楊振國　謝道燕　達(dá)愛斯　羅雁婕

摘要：為篩選出對朱砂葉螨具有增效作用的炔螨特與苯丁錫混劑的最佳配比，以玻片浸漬法測定各配比混劑對朱砂葉螨的殺螨活性，并以共毒因子法和共毒系數(shù)法評價(jià)其增效程度。炔螨特、苯丁錫對朱砂葉雌成螨處理后24 h的LC50分別為435.38、93.26 mg/L，二者混劑的增效配比介于1 ∶0.09～0.83之間，SPSS擬合出其混劑的共毒因子（y）與混劑中炔螨特含量（x）的數(shù)學(xué)模型，為y=-1 231.14x2+1 616.29x-378.46（F=13.47，P=0.01，r=0.90），進(jìn)一步確定其最佳的質(zhì)量濃度配比為33 ∶17，該配比的致死中濃度（LC50）為102.90 mg/L，共毒系數(shù)為188.28，其對朱砂葉螨的毒力是炔螨特的4倍以上。炔螨特與苯丁錫以質(zhì)量濃度比為33 ∶17混合表現(xiàn)出顯著的增效作用，具有一定的開發(fā)應(yīng)用價(jià)值。

關(guān)鍵詞：朱砂葉螨;炔螨特;苯丁錫;農(nóng)藥復(fù)配劑;共毒系數(shù);共毒因子;多作用機(jī)制;高效復(fù)配殺螨劑

中圖分類號： S482.3文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A

文章編號：1002-1302（2019）19-0106-04

收稿日期：2018-07-09

基金項(xiàng)目：國家自然科學(xué)基金（編號：31560520）;云南省科技計(jì)劃重點(diǎn)新產(chǎn)品項(xiàng)目（編號：2015BB009）。

作者簡介：楊振國（1986—），男，云南硯山人，碩士，助理研究員，主要從事桑樹病蟲害防控研究。E-mail：zhenguoyang@qq.com。

通信作者：羅雁婕，博士，研究員，主要從事農(nóng)業(yè)昆蟲與害蟲防治研究。E-mail：yanjieluo@126.com。

朱砂葉螨（Tetranychus cinnabarinus）廣泛分布于世界溫帶地區(qū)，是溫室的重要雜食性害螨之一，危害100余種作物，個(gè)體小、發(fā)育快、繁殖力強(qiáng)且易產(chǎn)生抗藥性等基本生態(tài)對策，使朱砂葉螨成為難以防治的有害生物之一[1-3]。目前，朱砂葉螨的防治仍以化學(xué)藥劑防治為主[4]，長期單一的或單一作用機(jī)制的化學(xué)藥劑防治致使害螨的抗藥性日益加重。為緩解害蟲害螨對單一藥劑的抗藥問題，目前主要趨向于開發(fā)農(nóng)藥的復(fù)配劑[5-6]。將不同作用機(jī)制的殺螨劑混合使用或輪換使用，是延緩害螨抗藥性及其治理的重要手段，同時(shí)具有降低毒性和成本的作用，具有增效作用的復(fù)配劑不僅能夠降低用藥量，還能增強(qiáng)防治效果，更可以延緩害螨抗藥性[7-8]。因此，開展多作用機(jī)制的高效復(fù)配殺螨劑研究對害螨的防治及抗藥性治理具有重要意義。

