(紅河學(xué)院生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院， 云南 蒙自 661199)

萬(wàn)壽菊(TageteserectaL.)為菊科(Asteraceae)萬(wàn)壽菊屬(Tagetes)植物，原產(chǎn)墨西哥，中國(guó)各地均有栽培。萬(wàn)壽菊栽培品種極多，有觀賞型萬(wàn)壽菊、色素萬(wàn)壽菊和藥用萬(wàn)壽菊[1]。藥用萬(wàn)壽菊根提取液對(duì)斜紋夜蛾幼蟲、蚜蟲、菜青蟲等農(nóng)業(yè)害蟲毒殺作用最強(qiáng)[2]。萬(wàn)壽菊中所含的葉黃素可以預(yù)防多種慢性疾病，并且具有抗癌、抗心血管疾病和提高機(jī)體免疫力等功能[3]。種子是萬(wàn)壽菊最主要的繁殖材料，其質(zhì)量直接影響藥材的安全性、穩(wěn)定性和有效性。至今未見關(guān)于萬(wàn)壽菊種子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的報(bào)道，因此，本研究針對(duì)萬(wàn)壽菊種子質(zhì)量檢驗(yàn)的問(wèn)題進(jìn)行了研究，以期為制定萬(wàn)壽菊種子質(zhì)量檢驗(yàn)規(guī)程提供參考。

1 材料與方法

1.1 材 料

種子購(gòu)買于廣東和福建，為當(dāng)年采收的種子，經(jīng)鑒定為菊科萬(wàn)壽菊屬的萬(wàn)壽菊種子。

1.2 方 法

1.2.1扦 樣

根據(jù)市場(chǎng)流通、交易量和送驗(yàn)要求確定萬(wàn)壽菊種子批的最大重量和送驗(yàn)樣品的最小重量，扦取送驗(yàn)樣品和試驗(yàn)樣品按照《農(nóng)作物種子質(zhì)量規(guī)程扦樣》(GB/T 3543.2-1995)執(zhí)行[4]。凈度分析不少于2 500粒種子，送驗(yàn)樣品量應(yīng)不少于凈度分析10倍量的原則，確定凈度分析及送驗(yàn)樣品的最小量。

1.2.2凈度分析

依據(jù)《農(nóng)作物種子質(zhì)量檢驗(yàn)規(guī)程凈度分析》(GB/T 3543.3)執(zhí)行[4]。從扦樣的種子中稱取12 g種子試樣3份，分別置于潔凈的白瓷盤中，用鑷子將種子進(jìn)行逐一鑒別，將凈種子和雜質(zhì)、異作物種子分開，用萬(wàn)分之一天平，分別稱重，計(jì)算種子凈度。

種子凈度(%)=[凈種子質(zhì)量/(凈種子質(zhì)量+異作物種子質(zhì)量+雜質(zhì)質(zhì)量)]×100%。

1.2.3千粒重測(cè)定

采用百粒法、五百粒法和千粒法測(cè)定種子的千粒重，并計(jì)算變異系數(shù)。

1.2.4種子真實(shí)性測(cè)定

每個(gè)產(chǎn)地隨機(jī)取100粒凈種子，4次重復(fù)，進(jìn)行逐一鑒別。

1.2.5種子含水量的測(cè)定

采用高恒溫烘干法(133±2)℃和低恒溫烘干法(105±2)℃測(cè)定種子含水量，每個(gè)產(chǎn)地重復(fù)3次。具體參照《農(nóng)作物種子檢驗(yàn)規(guī)程水分測(cè)定》(GB/T 3543.6)執(zhí)行。

1.2.6生活力的測(cè)定

采用氯化三苯基四氮唑法(TTC法)測(cè)定種子生活力。萬(wàn)壽菊用蒸餾水室溫浸泡過(guò)夜，置于35 ℃恒溫培養(yǎng)箱中，采用0.1%、0.3%和0.5%濃度的TTC染色液分別染色1、3、6、12 h，每個(gè)處理50粒，3個(gè)重復(fù)。計(jì)算有生活力種子的百分率。

1.2.7發(fā)芽率的測(cè)定

1) 種子浸泡時(shí)間的選擇。種子先用0.1%的次氯酸鈉溶液浸泡10 min，用蒸餾水沖洗4～5遍，然后設(shè)置4個(gè)不同的浸種時(shí)間0、12、24、36 h，放到濾紙上發(fā)芽，置于25 ℃恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行發(fā)芽實(shí)驗(yàn)。每個(gè)處理100粒，3次重復(fù)。

2) 發(fā)芽床的選擇。選用紙上、紙間、紗上、紗間和沙上共5種發(fā)芽床，每個(gè)發(fā)芽床3次重復(fù)，每個(gè)重復(fù)100粒，放入25 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。計(jì)算發(fā)芽率、發(fā)芽勢(shì)和發(fā)芽指數(shù)。當(dāng)種子突破種皮、胚根伸長(zhǎng)到種子一半長(zhǎng)度的時(shí)候記為發(fā)芽。種子發(fā)芽數(shù)達(dá)高峰時(shí)計(jì)算發(fā)芽勢(shì)。

