高海娟， 劉澤東， 孫 蕊， 吳建新

（1.黑龍江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)分院，黑龍江齊齊哈爾161005；2.內(nèi)蒙古自治區(qū)退耕還林和外援項(xiàng)目管理中心，內(nèi)蒙古呼和浩特010020）

苜蓿（Medicago sativa L.）有“牧草之王”的美稱，其莖葉柔軟，營(yíng)養(yǎng)豐富，粗蛋白質(zhì)含量高，適口性好，是家畜最為理想的飼草飼料，尤其對(duì)于奶牛，可以顯著提高奶產(chǎn)量和乳品質(zhì)。 青貯是苜蓿商品化開發(fā)利用的主要方式之一， 相對(duì)于生產(chǎn)干草其具有不受環(huán)境條件限制， 可最大限度地減少葉片的損失， 且能夠保持青鮮飼料鮮態(tài)和大部分營(yíng)養(yǎng)， 調(diào)節(jié)飼料季度與年度間供應(yīng)平衡（陳喜梅等，2017）。 但因苜蓿青貯飼料中蛋白質(zhì)含量高，緩沖能值高，碳水化合物含量低，乳酸菌數(shù)量少， 直接青貯很難獲得優(yōu)質(zhì)青貯飼料（高海娟等，2015）。 苜蓿半干青貯或通過添加乳酸菌、 纖維素酶等添加劑進(jìn)行青貯能夠有效的改善青貯效果（徐煒等，2014；葛劍等，2014；王瑩等，2010）。 本試驗(yàn)以含水量為65.79%的紫花苜蓿為原料，添加纖維素酶（0.3 g/kg）進(jìn)行袋裝青貯，通過測(cè)定干物質(zhì)含量、粗蛋白質(zhì)、中性洗滌纖維、酸性洗滌纖維、氨態(tài)氮含量、pH、有機(jī)酸含量（乳酸、乙酸、丙酸、丁酸）等技術(shù)指標(biāo)研究不同青貯時(shí)期（45、60、75、90 d）的營(yíng)養(yǎng)成分和發(fā)酵品質(zhì)的動(dòng)態(tài)變化。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 青貯原料：選擇頭茬初花期的紫花苜蓿， 來自黑龍江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)分院科研基地。

試驗(yàn)藥品及用品：纖維素酶、聚乙烯袋、吸塵器、噴壺等。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 試驗(yàn)采用完全隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)，設(shè)計(jì)45、60、75、90 d 共4 個(gè)貯藏時(shí)間處理， 每個(gè)處理3 次重復(fù)。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 青貯飼料的制作 初花期用鐮刀刈割苜蓿，留茬高度6 cm，將刈割后的苜蓿在晾曬場(chǎng)進(jìn)行晾曬后采用鍘草機(jī)將苜蓿切割成3 ～4 cm 長(zhǎng)的小段。 青貯原料多點(diǎn)采樣帶回實(shí)驗(yàn)室，烘干法測(cè)定含水量。 將青貯原料與添加劑纖維素酶（0.3 g/kg）攪拌均勻后裝入大聚乙烯青貯袋（0.7 m×1.2 m）中，每袋20 kg，邊裝邊踩實(shí)壓緊，最后用吸塵器抽空氣后用繩子扎緊，透明膠帶纏繞封口，室溫條件下避光保存。

1.3.2 青貯飼料營(yíng)養(yǎng)成分的測(cè)定 烘干法60 ℃下烘干24 h 測(cè)定苜蓿原料含水量；烘干法105 ℃烘干8 h 測(cè)定干物質(zhì)含量； 采用改良式凱氏定氮法測(cè)定粗蛋白質(zhì)含量；采用Van Soest 的方法測(cè)定中性洗滌纖維和酸性洗滌纖維含量。

1.3.3 青貯飼料發(fā)酵品質(zhì)指標(biāo)測(cè)定 取苜蓿青貯樣品，準(zhǔn)確稱取20 g 后，用剪刀剪短，長(zhǎng)度1 cm左右，加180 mL 去離子水搖勻，放入4 ℃恒溫冰箱中24 h， 取出搖勻用4 層粗紗布過濾燒杯中，再用定量濾紙過濾到三角瓶中， 濾液測(cè)定pH，取測(cè)完pH 的濾液使用ICS-1100 離子色譜儀（色譜柱型號(hào)：AS23； 進(jìn)樣量：25 μL； 流動(dòng)相：4.5 mmol Na2CO3，0.8mmol NaHCO3；流速：1 mL/min）檢測(cè)濾液中的乳酸、乙酸、丙酸、丁酸含量，采用苯酚-次氯酸鈉比色法測(cè)定氨態(tài)氮含量。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析 采用Excel 和SAS 9.0 對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行計(jì)算和方差分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 青貯飼料的營(yíng)養(yǎng)成分 青貯后45、60、75、90 d 的營(yíng)養(yǎng)成分各項(xiàng)指標(biāo)，結(jié)果如表1 所示。