炔螨特屬亞硫酸酯類殺螨劑，自1964年推廣應(yīng)用以來，由于其具有殺若螨、成螨活性高、廣譜低毒、持效期長、對天敵無害、不容易產(chǎn)生抗性等諸多優(yōu)點(diǎn)，在農(nóng)藥殺螨劑市場上經(jīng)久不衰，現(xiàn)在已成為世界上使用范圍廣、生產(chǎn)應(yīng)用大噸位的殺螨劑品種[9]，可用于防治二斑葉螨（T. urticae）、蘋果全爪螨（Panonychus ulmi）、 太平洋葉螨（T.[KG*2]pacificus）、 柑橘全爪螨（P. citri）等葉螨，但其害螨對炔螨特的抗性也有報(bào)道[10-14]。炔螨特對害螨主要是胃毒和觸殺，其主要作用機(jī)制是抑制線粒體Mg2+-ATPase，作用位點(diǎn)位于F0亞基部位，抑制線粒體呼吸作用，阻礙害蟲體內(nèi)神經(jīng)細(xì)胞線粒體功能的發(fā)揮，影響其呼吸作用及能量轉(zhuǎn)換[15]。苯丁錫是感溫型抑制神經(jīng)組織的有機(jī)錫殺螨劑，主要起觸殺作用，對幼螨、成螨和若螨殺傷力較強(qiáng)，對螨卵的殺傷力不大，對有機(jī)磷、有機(jī)氯殺蟲劑有抗藥性的害螨無交互抗藥性[16]，可防治朱砂葉螨、柑橘葉螨、柑橘銹螨、蘋果葉螨、茶橙癭螨、茶短須螨等農(nóng)業(yè)害螨[17-18]。苯丁錫的殺螨活性與溫度有直接的關(guān)系，當(dāng)氣溫在22 ℃以上時(shí)，藥效增強(qiáng);當(dāng)氣溫在15～22 ℃以下時(shí)藥性降低;當(dāng)氣溫在 15 ℃ 以下時(shí)，藥效較差，不宜在冬季使用[19]。對高等動(dòng)物、鳥類、蜜蜂低毒，對害螨天敵捕食螨、食蟲瓢蟲、草蛉等較安全，但對魚類等水生生物高毒[20]。鑒于炔螨特與苯丁錫在殺螨機(jī)制上的差異性，研究二者不同配比混劑對朱砂葉螨的聯(lián)合作用，并篩選其最佳的增效配比，以期獲得一種多作用機(jī)制的高效復(fù)配殺螨劑。

1 材料與方法

1.1 供試螨類

朱砂葉螨采自云南省蒙自市桑園內(nèi)，在智能人工氣候室內(nèi)（26±1） ℃、RH 60%～80%、光周期14 L ∶10 D條件下，用蛭石盆栽四季豆苗飼養(yǎng)，擴(kuò)繁后作為供試螨類。

1.2 供試藥劑

90%炔螨特，購自山東青島農(nóng)藥廠;98%苯丁錫，由浙江華興化工有限公司提供。試驗(yàn)前，稱取適量原藥置于容量瓶內(nèi)，用丙酮充分溶解，并定容為10 000 mg/L母液，將其放入 4 ℃ 冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆?。毒力測定時(shí)，通過初篩試驗(yàn)，選定5個(gè)死亡率介于16%～84%之間的濃度進(jìn)行測定，用0.1%吐溫-80水溶液將母液稀釋成既定濃度作為毒力測定的供試液，并以0.1%吐溫-80水溶液作對照。

1.3 殺螨活性測定方法

試驗(yàn)于2016年4—6月在云南省蒙自市草壩鎮(zhèn)進(jìn)行，殺螨活性測定參照聯(lián)合國糧農(nóng)組織（FAO）推薦的玻片浸漬法[21]。將朱砂葉螨雌成螨挑在貼有雙面膠的玻片上，在溫度（26±1） ℃、RH 60%～80%的環(huán)境下放置4 h，用雙目解剖鏡檢查，剔除死亡和不活潑的個(gè)體，記錄活螨數(shù)。將玻片粘有螨蟲的一端浸入供試液中5 s后取出，用濾紙將螨體周圍的藥液吸盡。每種濃度和對照處理120頭成螨，試驗(yàn)重復(fù)3次。處理后同樣條件下培養(yǎng)，24 h后檢查害螨死亡情況。用毛筆輕觸螨體，以其螯肢不動(dòng)者為死亡。