發(fā)芽率(%)=(發(fā)芽種子總數(shù)/供試種子數(shù))×100%；

發(fā)芽勢(shì)(%)=(發(fā)芽高峰發(fā)芽種子數(shù)/供試種子數(shù))×100%。

2 結(jié)果與分析

2.1 扦 樣

參照《農(nóng)作物種子檢驗(yàn)規(guī)程》(GB/T 3543.2)的標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。凈度分析樣品最少10 g (不少于2 500粒)，送驗(yàn)樣品不低于凈度分析的10倍量，不少于100 g。

2.2 凈度分析

從表1可看出，2個(gè)產(chǎn)地樣品的種子凈度均達(dá)90%以上，各組試樣的增失值均小于5%，說(shuō)明此方法可行。

表1 萬(wàn)壽菊種子的精度分析

產(chǎn)地總重/g凈種子/g其他種子/g 雜質(zhì)/g凈種子/%增失值/%廣東12.06710.8050.180.78891.782.43福建12.02710.7300.1270.93790.981.94

2.3 千粒重分析

采用3種不同方法分析萬(wàn)壽菊種子質(zhì)量，結(jié)果見表2。百粒法測(cè)定的結(jié)果差異大，2個(gè)產(chǎn)地的變異系數(shù)均大于5%，五百粒法和千粒法測(cè)定的變異系數(shù)均在5%以內(nèi)，測(cè)定值均有效，但考慮萬(wàn)壽菊種子小，且千粒法測(cè)定的種子質(zhì)量更為恒定，變異系數(shù)小，因此，建議采用千粒法分析種子的質(zhì)量。

表2 萬(wàn)壽菊種子質(zhì)量測(cè)定方法的比較

產(chǎn)地 千粒法 五百粒法 百粒法 重量/g變異系數(shù)/%重量/g變異系數(shù)/%重量/g變異系數(shù)/%廣東3.6600.221.7582.050.3595.43福建3.5740.211.7491.150.3545.38

2.4 真實(shí)性分析

萬(wàn)壽菊種子呈線形，基部縮小，黑色或褐色，長(zhǎng)8～13 mm，被短毛，冠毛有1～2個(gè)長(zhǎng)芒和2～3個(gè)短而鈍的鱗片。

2.5 水分測(cè)定

采用低恒溫和高恒溫烘干2種方法測(cè)定種子的含水量，結(jié)果見表3。高恒溫烘干7 h后，2個(gè)產(chǎn)地的種子失水量基本恒定。低恒溫烘干法在前14 h內(nèi)，種子的含水量變化差異大，而烘16 h和18 h差異很小，幾乎恒定。由于低恒溫烘干需要時(shí)間較長(zhǎng)，因此建議采用高恒溫烘干法烘干7 h為宜。

表3 萬(wàn)壽菊種子含水量的測(cè)定

烘干方法烘干時(shí)間/h產(chǎn)地廣東福建高恒溫烘干(133±2)℃110.869.35211.0910.04311.1910.12411.2910.2511.3610.29611.5110.32711.6110.44811.6410.47911.6610.49低恒溫烘干(105±2)℃410.219.81610.699.94810.8810.211011.0810.331211.2310.471411.4210.591611.5410.621811.5510.63

2.6 種子生活力測(cè)定

采用3種不同濃度的TTC溶液對(duì)種子的胚部進(jìn)行染色，設(shè)置4個(gè)染色時(shí)間，采用SPSS 21.0 Duncan法進(jìn)行多重比較分析。從表4可看出，廣東產(chǎn)地的種子，采用0.3%TTC染色6 h的效果最好，生活力達(dá)90%，與其他處理間達(dá)顯著性差異。福建產(chǎn)地的種子，采用0.3%TTC染色6 h和12 h的效果最好，二者間無(wú)顯著性差異。因此，建議采用0.3%TTC染色6 h為宜。

2.7 發(fā)芽率的測(cè)定

1) 浸種時(shí)間的確定。從表5可看出，不同的浸種時(shí)間，種子的發(fā)芽率和發(fā)芽勢(shì)均不同，最高的為未浸種的種子，最低的為浸種36 h的種子。因此，浸種對(duì)萬(wàn)壽菊種子萌發(fā)的影響較大，應(yīng)選擇未浸種的種子進(jìn)行發(fā)芽試驗(yàn)。

2) 種子最佳發(fā)芽溫度的確定。本研究設(shè)置了4個(gè)發(fā)芽溫度，分析溫度對(duì)萬(wàn)壽菊種子萌發(fā)的影響。從表6可以看出，在25 ℃時(shí)種子的發(fā)芽率和發(fā)芽勢(shì)最高，與其余3個(gè)溫度達(dá)顯著性差異，因此 25 ℃為萬(wàn)壽菊種子的最佳萌發(fā)溫度。

