料

實驗正常進行的基本保證是實驗材料，在該實驗中，菌落總數(shù)被評估為不確定性測試。所選的測試對象是水樣品，因此實驗中使用的材料是純凈飲用水。根據(jù)實驗設(shè)置，對不同類型的純凈飲用水進行采樣以確保測試結(jié)果的公平性。

1.3 實驗設(shè)備

在進行實驗的過程中，必須使用適當(dāng)?shù)脑O(shè)備來完成實驗。用于凈化飲用水中細(xì)菌總數(shù)檢測的總細(xì)菌菌落計數(shù)實驗的主要實驗設(shè)備是高壓釜，電干燥箱，恒溫水浴。鍋和恒溫培養(yǎng)箱。通過實驗室設(shè)備和實驗室試劑的輔助功能，可以有效地對純凈飲用水樣品進行微生物檢測并確定菌落總數(shù)。

1.4 實驗方法

執(zhí)行檢查時，可靠的標(biāo)準(zhǔn)是《生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗方法微生物指標(biāo)》。第一步是徹底混合均勻水樣品，在抽吸時，進行無菌工作，然后將水樣品注入無菌鹽水試管中，混合并稀釋以形成以下濃度的稀釋液：1:10之后，將稀釋劑滴回到無菌鹽水試管中以形成1:100稀釋液，重復(fù)最后一步一次以獲得1:1000稀釋液，然后將這些稀釋液置于適當(dāng)?shù)臈l件下。保留以備將來使用。稀釋完成后，取兩個無菌板，注入原液樣品和稀釋劑的稀釋液，以吸入兩種液體。將營養(yǎng)瓊脂倒入每個培養(yǎng)皿中，并在約45℃的溫度下注入營養(yǎng)瓊脂，并立即搖晃以確保充分混合[2]。同時，還需要控制營養(yǎng)瓊脂空白。瓊脂變硬后，將板翻轉(zhuǎn)過來并將其放入培養(yǎng)箱中。保溫箱的溫度約為36℃，溫度范圍為上下1℃。潛伏時間為48。培養(yǎng)完成后，進行菌落計數(shù)，將稀釋倍數(shù)在30至300范圍內(nèi)的菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)和平均菌落數(shù)的結(jié)果作為檢測結(jié)果，最后根據(jù)相應(yīng)的數(shù)學(xué)模型完成計算。

2 菌落總數(shù)的不確定度檢驗

2.1 分析來源

檢查純凈飲用水中的菌落總數(shù)時，有許多不確定性來源。測試環(huán)境，培養(yǎng)時間，樣品均勻性，人數(shù)等可重復(fù)性都是高度可重復(fù)的，導(dǎo)致存在不確定性。培養(yǎng)條件，培養(yǎng)時間和培養(yǎng)溫度具有一定的公差，差異的存在會帶來不確定性。進行采樣時，對水進行采樣可以確定體積。當(dāng)在該影響下稀釋水樣品時，稀釋量也不確定。實驗室工具和實驗室試劑（例如吸管，培養(yǎng)基等）會帶來不確定性。樣品存儲條件，時間和溫度均已存儲。如果條件的類別同時改變到兩個條件，則菌落總數(shù)將在一定程度上受到影響，并且存在不確定性。不確定性包括兩種類型：A和B。在實際的微生物測試中，組分B對合成不確定度的貢獻相對較小，主要原因是重復(fù)測量。執(zhí)行不確定性測試時要考慮的不確定性的主要來源是可重復(fù)性。也就是說，在評估不確定性時，我們使用統(tǒng)計方法（A型）來執(zhí)行。

2.2 不確定性評估

根據(jù)上述實驗方法，每天對15個水樣進行集落總數(shù)測試，每個水樣形成兩個測試結(jié)果，取每個對數(shù)以計算兩個對數(shù)的平均值。殘差平方和的形成。檢測完成后，需要進行計算。計算中使用的公式為貝塞爾公式。首先計算合并樣品的標(biāo)準(zhǔn)偏差，然后計算檢測結(jié)果的不確定度并擴大不確定度。計算擴展不確定性時，需要根據(jù)該值查詢T分布，最后可以確定擴展不確定性值[4]。表達測試結(jié)果時，如果選擇兩次測量的對數(shù)平均值，則不確定度范圍應(yīng)在數(shù)值減去平均值與相加的平均值之間。一般來說，這種方法在任何時候都適用于不確定性的測量范圍。例如，在15個選定的水樣本中，測量后3次的對數(shù)平均值為1.874，根據(jù)貝塞爾公式計算的對數(shù)平均值為0.078，因此不確定性范圍為：1.796至1.952。

在平板測試中，如果測試結(jié)果大于10CFU/mL，則分布狀態(tài)變?yōu)槠狈植?，必須將?shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為log才能使測量結(jié)果呈正態(tài)分布。此后，分發(fā)狀態(tài)接近正常。在不確定性測試的情況下，評估不確定性最合適的方法是可重復(fù)和可再現(xiàn)的數(shù)據(jù)，因為微生物測試的嚴(yán)格性不強，并且不屬于統(tǒng)計和計量類別。準(zhǔn)確評估不確定度可提高微生物檢測結(jié)果的科學(xué)性和公正性。實際上，對于不確定性測試的使用，相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)和要求中有明確的規(guī)定，在以下三種情況下，微生物測試報告應(yīng)包括不確定性測試。當(dāng)應(yīng)用程序的有效性或類型與不確定性相關(guān)時，第二個原因是客戶明確建議進行不確定性測試，第三個原因是不確定性在結(jié)果混合時會產(chǎn)生一定的影響。在水微生物測試中，不確定度測試是重要的部分，可以看出，為了提高測試結(jié)果的準(zhǔn)確性，有必要增加其在常規(guī)實驗中的應(yīng)用[3]。

3 結(jié)語

當(dāng)檢測純凈飲用水中細(xì)菌菌落的總數(shù)時，我們采用不確定度測試方法來提高測試結(jié)果的準(zhǔn)確性。隨著微生物檢測的發(fā)展，檢測結(jié)果將繼續(xù)增加。這樣，必須更新不確定度范圍，以提高不確定度評估的準(zhǔn)確性并確保微生物檢測結(jié)果。這非?？茖W(xué)，可以提高結(jié)果的可用性。目前，不確定度測試在測試中的應(yīng)用仍較少，不確定性測試在不斷深入研究過程中的應(yīng)用將得到加深，同時水質(zhì)細(xì)菌群落總數(shù)的確定將進一步加深可靠、公平。