1.4 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.4.1 混劑增效配比的篩選

首先測定炔螨特和苯丁錫的致死中濃度（LC50），然后以各自的LC50劑量為基準(zhǔn)，將2種藥液按其LC50藥液按體積比為10 ∶0、9 ∶1、8 ∶2、7 ∶3、6 ∶4、5 ∶5、4 ∶6、3 ∶7、2 ∶8、1 ∶9、0 ∶10混合，配制出不同比例的混劑，測定各組配比對朱砂葉螨處理24 h后的死亡率。用SPSS軟件經(jīng)Duncans新復(fù)極差法比較各處理之間的效果差異，若某一配比組合的死亡率在統(tǒng)計(jì)上顯著大于2個(gè)單劑在LC50值時(shí)的死亡率，則表示該配比組合具有增效作用。另外，采用共毒因子（co-toxicity factor，CTF）法判斷其增效程度，當(dāng)共毒因子比顯著大于20為增效作用;顯著小于-20為拮抗作用;介于-20～20之間為相加作用[22]。

共毒因子法（CTF）=（實(shí)際死亡率-預(yù)期死亡率）/預(yù)期死亡率×100。

1.4.2 混劑增效最佳配比的確定

參照王小藝等提出的方法[23]，以某一單劑在混劑中的含量為自變量x，其相對應(yīng)的校正毒力比為因變量y，利用SPSS軟件進(jìn)行數(shù)學(xué)模型擬合。一般其基本關(guān)系基本符合二次曲線方程y=ax2+bx+c[24]，再根據(jù)此方程求出y的極值和此時(shí)對應(yīng)的x，即可得某配比時(shí)單劑的含量，從而求得最佳配比。

進(jìn)一步確定最佳配比，則是對擬合方程計(jì)算的最佳配比及相鄰的配比進(jìn)行混劑毒力測定，并求出共毒系數(shù)（co-toxicity coefficient，CTC）及增效倍數(shù)。共毒系數(shù)大于120為增效作用，小于80為拮抗作用，介于80～120之間為相加作用[25]。其共毒系數(shù)的計(jì)算公式如下（P為單劑A和B在混劑中的含量）：

毒力指數(shù)（TI）=標(biāo)準(zhǔn)藥劑LC50/供試藥劑LC50×100;

混劑的實(shí)測毒力指數(shù)（ATI）=標(biāo)準(zhǔn)藥劑LC50/混劑LC50×100;

混劑的理論毒力指數(shù)（TTI）=TIA×PA+TIB×PB;

混劑的共毒系數(shù)=ATI/TTI×100。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

所有試驗(yàn)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)與分析均采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行，各處理間的顯著性差異比較采用Duncans新復(fù)極差檢驗(yàn)，毒力回歸分析用Finney概率值分析法。

2 結(jié)果與分析

2.1 單劑對朱砂葉螨的毒力

采用玻片浸漬法測定炔螨特、苯丁錫對朱砂葉螨雌成螨的室內(nèi)毒力，其藥劑處理24 h的LC50值分別為435.38、93.26 mg/L;LC90值分別為867.49、242.16 mg/L（表1）。

2.2 混劑對朱砂葉螨的增效配比篩選

比較炔螨特與苯丁錫不同配比混劑對朱砂葉螨雌成螨處理后24 h的殺螨活性，結(jié)果（表2）表明，處理4～處理10的實(shí)際死亡率在0.05水平下顯著大于預(yù)期死亡率，表現(xiàn)為增效作用，其中處理7、處理8、處理9的實(shí)際死亡率顯著大于其他處理的實(shí)際死亡率，其實(shí)際死亡率分別為73.87%、75.29%、71.66%;同時(shí)以共毒因子法比較可知，處理4～處理10的共毒因子也顯著大于20，表現(xiàn)為增效作用，其中處理7和處理8的共毒因子分別為167.64和142.09，即處理7和處理8增效最明顯。因此，炔螨特與苯丁錫的增效配比介于 1 ∶（0.09～0.83）之間，且1 ∶0.31附近增效最明顯。

