陳 林，郭建鵬 *

（1.延邊大學(xué)藥學(xué)院，延吉133002；2.長(zhǎng)白山生物資源與功能分子教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室（延邊大學(xué)），延吉133002）

黑參為五加科植物人參 （Panax ginseng C.A.Mey）經(jīng)九蒸九曝、反復(fù)蒸制烘干炮制得到的一種新型人參炮制品[1～2]。人參作為吉林省地理標(biāo)志性產(chǎn)品[3]，近年來在國(guó)內(nèi)外健康產(chǎn)品市場(chǎng)上受到重視，多種人參炮制品成為功能食品的主要原料[4～5]。人參炮制品目前主要有生曬參、紅參、大力參、活性參、糖參和蜜制參等，且相應(yīng)的分等質(zhì)量及皂苷類成分含量測(cè)定均有標(biāo)準(zhǔn)[6～13]。黑參作為人參的一種新炮制品，國(guó)內(nèi)外對(duì)其標(biāo)準(zhǔn)及相關(guān)研究鮮有報(bào)道?，F(xiàn)查閱相關(guān)文獻(xiàn)，將國(guó)內(nèi)外對(duì)黑參的炮制工藝、化學(xué)成分、藥理作用及檢測(cè)方法進(jìn)行總結(jié)，為黑參的標(biāo)準(zhǔn)修訂和黑參的進(jìn)一步開發(fā)研究以及其相關(guān)產(chǎn)品的研究提供理論依據(jù)。

1 炮制工藝

目前為止，國(guó)內(nèi)外尚無公認(rèn)的黑參炮制工藝規(guī)范，不同的研究者采用了不同的炮制工藝。黑參最廣泛采用的炮制工藝是傳統(tǒng)中藥材的制作方法之一“九蒸九曝”，將鮮人參用蒸汽或其他方法進(jìn)行蒸煮后晾干 （在98℃下蒸制 2～3 h，然后曝干），反復(fù)進(jìn)行9次。蒸制過程中的溫度和壓力是影響黑參品質(zhì)的重要因素。袁媛等[14]采用超高效液相色譜法分析黑參制作過程中人參皂苷的含量變化，發(fā)現(xiàn)黑參在不同蒸制溫度、蒸制次數(shù)下非極性成分逐漸增多，極性成分逐漸減少。黑參中的有效成分會(huì)因?yàn)榧庸し椒ǖ牟煌兴D(zhuǎn)變。Ban等[15]采用響應(yīng)面法優(yōu)化黑參的炮制工藝，得出黑參最佳蒸制溫度是113.04℃、蒸制18 h、干燥溫度為100℃、干燥8.03 h，這種炮制方法可增加酸性多糖與人參皂苷Rg3含量，減少苯并芘的含量。Sun等[16]將白參在98℃蒸制3 h相同條件重復(fù)9次，發(fā)現(xiàn)此炮制方法可增加低極性人參皂苷含量。Lee等[17]將人參在120℃下蒸制3次，每次0.5 h，然后將蒸制過的人參在葡萄酒中浸泡24 h，此炮制方法可增加稀有人參皂苷Rg3含量。Jo等[18]研究表明，黑參最適蒸制溫度是80～120℃，干燥溫度低于50℃，并且對(duì)黑參制作過程中苯并芘的安全含量進(jìn)行研究，研究發(fā)現(xiàn)干燥溫度會(huì)影響苯并芘的含量。劉沖[19]先用納豆菌對(duì)人參進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵完成后對(duì)發(fā)酵參在高壓蒸制下連續(xù)循環(huán)5次，得到黑參，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與白參相比黑參中稀有人參皂苷Rg2、Rg3、Rg6、Rh1含量明顯增加。張雪倫[20]將干燥好的人參浸潤(rùn)在大蒜汁中12 h，放在壓力蒸汽滅菌器中高溫高壓蒸制2 h，減壓干燥，在40℃下干燥12 h，得到復(fù)方黑參，結(jié)果表明該復(fù)方黑參中稀有人參苷 Rh1、Rg3、Rh2及達(dá)瑪烷苷元 PPT、PPD含量較高。

