任 明，江夢(mèng)天，強(qiáng) 文，楊 茹

(武漢血液中心輸血研究室，湖北武漢 430030)

MNSs血型系統(tǒng)中M抗原在中國(guó)人中的比例為78.37%，抗-M是一個(gè)人血液中常見(jiàn)的抗體，多為自然產(chǎn)生，以IgM性質(zhì)為主，且只在低于37 ℃時(shí)有反應(yīng)，故臨床意義不大，部分為IgG性質(zhì)抗體，可導(dǎo)致嚴(yán)重的新生兒溶血病[1]，類(lèi)抗-M屬于類(lèi)特異性自身抗體，目前國(guó)內(nèi)報(bào)道較少。本實(shí)驗(yàn)室最近發(fā)現(xiàn)1例M抗原陽(yáng)性的急性白血病患者抗體鑒定呈現(xiàn)抗-M特異性，對(duì)其進(jìn)行抗體鑒定和相關(guān)特性檢測(cè)和分析，證實(shí)該抗體為IgG性質(zhì)冷反應(yīng)性類(lèi)抗-M特異性自身抗體，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 患者，男，2歲1月，2018年5月因全血細(xì)胞減少入院，診斷為急性淋巴細(xì)胞白血病，既往無(wú)輸血史。入院查得RBC 2.34×1012/L，Hb 59g/L，WBC 2.2×109/L，PLT 37×109/L，血型O型RhD陽(yáng)性，意外抗體篩查陽(yáng)性，送至本科室進(jìn)行檢測(cè)。

1.2試劑與儀器 單克隆抗-A、抗-B血清、IgM抗-D、抗-IgG,C3d抗人球蛋白試劑及篩選細(xì)胞均由上海血液生物技術(shù)有限公司提供；ABO反定型細(xì)胞為自制；其余還包括譜細(xì)胞、IgG抗-M、IgG抗-N(Sanquin)，2-巰基乙醇(2-Me，Baso)、低離子抗人球蛋白卡(Bio-Rad)。主要儀器包括KA-2200離心機(jī)(日本KUBOTA)、ID-Incubator 37 SI 達(dá)亞美卡式孵育器、ID-Centrifuge 12 SⅡ卡式離心機(jī)(Bio-Rad)和國(guó)華HH-60恒溫水浴箱。

1.3方法 采用試管法對(duì)患者ABO血型、MN表型定型；用鹽水介質(zhì)法及鹽水抗人球蛋白法進(jìn)行抗體特異性鑒定；吸收試驗(yàn)采用4 ℃吸收60 min，洗滌采用冰鹽水，放散試驗(yàn)采用56 ℃熱放散10 min；其他試驗(yàn)嚴(yán)格按照輸血技術(shù)操作規(guī)程[2]和相關(guān)試劑說(shuō)明書(shū)操作。

2 結(jié) 果

2.1血型鑒定 患者血型為O型RhD陽(yáng)性，MN血型表型為MN。

2.2直接抗人球蛋白試驗(yàn) 試管法多特異性抗人球蛋白為陰性；紅細(xì)胞4 ℃鹽水洗滌3次后，微柱凝集卡多特異性抗人球蛋白試驗(yàn)為弱陽(yáng)性(1+w)。

2.3意外抗體鑒定(患者血清和紅細(xì)胞放散液) 患者血清在室溫鹽水介質(zhì)中呈現(xiàn)抗-M特異性，37 ℃抗人球蛋白介質(zhì)中未檢出抗體；患者紅細(xì)胞56 ℃熱放散10 min，放散液利用抗人球蛋白微柱凝集卡分別在37 ℃和4 ℃進(jìn)行抗體鑒定，前者未檢出抗體，后者呈現(xiàn)抗-M特異性，見(jiàn)表1。