2.3 混劑的最佳配比模型擬合

采用SPSS軟件擬合混劑中炔螨特的含量與混劑對朱砂葉螨雌成螨的共毒因子間的數(shù)學(xué)模型，其模型為一元二次方程：y=-1 231.14x2+1 616.29x-378.46[F（2，6）=13.47，P=0.01，r=0.90]，該模型的方差分析結(jié)果表明，在0.01水平下，模型擬合度合格[F（2，6）>F0.01]，可以用于描述混劑中炔螨特的含量與混劑對朱砂葉螨雌成螨的共毒因子間的關(guān)系。采用求極值法獲得如下結(jié)果：當(dāng)x為0.656 4時(shí)，y的極大值為152.02，即混劑中炔螨特的含量為65.64%時(shí)，共毒因子最大，為152.02，此時(shí)，炔螨特與苯丁錫的配比為0.656 4 ∶（1-0.656 4）=0.656 4 ∶0.343 6≈33 ∶17。因此，炔螨特與苯丁錫對朱砂葉螨的聯(lián)合作用最佳理論配比為33 ∶17。

2.4 混劑對朱砂葉螨的聯(lián)合作用最佳配比篩選

獲得理論最佳配比33 ∶17后，進(jìn)一步測定了該配比與其相連配比33 ∶14、33 ∶15、33 ∶16、33 ∶18、33 ∶19、33 ∶20對朱砂葉螨雌成螨的毒力，以共毒系數(shù)法評價(jià)其增效程度，篩選出最佳配比，其結(jié)果如表4所示。在藥后24 h，炔螨特與苯丁錫配比以33 ∶14、33 ∶15、33 ∶16、33 ∶17、33 ∶18、33 ∶19、33 ∶20 的LC50分別為145.74、139.04、104.85、102.90、112.84、128.64、151.05 mg/L，以炔螨特為標(biāo)準(zhǔn)藥劑計(jì)算的共毒系數(shù)分別為142.74、145.89、188.93、188.28、168.13、144.60、120.89，各配比混劑的共毒系數(shù)均大于100，表現(xiàn)為增效作用，其中配比33 ∶16、33 ∶17增效顯著。配比 33 ∶16、33 ∶17混劑對朱砂葉螨的毒力分別是炔螨特對朱砂葉螨毒力的4.15、4.23倍（表3）。因此，炔螨特與苯丁錫混劑對朱砂葉螨的聯(lián)合作用最佳增效配比為33 ∶（16～17）。

3 討論與結(jié)論

朱砂葉螨的抗藥性不斷的增強(qiáng)主要取決于其復(fù)雜的抗性基因[26-27]，多作用機(jī)制的殺蟲劑不僅可以克服藥劑對單一靶標(biāo)的刺激，還可以在某一靶標(biāo)產(chǎn)生抗性后繼續(xù)具有殺蟲活性。何林等報(bào)道了甲氰菊酯與阿維菌素混用能有效延緩朱砂葉螨抗性的進(jìn)化，而噠螨靈與阿維菌素混用、輪用都能有效延緩朱砂葉螨對二者的抗性進(jìn)化[28]。有研究報(bào)道，溫室月季上的二斑葉螨對苯丁錫的抗性倍數(shù)達(dá)1 494倍，且抵抗性害螨也會(huì)迅速產(chǎn)生抗性[29]。因此，為了延緩害螨的抗性、降低防治成本、延長殺螨劑的使用壽命，將有效的殺螨劑進(jìn)行復(fù)配勢在必行。本研究中炔螨特與苯丁錫以33 ∶16、33 ∶17混配對朱砂葉螨的毒力分別是炔螨特對朱砂葉螨毒力的4.15、4.23倍，具有顯著的殺螨活性。此外，炔螨特因?qū)倚Q安全，長期用于防治桑園害螨，而苯丁錫對家蠶也為低毒[30]，該復(fù)配劑有望更好地應(yīng)用于桑園害螨防治中，具有開發(fā)應(yīng)用潛力。

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