2 化學(xué)成分

2.1 皂苷類

目前對(duì)黑參化學(xué)成分的研究多集中在皂苷類，且多為三萜類皂苷。按苷元的結(jié)構(gòu)分為三類：一為原人參二醇類，主要有人參皂苷 Rb1、Rc、Rh2、Rg3；二為原人參三醇類，主要有人參皂苷 Re、Rf、Rg1；三為齊墩果酸型，主要有人參皂苷Rh3等。Kim認(rèn)為黑參中主要人參皂苷為 Rg3、Rh2、Rh1[21]。 但 Seo認(rèn)為 Rg3、Rk1、Rg5才是黑參主要成分[22]。人參在炮制過程中反復(fù)蒸曝導(dǎo)致常規(guī)皂苷成分被轉(zhuǎn)化[23]，致使黑參中的人參皂苷大部分轉(zhuǎn)化為稀有皂苷。Bai-Shen Su[24]檢測(cè)到黑參中有19種人參皂苷，發(fā)現(xiàn)其中RF4、Rg6、RF4、Rg6、Rk3、Rh4、20（S）-Rg3、20（R）-Rg3、20（S）-Rs3、20 （R）-Rs3、Rk1、Rg5、Rs4 和 Rs5 都是稀有人參皂苷。由于稀有皂苷含量增加，同傳統(tǒng)的白參和紅參相比，黑參有可能具有更強(qiáng)的抗腫瘤、抗炎、抗氧化、降低血糖等活性[23]。

2.2 多糖類

多糖作為生命體的主要能源物質(zhì)，參與各種生命活動(dòng)。目前國(guó)內(nèi)外對(duì)黑參多糖的研究較少，而對(duì)其他人參類多糖的研究相對(duì)較多。目前研究大多是根據(jù)人參多糖或者人參其他炮制品多糖來研究黑參多糖的成分。人參中含有38%的水溶性多糖和8%～10%的堿性多糖，主要含有葡萄糖、阿拉伯糖、半乳糖醛酸及半乳糖、少量鼠李糖和部分未知的戊糖衍生物等[25]。而黑參受溫度等其它因素的影響，其多糖含量和種類也會(huì)發(fā)生顯著變化。喬雪[26]對(duì)黑參多糖的總含量進(jìn)行測(cè)定，發(fā)現(xiàn)黑參總糖含量比紅參中的總糖含量少，而紅參中總糖的含量比人參中總糖含量少。雖然黑參中的總糖含量有所降低，但是糖類仍然是黑參中主要的有效成分或輔助成分，具有增強(qiáng)免疫力、抗衰老、抗氧化等作用[27]。目前對(duì)黑參多糖的研究主要集中在含量測(cè)定方面，對(duì)黑參多糖的具體成分分析還有待深入。

2.3 其他成分

黑參的化學(xué)成分除了皂苷、多糖類外，還含有揮發(fā)油、氨基酸、有機(jī)酸及酯類、含氮化合物、甾醇及其苷類、維生素類、黃酮類、微量元素等其他成分，但目前對(duì)其報(bào)道相對(duì)較少。由于炮制方法不同，與紅參相比黑參中的某些化學(xué)成分減少，如微量元素僅有18種，其含量順序?yàn)镸o

3 藥理作用

3.1 抗腫瘤作用

黑參中具有的抗腫瘤活性的成分多為人參次苷及苷元，目前研究最多的是Rg3、Rh2、Rh1及其苷元，其在促進(jìn)機(jī)體抗腫瘤免疫方面起著顯著作用。Zhang等[28]研究表明，人參皂苷 Rg3聯(lián)合恩度（Endostar，EN）對(duì)乳腺癌（Breast carcinoma，BC）有更好的治療效果。Liu 等[29]研究表明，20（S）-Rh2 對(duì)前列腺癌細(xì)胞有抑制作用。廖丹瓊等[30]分別用MTT法和BrdU免疫熒光法檢測(cè)人參皂苷Rg3對(duì)C6膠質(zhì)瘤腫瘤干細(xì)胞增殖的影響，經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)人參皂苷Rg3對(duì)腦膠質(zhì)瘤腫瘤干細(xì)胞的增殖具有明顯的抑制作用。黑參的抗腫瘤作用主要是通過其皂苷成分抑制腫瘤血管生成、誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞分化、降低腫瘤細(xì)胞侵襲能力等途徑來實(shí)現(xiàn)[30]。