2.4抗體性質(zhì)檢測(cè) 將血清2-Me處理后，分別在4 ℃、室溫、37 ℃條件下孵育10 min，與MM表型譜細(xì)胞(MM cell)、NN表型譜細(xì)胞(NN cell)反應(yīng)，同時(shí)用原血清平行對(duì)照試驗(yàn)，提示該抗體為IgG性質(zhì)冷反應(yīng)性抗體，且最佳反應(yīng)溫度為4 ℃，其血清學(xué)反應(yīng)結(jié)果見(jiàn)表2。

2.5吸收放散試驗(yàn)鑒別類(lèi)特異性抗體 鹽水試管法條件下患者血清與NN cell在4 ℃呈現(xiàn)凝集反應(yīng)，而2-Me處理血清呈陰性反應(yīng)，說(shuō)明患者血清中存在冷抗體，故對(duì)患者血清2-Me處理后，利用MM、NN表型的紅細(xì)胞進(jìn)行吸收試驗(yàn)(4 ℃、60min)和放散試驗(yàn)(56℃、10min)；利用MM cell、NN cell檢測(cè)吸收后血清及放散液，顯示該抗體能被MM表型紅細(xì)胞吸收并放散，能被NN表型紅細(xì)胞吸收但放散液未檢出抗體，其血清學(xué)反應(yīng)結(jié)果見(jiàn)表3；利用譜細(xì)胞鑒定吸收后血清及放散液抗體特異性，抗體鑒定結(jié)果見(jiàn)表4。

表1 患者血清、紅細(xì)胞抗體放散液與譜細(xì)胞反應(yīng)格局

注：NS為鹽水介質(zhì)；卡為抗人球蛋白微柱凝膠卡；/表示該項(xiàng)無(wú)數(shù)據(jù)

表2 血清和2-Me在不同溫度下孵育處理后與表型譜細(xì)胞反應(yīng)的情況

表3 吸收后血清和放散液在不同溫度下的凝集情況

表4 吸收后血清和放散液與譜細(xì)胞反應(yīng)格局

注：反應(yīng)條件為微柱凝膠卡4 ℃孵育15 min

2.6輸血情況 篩選O型RhD陽(yáng)性、NN表型洗滌紅細(xì)胞，并經(jīng)鹽水介質(zhì)法、4 ℃抗人球蛋白微柱凝膠卡進(jìn)行交叉配血，且交叉配血相合的血液予以輸注，患者共輸血3次，每間隔10 d輸注1 U，其輸血前后相關(guān)指標(biāo)見(jiàn)表5。

表5 輸血前后RBC、HGB、HCT指標(biāo)對(duì)比

3 討 論

自身抗體多發(fā)生于自身免疫性疾病患者血清中，通常與篩選細(xì)胞、譜細(xì)胞呈現(xiàn)非特異性凝集；少數(shù)自身抗體特異性呈現(xiàn)與某一抗原明顯相關(guān)，涉及Rh、Kidd、Duffy、Kell、MNSs等血型系統(tǒng)，國(guó)內(nèi)報(bào)道其發(fā)生頻率為4.4%～8.6%[3-4]。自身抗體的特異性依據(jù)其是否能被抗體相對(duì)應(yīng)抗原陰性的紅細(xì)胞吸收，分為真實(shí)特異性自身抗體和類(lèi)特異性自身抗體，前者不能被抗體相對(duì)應(yīng)抗原陰性紅細(xì)胞吸收；后者不僅能被抗體相對(duì)應(yīng)抗原陽(yáng)性紅細(xì)胞吸收也能被抗原陰性紅細(xì)胞吸收，多為類(lèi)似Rh系統(tǒng)血型抗體，類(lèi)抗-M特異性較為少見(jiàn)[5]，國(guó)內(nèi)報(bào)道類(lèi)抗-M特異性自身抗體中，有1例產(chǎn)婦，1例新生兒，2例AIHA患者[6-9]。