表1 不同貯藏天數(shù)苜蓿青貯飼料營(yíng)養(yǎng)成分%

2.1.1 干物質(zhì)含量 不同貯藏天數(shù)苜蓿青貯飼料的干物質(zhì)含量為32.39% ～32.73%， 方差分析各處理間差異不顯著（P ＞0.05）。

2.1.2 粗蛋白質(zhì)含量 不同貯藏天數(shù)苜蓿青貯飼料的粗蛋白質(zhì)含量為14.76% ～18.62%， 其中貯藏60 d 粗蛋白質(zhì)含量最高，為18.62%，貯藏90 d最低，為14.76%，貯藏45 d 和75 d 粗蛋白質(zhì)分別為15.17%和15.36%，方差分析結(jié)果，貯藏60 d 青貯料粗蛋白質(zhì)含量與其他貯藏時(shí)間粗蛋白質(zhì)含量差異均顯著（P ＜0.05），貯藏45、75、90 d 之間粗蛋白質(zhì)含量差異不顯著（P ＞0.05）。

2.1.3 中性洗滌纖維含量 不同貯藏天數(shù)青貯料的中性洗滌纖維含量為32.25% ～41.64%， 貯藏45 d 中性洗滌纖維含量為32.25%， 貯藏60 d 中性洗滌纖維含量升高至41.64%， 貯藏75 d 和95 d后降到37.30%和38.19%。 方差分析結(jié)果， 貯藏60 d 中性洗滌纖維含量與貯藏45、75 d 和95 d中性洗滌纖維含量差異均顯著（P ＜0.05）。

2.1.4 酸性洗滌纖維含量 貯藏45 d 的青貯飼料酸性洗滌纖維含量為28.44%， 貯藏60 d 酸性洗滌纖維含量降至26.43%， 隨著貯藏天數(shù)的增加， 酸性洗滌纖維含量呈明顯的上升趨勢(shì)， 貯藏75 d 和95 d 升高到32.28%和32.57%。 方差分析結(jié)果， 貯藏45、60 d 和貯藏75、95 d 的酸性洗滌纖維含量差異性顯著 （P ＜0.05）， 貯藏45 d 和60 d 的酸性洗滌纖維含量差異不顯著 （P ＞0.05）， 貯藏75 d 和貯藏95 d 酸性洗滌纖維含量差異不顯著（P ＞0.05）。

2.2 青貯飼料的發(fā)酵品質(zhì) 青貯后45、60、75、95 d 的發(fā)酵品質(zhì)指標(biāo)，結(jié)果如表2 所示。

表2 不同貯藏天數(shù)苜蓿青貯飼料發(fā)酵品質(zhì)

2.2.1 氨態(tài)氮含量 不同貯藏天數(shù)青貯料氨態(tài)氮含量為4.15% ～9.30%，其中貯藏45 d 和60 d 氨態(tài)氮含量比較偏低，分別為4.16%和4.15%，隨著貯藏時(shí)間的推移，氨態(tài)氮含量明顯增加，貯藏75 d 增加到8.14%，貯藏90 d 高達(dá)9.30%，說明蛋白質(zhì)降解的速度加快。方差分析，貯藏75、90 d 氨態(tài)氮含量與貯藏45、60 d 差異顯著（P ＜0.05）。

2.2.2 有機(jī)酸含量 不同貯藏時(shí)間青貯料乳酸含量為2.92% ～4.01%，青貯60 d 乳酸含量最高，為4.01%，青貯90 d 最低，為2.92%，青貯45、75 d 乳酸含量分別為3.70%和3.92%， 隨著貯藏時(shí)間的推移， 乳酸含量呈現(xiàn)先升高后降低的規(guī)律。 方差分析， 青貯90 d 乳酸含量與青貯45、60、75 d 乳酸含量差異性顯著（P ＜0.05），其他貯藏時(shí)間之間乳酸含量差異性不顯著（P ＞0.05）。

苜蓿青貯45、60、75、90 d 乙酸含量分別為0.86%、0.72%、0.76%、0.75%，方差分析，不同貯藏時(shí)間乙酸含量差異不顯著（P ＞0.05）。