3.2 增強(qiáng)免疫作用

黑參中較多化學(xué)成分均有增強(qiáng)免疫作用，如皂苷、多糖等。有研究報(bào)道黑參提取物能增加IL-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-10 和 TNF-α 的數(shù)量及 NK 細(xì)胞活性，減少由LPS引起的iNOS、COX-1和COX-2的表達(dá)，從而起到提高機(jī)體免疫的作用[22]。張才軍等[31]研究發(fā)現(xiàn)人參皂苷Rhl作用于免疫功能低下的小鼠后，各劑量組小鼠的脾和胸腺指數(shù)、MФ吞噬功能、T淋巴細(xì)胞增殖作用均明顯提高。宋利華等[32]對(duì)不同酸性的人參多糖進(jìn)行分級(jí)，發(fā)現(xiàn)了各個(gè)級(jí)別的人參多糖能不同程度的促進(jìn)小鼠脾淋巴細(xì)胞的增殖，提高機(jī)體免疫功能。史得君等[33]研究了黑參對(duì)昆明種雄性小鼠的抗疲勞作用。研究表明，黑參延長(zhǎng)了小鼠爬桿時(shí)間，增加了小鼠肝糖原含量等，產(chǎn)生了顯著的抗疲勞效果。

3.3 抗血栓作用

黑參中某些特有化學(xué)成分具有改善血液流變學(xué)、抑制血栓形成、改善微循環(huán)和抗凝血等作用。如李世征等[34]觀察黑參對(duì)急性血瘀模型大鼠血液流變性和實(shí)驗(yàn)性血栓形成以及小鼠出凝血時(shí)間和耳廓微循環(huán)的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)黑參能夠抑制血栓形成，改善血液流變學(xué)，其機(jī)制可能是通過內(nèi)源性凝血途徑、外源性凝血途徑、凝血共同途徑以及降低血漿中纖維蛋白原的含量來抑制血液的凝固，從而達(dá)到抗血栓的效果。

3.4 其他作用

除此之外，黑參中其他特有的化學(xué)物質(zhì)也具有多種藥理活性，如抗炎、抗應(yīng)激、抗氧化和神經(jīng)保護(hù)等[35～36]作用。Lee等[37]研究發(fā)現(xiàn)黑參通過抗氧化作用能抑制乙醇引起的胚胎畸形。還有研究表明黑參中的人參皂苷Rg3、Rg5、Rk1通過抑制膽堿酯酶，可修復(fù)由乙醇引起的記憶損傷，起到神經(jīng)保護(hù)的作用，用來治療阿爾茨海默氏癥[38]。張晶等[39]研究發(fā)現(xiàn) 20（R）-人參皂苷Rg3、20（S）-人參皂苷 Rg3、人參皂苷 Rg5 和 Rk1 能提高小鼠的認(rèn)知能力，具有益智活性。Kim等[40]發(fā)現(xiàn)黑參提取物有比較多的生物活性，服用黑參提取物可以顯著降低血糖，可以用來開發(fā)治療糖尿病的新藥。高戎等[41]認(rèn)為人參皂苷Rg5可以改善膿毒癥引起急性肝損傷時(shí)的炎癥，發(fā)揮肺保護(hù)作用。目前針對(duì)黑參藥理作用的研究多集中在藥效學(xué)范疇，對(duì)于黑參中特定的功能分子及其作用機(jī)理還有待于深入挖掘。