表4 萬(wàn)壽菊種子生活力的測(cè)定

產(chǎn)地染色時(shí)間/hTTC濃度% 0.1 0.3 0.5 廣東153.3±3.1g61.3±4.2f57.3±3.1fg364.6±4.2ef73.3±3.1cd60.6±3.1f674.6±3.1cd90.0±4.0a69.3±3.1de1280±2.0bc82.6±3.1b71.3±3.1de福建158±2.0d62±4.0d59.3±3.1d363.3±4.2d76.7±3.1bc61.3±3.1d675.3±3.1bc89.3±3.1a72.0±2.0c1280.7±3.1b86±2.0a73.7±4.0bc

表5 不同浸種時(shí)間對(duì)種子發(fā)芽的影響

產(chǎn)地浸泡時(shí)間/h發(fā)芽率/%發(fā)芽勢(shì)/%廣東083.30±2.08a55.0±1.53a1276.00±1.73b53.7±2.89a2470.30±1.53c39.3±2.52b3666.30±3.05c36.3±1.53b福建090.0±0.58a79.0±2.15a1279.7±3.79b55.3±2.88b2473.7±1.00c43.0±1.53c3667.3±2.08d38.0±2.79d

表6 發(fā)芽溫度對(duì)萬(wàn)壽菊種子萌發(fā)的影響

產(chǎn)地發(fā)芽溫度/℃發(fā)芽率/%發(fā)芽勢(shì)/%廣東1561.7±3.51c28.0±1.00d2073.7±3.05b46.0±2.64c2586.0±1.53a69.3±2.58a3077.3±2.08b60.3±1.53b福建1563.0±2.65d28.7±1.53d2072.0±2.00c49.3±1.00c2587.3±1.53a71.0±1.53a3078.0±2.08b64.7±2.00b

表7 發(fā)芽床對(duì)萬(wàn)壽菊種子萌發(fā)的影響

產(chǎn)地發(fā)芽床發(fā)芽率/%發(fā)芽勢(shì)/%廣東紙上80.7±2.08a53.3±0.58b紙間68.3±3.00b44.7±2.52c紗上83.7±2.52a58.7±3.22a紗間71.7±2.52b45.0±2.65c砂上62.0±3.06c36.7±2.52d福建紙上83.0±2.52b64.0±2.89a紙間67.7±2.52d51.0±3.22b紗上87.3±1.53a62.0±0.58a紗間72.0±2.00c51.3±1.76b砂上66.0±1.53d43.7±1.33c

3) 種子最佳發(fā)芽床的確定。本研究選用5種發(fā)芽床，于25 ℃的恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行發(fā)芽試驗(yàn)，結(jié)果見表7。紗上和紙上的發(fā)芽率最高，與其他處理達(dá)顯著性差異，考慮濾紙比紗布的價(jià)格便宜又便于操作。因此，建議使用紙上作為發(fā)芽床。

3 結(jié)果與討論

本試驗(yàn)以產(chǎn)于廣東和福建的萬(wàn)壽菊種子為材料，研究種子檢驗(yàn)的各項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)的適宜方法，初步建立了一套萬(wàn)壽菊種子檢驗(yàn)的方法(見表8)。

表8 萬(wàn)壽菊種子質(zhì)量檢驗(yàn)方法

檢測(cè)項(xiàng)目方法扦樣送驗(yàn)樣品不少于100g,凈度分析不少于10g凈度分析取樣品10g逐粒分析千粒重千粒法真實(shí)性外觀形態(tài)鑒定水分測(cè)定高恒溫烘干法,烘干7h生活力常溫浸種5h,0.3%TTC溶液中35℃避光染色6h發(fā)芽試驗(yàn)不浸種,濾紙為發(fā)芽床,25℃恒溫培養(yǎng),計(jì)數(shù)2～7d

中藥材品質(zhì)與產(chǎn)地具有很大的關(guān)系，同時(shí)也與種子的質(zhì)量相關(guān)，開展中藥材種子質(zhì)量研究，制定種子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，規(guī)范種植技術(shù)是保證藥材質(zhì)量的重要舉措[5]。近年來(lái)，對(duì)藥材品質(zhì)及種子質(zhì)量越來(lái)越關(guān)注，先后有許多關(guān)于中藥材如三七[6]、丹參[7]、大黃[8]、續(xù)斷[9]、川白芷[10]、益母草[11]、甘草[12]等種子的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究報(bào)道。本研究參照《農(nóng)作物種子檢驗(yàn)規(guī)程》制定了萬(wàn)壽菊種子的質(zhì)量檢驗(yàn)方法，為制定萬(wàn)壽菊種子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)奠定了基礎(chǔ)。