不同貯藏時(shí)間苜蓿青貯料丙酸含量為0.55%～0.73%，青貯60 d 丙酸含量最低，為0.55%，青貯75 d 丙酸含量最高，為0.78%，青貯45、90 d 丙酸含量分別為0.70%和0.73%，方差分析，各貯藏時(shí)間丙酸含量差異不顯著（P ＞0.05）。

青貯45、60 d 苜蓿沒有檢測(cè)到丁酸， 青貯75 d丁酸含量為0.06%，青貯90 d 丁酸含量為0.19%，方差分析，青貯90 d 丁酸含量與青貯45、60、75 d差異顯著（P ＜0.05），其他貯藏時(shí)間之間丁酸含量差異不顯著（P ＞0.05）。

3 結(jié)論與討論

原料的含水量是苜蓿青貯效果的關(guān)鍵因素之一， 過高和低水分青貯效果均不佳。 陳喜梅等（2017） 研究發(fā)現(xiàn)， 苜蓿青貯最適含水量約為70%；聶柱山（1990）研究表明，青貯原料水分含量控制在60% ～68%為宜。 本試驗(yàn)中苜蓿青貯原料含水量為65.79%，這個(gè)含水量保證了青貯飼料發(fā)酵的品質(zhì)。

添加纖維素酶能夠有效改善苜蓿青貯飼料的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和發(fā)酵品質(zhì)。 鄧艷芳等（2008）報(bào)道，在青貯過程中添加纖維素酶能將青貯原料的結(jié)構(gòu)性碳水化合物降解為單糖或雙糖，為青貯發(fā)酵提供更多可供利用的底物，加速乳酸菌在青貯早期的繁殖， 使青貯pH 快速降低。 萬里強(qiáng)等（2011）研究表明，苜蓿青貯時(shí)添加纖維素酶能降低青貯料的氨態(tài)氮含量和保存更多的粗蛋白質(zhì)以及生成更多的乳酸。薛艷林等（2010）應(yīng)用纖維素酶進(jìn)行青貯發(fā)現(xiàn)，苜蓿青貯飼料的pH 和氨態(tài)氮含量，極顯著低于對(duì)照組（P ＜0.01），乳酸含量顯著高于對(duì)照組（P ＜0.05），發(fā)酵品質(zhì)和飼用價(jià)值均得到改善。 本青貯試驗(yàn)中添加纖維素酶，添加量為0.3 g/kg。

不同貯藏天數(shù)粗蛋白質(zhì)含量為14.76% ～18.62%， 貯藏60 d 粗蛋白質(zhì)含量最高，為18.62%， 貯藏60 d 與其他3 個(gè)貯藏時(shí)間粗蛋白質(zhì)含量差異均顯著（P ＜0.05）；不同貯藏天數(shù)青貯料的氨態(tài)氮含量為4.15% ～9.30%，貯藏45 d和60 d 氨態(tài)氮含量低， 分別為4.16%和4.15%，隨著青貯天數(shù)的增加， 氨態(tài)氮含量明顯增加，75 d增加到8.14%，90 d 后高達(dá)9.30%； 苜蓿青貯料pH 隨著青貯天數(shù)的延長(zhǎng)呈現(xiàn)由高到低再升高的過程，貯藏60 d 的pH 最低，為4.54；乳酸含量隨著貯藏時(shí)間的推移， 呈現(xiàn)先升高后降低的規(guī)律，青貯60 d 乳酸含量最高，為4.01%。青貯45、60 d 的苜蓿沒有檢測(cè)到丁酸，青貯75、90 d 丁酸含量分別為0.06%和0.19%。

粗蛋白質(zhì)含量、氨態(tài)氮含量、pH、乳酸含量、丁酸含量是評(píng)判苜蓿青貯品質(zhì)主要關(guān)鍵性指標(biāo)。青貯飼料粗蛋白質(zhì)含量越高， 氨態(tài)氮含量越低，說明青貯飼料中蛋白質(zhì)及氨基酸的分解程度越低，青貯質(zhì)量越好。 乳酸含量越高，丁酸含量越低，青貯以乳酸發(fā)酵為主，pH 也就越低，青貯質(zhì)量也就越好（高海娟等，2017；許慶方等，2006；郭旭生等，2005）。本試驗(yàn)中選取4 個(gè)貯藏時(shí)間中貯藏60 d 粗蛋白質(zhì)含量和乳酸含量最高，pH 和氨態(tài)氮含量最低，沒有檢測(cè)到丁酸。綜合各項(xiàng)指標(biāo)，貯藏60 d 紫花苜蓿青貯飼料的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和發(fā)酵品質(zhì)好于其他3 個(gè)貯藏時(shí)間。