4 檢測(cè)方法

近年來，黑參中皂苷類成分的分析檢測(cè)方法發(fā)展迅速， 如 TLC、HPLC-UV、HPLC-ELSD、HPLC-MS 等均有報(bào)道。有研究表明，有些結(jié)構(gòu)相似的或紫外吸收差的人參皂苷，不適用于HPLC-UV法[42～44]。與之相比，HPLC-ELSD法只與溶質(zhì)濃度有關(guān)而與光學(xué)性質(zhì)無關(guān)，可以用于各種人參制品中人參皂苷的檢測(cè)[45]。孫佰申等[1]采用HPLC-ELSD對(duì)“九蒸九曝”法炮制前后樣品中皂苷單體含量進(jìn)行比較分析，同時(shí)測(cè)定了7個(gè)極性和12個(gè)非極性皂苷單體含量。結(jié)果表明，與白參相比，黑參中非極性皂苷和奧克梯隆型（Ocotillol type）皂苷顯著增加，而極性皂苷顯著減少。Fuzzati等[46]用HPLC-ELSD法檢測(cè)出亞洲人參中25種人參皂苷，而Sun等[47]認(rèn)為Fuzzati等人對(duì)黑參中一些極性低的皂苷成分沒有檢測(cè)到，他們加以改正，同時(shí)測(cè)定了黑參中19個(gè)人參皂苷成分。目前對(duì)于黑參中皂苷類成分檢測(cè)方法較完善，而對(duì)于其他活性成分的檢測(cè)方法還有待于進(jìn)一步探討。

5 結(jié)語與展望

通過對(duì)黑參的炮制工藝、化學(xué)成分、藥理作用及檢測(cè)方法等方面的綜述，發(fā)現(xiàn)在該領(lǐng)域尚存在一些問題。a.黑參的原料、炮制工藝等尚無統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，亟待建立；b.對(duì)黑參中稀有人參皂苷的體內(nèi)代謝研究匱乏，已有研究尚無法闡明其皂苷在體內(nèi)完整代謝的過程及作用機(jī)制；c.對(duì)黑參除皂苷外其他化學(xué)成分和標(biāo)志性成分的研究還不夠全面，缺乏對(duì)檢測(cè)分析方法的深入探討；d.以活性成分為依據(jù)的黑參質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)鮮有研究。

作者在對(duì)吉林省“延邊黑參”進(jìn)行研究的過程中（延邊黑參是以吉林人參為原料，以傳統(tǒng)“九蒸九曝”炮制工藝制得，通體色澤烏黑、質(zhì)地堅(jiān)韌），發(fā)現(xiàn)延邊黑參富含人參皂苷Rg3，含量超過吉林省地標(biāo)的2倍以上[2]。在對(duì)延邊黑參中標(biāo)志成分稀有皂苷Rg5、Rk1進(jìn)行含量測(cè)定時(shí)，考察了超聲法、回流法、藥典人參提取方法3種樣品前處理方法，結(jié)果表明以超聲法作為前處理法，樣品中待測(cè)成分含量最高且前處理時(shí)間最短，此結(jié)果可為黑參地方標(biāo)準(zhǔn)修訂提供理論依據(jù)。

應(yīng)加強(qiáng)黑參的炮制工藝、化學(xué)成分和藥理作用等方面的探索研究，將幾方面的研究結(jié)果系統(tǒng)化，建立完整的質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。該質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)與主要藥效相關(guān)，從藥效出發(fā)，選擇對(duì)應(yīng)的活性成分作為指標(biāo)，圍繞活性成分的組成和含量制訂多指標(biāo)體系。可結(jié)合中醫(yī)的“五色五形”理論（黑色能入腎經(jīng)，益腎、強(qiáng)腎，故黑參可能具有補(bǔ)腎、壯腎之功效），重點(diǎn)開展黑參對(duì)腎病的藥理作用研究。此外，還應(yīng)將黑參與鮮參、白參、紅參等五加科人參屬的植物進(jìn)行化學(xué)成分、藥理活性等的橫向?qū)Ρ?，為進(jìn)一步研究及開發(fā)黑參及其相關(guān)人參產(chǎn)品提供理論依據(jù)。