本病例中，抗體鑒定呈現(xiàn)室溫反應(yīng)性抗-M特異性，但患者紅細(xì)胞MN表型鑒定為M抗原陽(yáng)性，且既往無(wú)輸血史，于是進(jìn)一步查找原因。該患者紅細(xì)胞直接抗人球蛋白試驗(yàn)呈弱陽(yáng)性，對(duì)紅細(xì)胞進(jìn)行放散試驗(yàn)后鑒定放散液抗體特異性，發(fā)現(xiàn)該抗體在4 ℃能檢出，而37 ℃不能檢出(表1)。該抗體2-Me處理前后與MM cell在室溫反應(yīng)凝集強(qiáng)度無(wú)明顯變化(表2)，說(shuō)明該抗體為IgG性質(zhì)且能在室溫鹽水介質(zhì)中發(fā)生凝集反應(yīng)，而在37 ℃、室溫、4 ℃條件下與MM cell反應(yīng)凝集強(qiáng)度依次增強(qiáng)，證實(shí)該抗體為冷反應(yīng)性抗體，且4℃反應(yīng)最佳。利用MM和NN表型的紅細(xì)胞分別對(duì)血清進(jìn)行吸收與放散試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)二者吸收后血清均未檢出抗體，表明該抗體能被MM和NN表型紅細(xì)胞吸收；MM表型紅細(xì)胞吸收后放散液與MM cell在4℃存在反應(yīng)性，其凝集強(qiáng)度1+(表3)，明顯弱于2-Me處理血清與MM cell在4 ℃的凝集強(qiáng)度3+(表2)，分析可能是抗體較弱且親和力較低，在洗滌過(guò)程中容易解離，從而導(dǎo)致凝集減弱，同理，NN表型紅細(xì)胞吸收后放散液與MM cell不反應(yīng)，亦可能是抗體在吸收放散試驗(yàn)過(guò)程中存在損失導(dǎo)致假陰性反應(yīng)。依據(jù)表3反應(yīng)情況，進(jìn)一步對(duì)吸收后血清及放散液利用抗人球蛋白凝膠卡在4 ℃進(jìn)行抗體鑒定，結(jié)果顯示NN表型紅細(xì)胞能吸收該抗體但放散液未檢出抗體，MM表型紅細(xì)胞能吸收并放散該抗體且抗體特異性為抗-M，進(jìn)一步驗(yàn)證了表2的結(jié)果，結(jié)合患者自身存在M抗原，綜合分析該抗體為IgG性質(zhì)冷反應(yīng)性類(lèi)抗-M特異性自身抗體。

該患者診斷為急性淋巴細(xì)胞白血病，未使用過(guò)免疫抑制劑類(lèi)藥物，推測(cè)可能由于疾病本身導(dǎo)致類(lèi)抗-M特異性自身抗體產(chǎn)生，該抗體與新生兒M溶血病中的抗-M抗體有相似之處[9-11]，二者相比，均屬于IgG性質(zhì)冷反應(yīng)性抗體，但本例患者標(biāo)本屬于類(lèi)特異性自身抗體，而M溶血病中的抗-M抗體則屬于同種免疫性抗體。針對(duì)此類(lèi)抗體，除了選擇不含抗體對(duì)應(yīng)抗原的血液外，還應(yīng)依據(jù)抗體特性，選擇該抗體最佳反應(yīng)條件進(jìn)行交叉配血試驗(yàn)，避免常規(guī)試驗(yàn)方法漏檢導(dǎo)致假陰性結(jié)果。本病例依據(jù)該抗體的特征，選擇O型RhD陽(yáng)性、NN表型且鹽水介質(zhì)及4 ℃抗人球蛋白凝膠卡交叉配血試驗(yàn)相合的洗滌紅細(xì)胞予以輸注，患者共輸血3次，每間隔10 d輸注1 U洗滌紅細(xì)胞，輸注后患者面色較輸注前紅潤(rùn)，RBC、HGB、HCT均明顯上升(表5)，取得了較好的輸注效果。